對(duì)蝦早期死亡綜合癥的研究進(jìn)展

徐含穎，張婉蓉，張學(xué)舒，馮雙雙，羅燕兒 (浙江海洋學(xué)院，浙江舟山316022)

南美白對(duì)蝦，也稱為凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)，原產(chǎn)美洲熱帶地區(qū)，是當(dāng)今世界上三大經(jīng)濟(jì)對(duì)蝦之一，也是“海蝦淡養(yǎng)”的優(yōu)質(zhì)品種。白對(duì)蝦生長(zhǎng)速度快、營養(yǎng)需求低、環(huán)境適應(yīng)性好、抗病力強(qiáng)，我國于20世紀(jì)80年代末將其作為白斑病毒綜合征(WSSV)抗病優(yōu)勢(shì)種成功引種試樣，并于2000年實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化育苗，此后白對(duì)蝦在我國的養(yǎng)殖規(guī)模逐年增大。

1 南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖模式和主要病害

目前，南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖模式分為精養(yǎng)、半精養(yǎng)、粗養(yǎng)(混養(yǎng))［1－4］，具體包括灘涂土地養(yǎng)殖模式、高位池精細(xì)養(yǎng)殖模式、低鹽度淡化養(yǎng)殖模式、冬棚養(yǎng)殖模式、高鹽度水兌淡水養(yǎng)殖模式、鹽堿地養(yǎng)殖模式和混養(yǎng)模式。

隨著大規(guī)模的高密度養(yǎng)殖，水源污染加劇，加上自身免疫低劣性，南美白對(duì)蝦發(fā)生病害［5－9］愈來愈頻繁，歸納起來有3個(gè)因素:①對(duì)蝦自身，即內(nèi)在因素;②養(yǎng)殖環(huán)境，即外界因素;③對(duì)蝦敏感的病毒、細(xì)菌、寄生蟲或其他微生物，即病原因素。目前，已知的病害主要有桃拉綜合征、白斑綜合征、肌肉壞死病、黃/灰/黑鰓綜合征、對(duì)蝦腸道疾病、紅體等。近年來，有一種名為“EMS［10］”的新病害在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)域暴發(fā)，給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失。

2 EMS對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)的沖擊

EMS是“早期死亡綜合癥”(Early mortality syndrome，EMS)的簡(jiǎn)稱，又稱急性肝胰腺壞死綜合癥(AHPNS)。2009年，EMS在我國海南對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)域暴發(fā)，在受病原體感染的養(yǎng)蝦池中蝦的早期死亡率極高，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2010年，疫情暴發(fā)進(jìn)一步擴(kuò)大，越南EMS疫情開始見諸報(bào)端。2011～2012年相繼在馬來西亞和泰國暴發(fā)。聯(lián)合國糧農(nóng)組織數(shù)據(jù)顯示，2011年亞洲蝦產(chǎn)量為300萬t，產(chǎn)值達(dá)133億美元，2011年我國海南、廣東、福建和廣西等省(區(qū))的養(yǎng)殖場(chǎng)產(chǎn)量受此損失近80%。截止2013年，EMS給亞洲的對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了前所未有的沖擊。EMS造成每年超過10億美元的經(jīng)濟(jì)損失。

3 EMS對(duì)蝦體的影響

早期關(guān)于EMS的研究表明，EMS多發(fā)于蝦苗放養(yǎng)7～30 d，患病對(duì)蝦體色呈白濁并微紅，多數(shù)情況下肝胰臟異常腫大，質(zhì)地松軟，顏色呈淡白或淡黃色;部分患病對(duì)蝦的肝胰臟明顯萎縮，質(zhì)地變硬。發(fā)病期間，患病對(duì)蝦通常在池塘水面緩慢游動(dòng)或趴伏于池塘邊坡上，失去食欲，胃、腸充塞度極差，嚴(yán)重者胃腸呈紅色。該病病情發(fā)展十分迅速，死亡率和排塘率極高，從發(fā)現(xiàn)少量病蝦到排塘?xí)r間最短的僅2～3 d。

近年來的一些養(yǎng)殖實(shí)踐表明，EMS不僅發(fā)生于蝦苗，而且會(huì)在成體發(fā)生，甚至延伸到對(duì)蝦的整個(gè)生命周期。通過對(duì)養(yǎng)殖戶的調(diào)研發(fā)現(xiàn)，很多蝦塘在蝦苗放養(yǎng)45 d以后才出現(xiàn)發(fā)病現(xiàn)象與以前的相關(guān)研究報(bào)道相一致。

4 EMS病因的研究進(jìn)展

目前，對(duì)EMS病原的研究很多，學(xué)術(shù)上主要有3種觀點(diǎn):一種觀點(diǎn)認(rèn)為，EMS的病原是副溶血弧菌的特異變種，被噬菌體感染后發(fā)生變異，并促使細(xì)菌釋放強(qiáng)力的毒素;另一種觀點(diǎn)則認(rèn)為，EMS病因是YHV新型病毒，弧菌是繼發(fā)性感染;第三種觀點(diǎn)認(rèn)為，暴發(fā)EMS/AHPNS的直接原因是弧菌感染，而其根本原因是蝦苗抗逆性下降。此外，也有觀點(diǎn)認(rèn)為是藻毒素所引起的中毒現(xiàn)象。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)EMS病因的研究主要集中于病原的分離和鑒定以及發(fā)病機(jī)理的研究。

4.1 EMS致病原為變種副溶血性弧菌 2013年5月1日全球水產(chǎn)養(yǎng)殖聯(lián)盟(GAA)宣布，亞利桑那大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)過數(shù)月的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致早期死亡綜合癥的病原體。美國Donald V.Lightner教授領(lǐng)導(dǎo)的研究小組發(fā)表聲明:由未知因子引起的在中國和東南亞暴發(fā)的對(duì)蝦早期死亡綜合癥(技術(shù)上被稱為急性肝胰腺壞死綜合癥的疾病)其病原已經(jīng)被確定［11］。研究表明，病因是一種副溶血弧菌，由口進(jìn)入體內(nèi)，定植在對(duì)蝦消化道內(nèi)，產(chǎn)生的毒素可導(dǎo)致肝胰腺的結(jié)構(gòu)和功能的損傷，但這種細(xì)菌目前報(bào)道對(duì)人類健康無危害。Loc Tran等［12］通過對(duì)感染蝦類的菌落的分離發(fā)現(xiàn)，致病的其中一個(gè)因素是哈維氏弧菌的分支，最密切相關(guān)的是溶血性弧菌。

國內(nèi)研究表明，2010年從廣西北海地區(qū)第二造的幼蝦分離的腸炎弧菌(又稱副溶血弧菌)，發(fā)現(xiàn)疑似EMS/AHPNS病樣，表現(xiàn)為肝胰腺萎縮，呈淡黃色，死亡率在90%左右。在2216E瓊脂培養(yǎng)的是2 mm、突起的、光滑的菌落，在TCS瓊脂培養(yǎng)的是綠色菌落，細(xì)胞形狀呈棒狀，一端帶鞭毛。此外，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)副溶血弧菌不能利用蔗糖。對(duì)此，有3位代表性專家支持Donald V.Lightner教授提出的EMS與AHPNS由細(xì)菌引起的觀點(diǎn)。廣西對(duì)蝦協(xié)會(huì)常務(wù)副會(huì)長(zhǎng)龐德彬是國內(nèi)第一位提出EMS與AHPNS致命原為副溶弧菌的觀點(diǎn);海南大學(xué)賴秋明教授認(rèn)為病原是一種綠弧菌，其最有價(jià)值的試驗(yàn)就是將南美白對(duì)蝦放在2.5×104cfu/ml濃度的綠色弧菌內(nèi)浸泡1 h，10 d內(nèi)的累計(jì)死亡率達(dá)到98%;中山大學(xué)何建國教授基本同意副溶血弧菌為致病原的觀點(diǎn)。

4.2 EMS是由黃頭病毒所引起的 中國水產(chǎn)科學(xué)院黃海水產(chǎn)研究所研究員黃倢認(rèn)為，目前存在將多種病原引起不同的疾病混為一談的可能。在所有EMS發(fā)病的對(duì)蝦體內(nèi)都能檢測(cè)出副溶血弧菌，不可否認(rèn)這種細(xì)菌感染的存在，副溶血弧菌會(huì)引起對(duì)蝦死亡也是肯定的，但是不是原發(fā)性的病原尚不能定論。關(guān)于對(duì)蝦的EMS，可能是由病毒所引起的，是一種新型的黃頭病毒［13－14］，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃頭病毒具有高毒性。

4.3 EMS根本原因是種苗抗逆性下降 Chalor表示EMS不具備可傳染性，并且不是由病毒、寄生蟲或者飼料因素引起的［15］。Chalor指出，他所在的實(shí)驗(yàn)中心在2012年前就開始用病蝦去感染健康蝦，甚至用病蝦的肝胰臟的混懸液注射給健康蝦，也不能導(dǎo)致健康蝦發(fā)病。到目前為止，從中國，越南，泰國等國家發(fā)生EMS的病蝦材料去感染實(shí)驗(yàn)室的健康對(duì)蝦，都沒有使健康蝦感染EMS。他認(rèn)為，在白對(duì)蝦育苗階段，很多育苗企業(yè)在苗室大量使用微生物產(chǎn)酸來控制幼體和仔蝦的弧菌感染。這雖然控制了弧菌，但育苗池中的pH太低，蝦苗的蛻殼頻率大大增加，肝胰臟中也保留了大量的細(xì)菌，處于一種亞健康狀態(tài)。這種蝦苗進(jìn)入大池養(yǎng)殖后，如果管理方面太過于激進(jìn)(如密度更高、投料更多、過量使用微生物來降低pH等)就很容易開始EMS，部分管理適度的農(nóng)戶，雖然使用了同樣的蝦苗，但死亡往往從40 d左右才開始。

2013年5月31日，基因測(cè)算公司的首席執(zhí)行官羅杰·道爾博士和一位從戴爾豪斯大學(xué)退休的教授在泰國作了關(guān)于近親繁殖和EMS/AHPNS之類病害的關(guān)系口頭報(bào)告。羅杰·道爾博士表示:在泰國有將近60%的蝦農(nóng)選擇蝦苗場(chǎng)近親繁殖培養(yǎng)的二代苗。事實(shí)上，經(jīng)過一代又一代的近親繁殖，蝦苗抗病力變得越來越差，越來越容易受到病害襲擊。

5 EMS的防治

面對(duì)EMS疾病，目前仍以預(yù)防為主，從保證蝦苗質(zhì)量、建立良好的水環(huán)境、定期檢測(cè)弧菌以及藥物和生物防治等方面來開展工作。

5.1 選育優(yōu)質(zhì)的蝦苗 體內(nèi)攜帶大量弧菌的親蝦會(huì)產(chǎn)生不健康蝦苗，給整個(gè)養(yǎng)殖環(huán)境帶入大量病原體。因此，養(yǎng)殖戶要選擇攜帶弧菌數(shù)量在安全范圍內(nèi)的蝦苗放養(yǎng)，在源頭上嚴(yán)格把關(guān)。

5.2 保持水環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定 白對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境處在自然環(huán)境中(如高位池和土塘養(yǎng)殖)，自然天氣的變化無常，此時(shí)，養(yǎng)殖過程中可以以一種常態(tài)化的改變來達(dá)到水質(zhì)［16－18］的相對(duì)穩(wěn)定，具體措施包括:①經(jīng)常加換新水，每天5～10 cm水深，由此使蝦適應(yīng)暴雨、臺(tái)風(fēng)等環(huán)境突變，也可為保持藻相穩(wěn)定創(chuàng)造條件;②人工增氧，時(shí)刻保持溶氧量在5 mg/L以上，這樣也可起到穩(wěn)定菌相的作用;③應(yīng)用藥物清塘，放苗前15 d左右對(duì)養(yǎng)殖池塘進(jìn)行清塘工作，清塘藥物以生石灰或漂白粉為好。

5.3 維持良好水色，避免“倒藻”發(fā)生 弧菌數(shù)量的增加和早期死亡綜合癥疫情的發(fā)生通常都與“倒藻”有密切關(guān)系。養(yǎng)殖期間若發(fā)現(xiàn)水色色澤變暗，池水泡沫增多或表層漂浮少量死藻時(shí)，說明藻類開始老化，需要采取相應(yīng)的措施:①經(jīng)常適量地?fù)Q水，可以維持藻類的正常生長(zhǎng)，避免“倒藻”現(xiàn)象發(fā)生;②經(jīng)常使用有益微生物(如酵素菌產(chǎn)品)可以及時(shí)分解轉(zhuǎn)化死亡藻類，避免水體藻毒素的累積或濃度升高，促進(jìn)新藻的繁殖。

5.4 維持蝦池微生物的多樣性和數(shù)量的相對(duì)穩(wěn)定 養(yǎng)蝦水體宜以好氧微生物為主，同時(shí)保持微生物的種類多樣性和數(shù)量及穩(wěn)定性［19－21］，從而維持水體物質(zhì)的良性循環(huán)［22］。經(jīng)常定期向養(yǎng)蝦水體投施含有多種有益菌的微生物制劑(如酵素菌)是維持蝦池微生物多樣性和數(shù)量穩(wěn)定性的重要手段。

5.5 控制池塘的pH 養(yǎng)殖戶可添加適量的生石灰水(清晨太陽升起前)和75 kg/hm2小蘇打，調(diào)節(jié)水體的早上的pH控制在7.9～8.0，這將減緩蝦苗脫殼時(shí)機(jī)和降低死亡率。

5.6 定期檢測(cè)養(yǎng)殖水體中弧菌密度 如果檢測(cè)出弧菌濃度偏高，應(yīng)對(duì)養(yǎng)殖水體進(jìn)行消毒，待藥性消失后再重新培育水體菌相。

5.7 藥物防治 以抗生素、中藥控制為主，中藥主要包括適當(dāng)使用大蒜素、大黃、黃連和板藍(lán)根等，這些中藥還可以顯著提高南美白對(duì)蝦機(jī)體免疫力。

5.8 生物防治 ①混養(yǎng)切斷病原傳播:主要有對(duì)蝦和魚類混養(yǎng)法，如將南美白對(duì)蝦和革胡子鯰等底棲魚類進(jìn)行套養(yǎng)，減少患病對(duì)蝦的數(shù)量，控制病菌數(shù)量，切斷病原的傳播，從而控制EMS等疾病在白對(duì)蝦養(yǎng)殖群體的暴發(fā);②利用酵素菌和藍(lán)藻防控:EMS發(fā)生時(shí)總有一些伴生的環(huán)境因素，EMS是對(duì)蝦腸道弧菌毒素與不良水質(zhì)環(huán)境共同作用的結(jié)果。采用酵素菌和藍(lán)藻進(jìn)行生物防控EMS就是利用弧菌與水環(huán)境這2個(gè)EMS發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵點(diǎn)［23］，目前已取得較好的成效。

6 小結(jié)

早期死亡綜合癥(EMS)作為一種新的病害，危害著整個(gè)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)。在發(fā)病早期，對(duì)蝦的體色、肝胰臟等處會(huì)產(chǎn)生明顯的病理特征，需要留心觀察，及時(shí)采取防護(hù)措施，降低損失。由于該疾病發(fā)病時(shí)間短、病情發(fā)展迅速，在養(yǎng)殖過程中仍以預(yù)防手段為主，選擇合適的管理模式來維持良好的養(yǎng)殖水域環(huán)境。研究表明，副溶血弧菌直接或間接引發(fā)EMS，因此要選購強(qiáng)抗逆性的健康蝦苗，并定期對(duì)水環(huán)境進(jìn)行弧菌檢測(cè)，控制弧菌數(shù)量。

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