許亞曄,盧小冬,鄭章和,陳文列,3,4,林如輝,3,4,戚婉,葉秀芳,吳廣文,3,4,吳追樂(lè),3,4,劉獻(xiàn)祥,3,4
(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院影像科,福建 福州 350004;2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院,福州 350122;3.國(guó)家中醫(yī)藥三級(jí)科研實(shí)驗(yàn)室-中藥藥理(細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州 350122;4.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州 350122)
透骨消痛顆粒干預(yù)早中期兔骨關(guān)節(jié)炎的影像學(xué)觀察
許亞曄1,盧小冬2,鄭章和1,陳文列2,3,4,林如輝2,3,4,戚婉1,葉秀芳1,吳廣文2,3,4,吳追樂(lè)2,3,4,劉獻(xiàn)祥2,3,4
(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院影像科,福建 福州 350004;2.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院,福州 350122;3.國(guó)家中醫(yī)藥三級(jí)科研實(shí)驗(yàn)室-中藥藥理(細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州 350122;4.福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州 350122)
目的:應(yīng)用影像學(xué)方法,觀察透骨消痛顆粒對(duì)早中期兔骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)模型的干預(yù)作用,探討影像學(xué)技術(shù)在OA實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用價(jià)值。方法:新西蘭大白兔48只,采用改良Hulth法造模,動(dòng)物分成正常組、OA模型組、透骨消痛顆粒低、中、高劑量組和壯骨關(guān)節(jié)丸組,術(shù)后4、8、12、16周進(jìn)行影像學(xué)檢查(DR、CT、MRI),觀察關(guān)節(jié)間隙狹窄、軟骨下骨質(zhì)變化、骨贅、關(guān)節(jié)積液、關(guān)節(jié)軟骨等改變。結(jié)果:OA模型組各時(shí)段關(guān)節(jié)腔積液都較多,實(shí)驗(yàn)前期(4、8周)見(jiàn)軟骨面毛糙,軟骨下骨輕度增生硬化,實(shí)驗(yàn)后期(12、16周)軟骨凸凹不平,軟骨下骨增生硬化范圍增大,內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)間隙略狹窄;透骨消痛顆粒中、高劑量組各時(shí)段,關(guān)節(jié)腔積液都較模型組少,后期見(jiàn)軟骨面毛糙、軟骨下骨硬化,且高劑量組病變程度最輕。結(jié)論:透骨消痛顆粒能減輕OA關(guān)節(jié)及滑膜炎癥,延緩軟骨損傷,延遲軟骨下骨病變。MRI能較全面地觀察膝OA,對(duì)早期病變更敏感、更準(zhǔn)確。
骨關(guān)節(jié)炎;透骨消痛顆粒;磁共振成像;放射攝影術(shù)
骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是好發(fā)于中老年人的慢性退行性關(guān)節(jié)病,病理表現(xiàn)為軟骨退行性改變,關(guān)節(jié)積液、軟骨下骨硬化、骨贅形成、關(guān)節(jié)間隙狹窄等。影像學(xué)檢查是臨床診斷OA的主要方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改良Hulth法建立OA模型,采用DR、CT、MRI觀察兔OA的影像學(xué)改變,探討透骨消痛顆粒(Tougu Xiaotong Granule,TXG)對(duì)早中期OA關(guān)節(jié)炎癥和軟骨下骨的影響,并分析各影像技術(shù)在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用價(jià)值。
1.1實(shí)驗(yàn)材料及模型建立實(shí)驗(yàn)用新西蘭大白兔由上海醫(yī)用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[合格證書(shū)SCXK(滬)2002-0011],共48只,雌雄各半,6月齡,體質(zhì)量2.0~2.3 kg。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組,OA模型組,TXG低、中、高劑量組,壯骨關(guān)節(jié)丸組,每組8只。除正常組外均采用改良Hulth法造膝OA模型[1],每天驅(qū)趕兔子0.5 h。術(shù)后1周開(kāi)始給藥,連續(xù)15周。OA模型組給予TXG(含巴戟天、白芍、川芎等多味中藥)治療;壯骨關(guān)節(jié)丸組給予壯骨關(guān)節(jié)丸治療,各組給藥方式及給藥劑量見(jiàn)表1。
1.2儀器與方法實(shí)驗(yàn)對(duì)象均于術(shù)后4、8、12、16周行DR、CT、MRI檢查。采用Philips D-22335 DR機(jī),管電壓65 kV,管電流500 mA,曝光時(shí)間12 ms,攝兔膝關(guān)節(jié)正、側(cè)位片。Siemens Somatom 4排CT機(jī),120 kV、50 mA連續(xù)掃描,行骨窗及軟組織窗重建。Siemens Avanto 1.5 T MRI行TSE T2WI脂肪抑制序列矢狀位、冠狀位掃描,掃描參數(shù):TR/TE:3 160 ms/13 ms,層厚3 mm,零間距,F(xiàn)OV 120 mm×120mm,矩陣256 mm×256 mm。
表1 動(dòng)物給藥方式及給藥劑量
1.3影像學(xué)評(píng)估
1.3.1軟骨下骨質(zhì)硬化依據(jù)Kellgren-Lawrence分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[2],自擬標(biāo)準(zhǔn),即無(wú)膝OA影像學(xué)特征(-);可疑關(guān)節(jié)間隙狹窄(joint space narrowing,JSN)和可能的骨贅唇樣變(+);明顯骨贅和可能存在的JSN(++);多發(fā)骨贅、明確的JSN、硬化和可能的骨性畸形(+++);大骨贅、典型JSN、嚴(yán)重硬化和絕對(duì)骨性畸形(++++)。
1.3.2關(guān)節(jié)軟骨改變參照江浩[3]的膝關(guān)節(jié)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),自擬標(biāo)準(zhǔn)對(duì)膝關(guān)節(jié)軟骨的改變進(jìn)行評(píng)價(jià),即:軟骨形態(tài)、信號(hào)正常(-);軟骨水腫、腫脹1層及以下(+);軟骨水腫、腫脹1層以上(++);軟骨表面不規(guī)則(+++),軟骨表面不規(guī)則,輕度變?。?+++);軟骨凹凸不平,明顯變?。?++++)。
1.3.3關(guān)節(jié)積液變化采用參照江浩[3]的膝關(guān)節(jié)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),自擬標(biāo)準(zhǔn)對(duì)膝關(guān)節(jié)積液進(jìn)行評(píng)價(jià),即:正常(-);局限性滑膜炎(+);滑膜炎,關(guān)節(jié)囊內(nèi)沒(méi)有積液(++);滑膜炎伴關(guān)節(jié)囊少量積液(+++),滑膜炎伴關(guān)節(jié)囊中等量積液(++++);滑膜炎伴關(guān)節(jié)囊大量積液(+++++)。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用等級(jí)資料多樣本秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1軟骨下骨質(zhì)改變見(jiàn)表2。
表2 不同時(shí)間段各組軟骨下骨質(zhì)變化
16周后觀察OA模型組,TXG低、中、高劑量組,壯骨關(guān)節(jié)丸組的軟骨下骨質(zhì)變化見(jiàn)表3。
表316 周后各組軟骨下骨質(zhì)變化只
經(jīng)秩和檢驗(yàn),結(jié)果顯示P<0.05,提示軟骨下骨質(zhì)不全相同,需兩兩比較,OA模型組與TXG低劑量組(Z=-2.578,P<0.05),TXG中劑量組(Z=-2.922,P<0.01),TXG高劑量組(Z=-3.475,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-3.276,P<0.01)的軟骨下骨質(zhì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;低劑量組和中劑量組(Z=-0.968,P>0.05)的軟骨下骨質(zhì)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與高劑量組(Z=-2.805,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-2.199,P<0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中劑量組與高劑量組(Z=-2.372,P<0.05)的軟骨下骨質(zhì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高劑量組和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-0.800,P>0.05)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.2膝關(guān)節(jié)軟骨的改變見(jiàn)表4。
表4 不同時(shí)間段各組關(guān)節(jié)軟骨變化
16周后觀察OA模型組,TXG低、中、高劑量組,壯骨關(guān)節(jié)丸組的關(guān)節(jié)軟骨變化見(jiàn)表5。
表516 周后各組關(guān)節(jié)軟骨變化只
經(jīng)秩和檢驗(yàn),結(jié)果顯示P<0.05,提示關(guān)節(jié)軟骨變化不全相同,需兩兩比較,OA模型組與TXG低劑量組(Z=-2.922,P<0.01),中劑量組(Z=-3.229,P< 0.01),高劑量組(Z=-3.486,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-3.486,P<0.01)的關(guān)節(jié)軟骨差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;低劑量組和中劑量組(Z=-1.000,P>0.05)的關(guān)節(jié)軟骨差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與高劑量組(Z=-2.922,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-2.578,P<0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中劑量組與高劑量組(Z=-2.713,P<0.05)的關(guān)節(jié)軟骨差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高劑量組和對(duì)照組(Z=-0.968,P>0.05)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.3膝關(guān)節(jié)積液的變化見(jiàn)表6。
表6 不同時(shí)間段各組關(guān)節(jié)積液變化
16周后觀察OA模型組,TXG低、中、高劑量組,壯骨關(guān)節(jié)丸組的關(guān)節(jié)積液變化,結(jié)果見(jiàn)表7。
表716 周后各組關(guān)節(jié)積液變化只
經(jīng)秩和檢驗(yàn),結(jié)果顯示P<0.05,提示關(guān)節(jié)積液變化不全相同,需兩兩比較,OA模型組與TXG低劑量組(Z=-1.062,P>0.05)的關(guān)節(jié)積液差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與中劑量組(Z=-3.245,P<0.01),高劑量組(Z=-3.664,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-3.475,P<0.01)的關(guān)節(jié)軟骨差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;低劑量組和中劑量組(Z=-2.567,P<0.05),高劑量組(Z=-3.626,P<0.01)和壯骨關(guān)節(jié)丸組(Z=-3.070,P<0.01)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中劑量組與高劑量組(Z=-2.954,P<0.01)的關(guān)節(jié)軟骨差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高劑量組和對(duì)照組(Z=-2.236,P<0.05)的關(guān)節(jié)積液差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3種影像學(xué)技術(shù)綜合觀察,正常組關(guān)節(jié)面平滑,關(guān)節(jié)邊緣整齊,關(guān)節(jié)內(nèi)無(wú)游離體,關(guān)節(jié)間隙正常。模型組、TXG低劑量組在實(shí)驗(yàn)前期(4、8周)即可見(jiàn)軟骨下骨硬化、軟骨面粗糙;后期(12、16周)軟骨下骨硬化范圍增加,軟骨缺損變形,且模型組內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)間隙略狹窄。而TXG中、高劑量組和TXG組實(shí)驗(yàn)后期才見(jiàn)軟骨下骨出現(xiàn)硬化,軟骨面毛糙。OA模型組各時(shí)段關(guān)節(jié)腔積液都較多,TXG低、中、高劑量組各時(shí)段,關(guān)節(jié)腔積液都較模型組少,高劑量組減輕滑膜炎癥明顯(圖1~3)。
本實(shí)驗(yàn)?zāi)P偷膭?chuàng)傷嚴(yán)重程度介于王云峰等[4]和方銳等[5]建立模型之間,模型組前期積液增多,后期積液稍減少,但骨質(zhì)變化較輕,因此,本實(shí)驗(yàn)更接近早中期OA模型。
3.1TXG減少關(guān)節(jié)炎癥膝關(guān)節(jié)是全身最大的滑膜關(guān)節(jié),急性損傷引起滑膜炎癥,炎性因子分泌增強(qiáng),作用于血管組織使?jié)B出增加,軟骨等其他組織受炎癥因子刺激產(chǎn)生炎癥反應(yīng),釋放的炎癥介質(zhì)又作用于滑膜,造成組織水腫和關(guān)節(jié)積液使關(guān)節(jié)內(nèi)壓力升高,進(jìn)一步導(dǎo)致血管、淋巴管回流障礙、關(guān)節(jié)內(nèi)組織營(yíng)養(yǎng)失調(diào)而變性,形成惡性循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)關(guān)節(jié)積液最為突出。
TXG主要由巴戟天、白芍、川芎等組成,具有補(bǔ)腎柔肝、行氣活血、祛風(fēng)除濕功效。采用改良Hulth法造模,術(shù)后8、16周滑液IL-1、IL-6、TNF-α、MMP-3和血清MDA、NO含量明顯升高[1]。TXG可降低關(guān)節(jié)液NO、NOS的含量,下調(diào)軟骨及滑膜iNOS;降低PEG2、COX-2的表達(dá)[6-7],緩解關(guān)節(jié)炎癥,抑制軟骨降解。TXG能有效抑制退變軟骨細(xì)胞TNF-α、IL-1β的表達(dá)[8],下調(diào)血清及關(guān)節(jié)液IL-1β、TNF-α和MMP-3[9]。經(jīng)TXG治療后,各時(shí)期TXG中、高劑量組關(guān)節(jié)積液較OA模型組少,提示TXG具有改善關(guān)節(jié)血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài),促進(jìn)炎癥、水腫消退,抑制炎性反應(yīng)的作用。
3.2TXG減輕軟骨下骨硬化OA是因機(jī)械性和生物性因素相互作用,導(dǎo)致軟骨和軟骨下骨合成降解失衡的結(jié)果,軟骨-軟骨下骨是相互作用的復(fù)合單元[10]。術(shù)后,關(guān)節(jié)穩(wěn)定性顯著降低,生物力學(xué)異常,軟骨嚴(yán)重破壞,軟骨下骨受力增大,骨小梁微骨折,早期以骨吸收為主,后期骨形成占優(yōu)勢(shì),骨組織修復(fù)過(guò)度,導(dǎo)致骨質(zhì)增生、硬化。
本實(shí)驗(yàn)OA模型組前期就可見(jiàn)軟骨下骨硬化,關(guān)節(jié)緣骨質(zhì)變尖,后期關(guān)節(jié)間隙略窄;而各治療組到后期才出現(xiàn)軟骨下骨硬化,表明TXG能延遲軟骨下骨病變。黃云梅等[11]通過(guò)組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)TXG干預(yù)后,軟骨蛋白多糖丟失、纖維化及軟骨下骨硬化程度明顯減輕。TXG通過(guò)減少OA早期軟骨下骨吸收,抑制中晚期過(guò)量骨形成,從而改善軟骨下骨形態(tài),延緩關(guān)節(jié)軟骨退變,延遲OA病理進(jìn)程[12]。李民等[13]研究發(fā)現(xiàn)TXG能下調(diào)軟骨下骨Cyclin D1基因、IGF-1、NF-κB受體活化因子配體mRNA表達(dá),抑制成骨、破骨細(xì)胞的增殖和活性,阻斷骨吸收-骨形成的偶聯(lián)機(jī)制,改變軟骨下骨重塑的速率和模式,減輕軟骨下骨硬化。因此,TXG可通過(guò)減輕早中期OA炎癥,保護(hù)軟骨,并通過(guò)平衡成骨與破骨活動(dòng),改善軟骨-軟骨下骨復(fù)合單元退變,延緩軟骨下骨硬化,從而延遲OA發(fā)展。
3.3DR、CT、MRI在OA研究中的應(yīng)用X線、CT、MRI檢查對(duì)關(guān)節(jié)間隙狹窄、軟骨下骨硬化、骨贅、軟骨下骨囊腫的評(píng)分差異較?。?4]。雖DR和CT對(duì)骨性結(jié)構(gòu)病變較敏感,對(duì)關(guān)節(jié)間隙測(cè)量及骨質(zhì)增生顯示比MRI清晰[15],但MRI對(duì)組織含水量變化敏感,故對(duì)積液、軟骨改變、軟骨下骨硬化敏感性較高。MRI能直觀反映軟骨下骨質(zhì)水腫、關(guān)節(jié)積液及滑膜水腫的改變情況,更清晰顯示局限性軟骨丟失、軟骨下骨硬化、軟骨下骨囊變。因此,MRI能較全面地觀察膝OA,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究首選MRI技術(shù)。但上述3種方法對(duì)小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分辨力不高。近年,Micro-MRI、Micro-CT等高分辨力小動(dòng)物影像學(xué)儀器在基礎(chǔ)研究中受到重視。Micro-MRI能較準(zhǔn)確地測(cè)量軟骨厚度和體積,發(fā)現(xiàn)組織早期病變。Goebel等[16]認(rèn)為7.0 T MRI對(duì)軟骨厚度的測(cè)量和軟骨水腫的觀察較好。Micro-CT能重建骨小梁三維結(jié)構(gòu)并高精度定量測(cè)量骨參數(shù),從骨立體結(jié)構(gòu)和參數(shù)變化上進(jìn)行直觀準(zhǔn)確的分析。Siebelt等[17]用對(duì)比增強(qiáng)Micro-CT測(cè)軟骨硫酸軟骨素的含量、軟骨厚度,(SPECT)/CT檢測(cè)滑膜巨噬細(xì)胞活性,其結(jié)果與組織學(xué)結(jié)果一致。若采用小動(dòng)物影像學(xué)檢查圖像分辨力高、清晰度好、對(duì)比度強(qiáng),組織細(xì)微結(jié)構(gòu)觀察較清楚,對(duì)輕微病變的檢出率高、準(zhǔn)確性強(qiáng),將更適合OA基礎(chǔ)研究。
圖1術(shù)后4~8周TSE T2WI脂肪抑制序列圖1a正常組未見(jiàn)關(guān)節(jié)積液,軟骨面光滑圖1b骨關(guān)節(jié)炎(OA)模型組積液多(+++),滑膜炎癥,軟組織水腫圖1c透骨消痛顆粒低劑量組積液(+++),滑膜炎癥,髕下脂肪墊水腫圖1d透骨消痛顆粒高劑量組積液(+)圖2術(shù)后12~16周TSE T2WI脂肪抑制序列圖2a正常組關(guān)節(jié)腔未見(jiàn)積液,軟骨下骨信號(hào)均勻圖2bOA模型組積液(+++),滑膜炎癥,軟骨下骨硬化,關(guān)節(jié)面信號(hào)不連續(xù)圖2c透骨消痛顆粒低劑量組積液(+++),滑膜炎癥圖2d透骨消痛顆粒高劑量組積液(+),軟骨下骨信號(hào)混雜圖3術(shù)后12周DR側(cè)位片圖3a正常組關(guān)節(jié)骨質(zhì)邊緣光整,軟骨下骨骨質(zhì)密度均勻圖3bOA模型組脛骨、股骨關(guān)節(jié)面硬化,軟骨下骨骨密度增高,關(guān)節(jié)緣骨質(zhì)變尖圖3c透骨消痛顆粒高劑量組脛骨關(guān)節(jié)面硬化,軟骨下骨骨質(zhì)密度稍增高,關(guān)節(jié)邊緣光整
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圖1男,23歲,同一AS患者TIRM序列治療前后骶髂關(guān)節(jié)骨髓水腫的MRI評(píng)分圖像:將雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)分為4個(gè)象限(1=骶上、2=髂上、3=髂下、4=骶下),圖1a~1c示治療前骶髂關(guān)節(jié)骨髓水腫評(píng)分,圖1d~1f示治療后骶髂關(guān)節(jié)骨髓水腫評(píng)分并與圖1a~1c一一對(duì)應(yīng)圖1a示右側(cè)骶上、髂上、髂下象限各計(jì)1分,存在信號(hào)深度≥1 cm的象限,增加1分,共計(jì)為4分,左側(cè)骶上、骶下象限各計(jì)1分,因存在極高信號(hào),增加1分,共3分,雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為7分圖1b示雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為10分圖1c示雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為9分圖1d示雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為2分圖1e示雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為1分圖1f示雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)水腫評(píng)分為3分
(收稿日期 2014-11-11)
Imaging study on osteoarthritis in rabbits treated with Tougu Xiaotong Granule
XU Yaye,LU Xiaodong,ZHENG
Zhanghe,CHEN Wenlie,LIN Ruhui,QI Wan,YE Xiufang,WU Guangwen,WU Zhuile,LIU Xianxiang.Department of Radiology,The People’s Hospital,F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine,F(xiàn)uzhou,350004,China.
Object:To investigate the effection of Tougu Xiaotong Granules in early and mid osteoarthritis of rabbits and the application value of imaging technology in OA experiment.Methods:48 New Zealand white rabbits were randomly divided into normal group,model group,Tougu Xiaotong group,and bolus group.All models were based on the improved Hulth.DR,CT,MRI screening technology was taken in 4W,8W,12W,16W after operation,observing the changes of joint space narrowing,subchondral bone,osteophytes,arthroedema,cartilage,et al.Results:Model group had more arthroedema each time,early experiments(4 and 8 weeks)could observe subchondral sclerosis,late experiments(12 and 16 weeks)slightly joint space narrowing could be seen.Tougu Xiaotong group of mid-dose and high-dose had lesser arthroedema than model group each time,with cartilage surface coarse and subchondral sclerosis and lightest high-dose group lesions in late experiments.The performance of bolus group was between high-and low-dose Tougu Xiaotong group.Conclusion:Tougu Xiaotong Granules can reduce inflammation of OA,delay lesion of subchondral bone and recover the cartilage.
Osteoarthritis;Tougu Xiaotong Granules;Magnetic resonance imaging;Radiography
2015-06-22)
10.3969/j.issn.1672-0512.2015.06.002
福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014J01356);陳可冀中西醫(yī)結(jié)合發(fā)展基金項(xiàng)目(CKJ2011004)。
陳文列,E-mail:chen.wl@163.com;鄭章和,E-mail:zhengzhanghe@163.com。