超聲場中L-抗壞血酸亞油酸酯的酶法合成及其抗氧化性研究*

江晨，劉柳，李卓，李存芝，晏日安

1(暨南大學理工學院，食品科學與工程系，廣東廣州，510632)

2(華潤怡寶飲料(中國)有限公司，廣東 深圳，518000)

L-抗壞血酸(L-ascorbyl linoleate，L-AA)廣泛存在于自然界中，是維持機體正常生理功能的重要維生素之一，同時它也作為水溶性天然抗氧化劑在加工領域被廣泛應用。但其親水特性使其在某些疏水環(huán)境如油脂和化妝品中的應用受到很大限制。近年來，在L-AA結構中植入脂肪酸鏈合成L-抗壞血酸脂肪酸酯，已成為L-AA改性研究的熱點，因為酯化不僅不會破壞其抗氧化結構還可增強其脂溶性，其中L-抗壞血酸棕櫚酸酯(L-ascorbyl palmitate，L-AP)和L-抗壞血酸硬脂酸酯已商業(yè)化生產(chǎn)，被廣泛應用于食品和化妝品中［1］，且LAP是我國唯一可以用于嬰幼兒奶粉的抗氧化劑［2］。

L-抗壞血酸脂肪酸酯的制備方法分為化學法和酶法［3］。化學法一般使用濃H2SO4、HF等作為催化劑和溶劑，是工業(yè)生產(chǎn)中使用的主要方法，但缺點是反應時間長，腐蝕性強且污染嚴重。酶法合成不僅可以避免這些不利因素，且具有特異性強、反應條件溫和、無廢酸排放等優(yōu)點。超聲波的高頻振動不僅可以促進底物的快速溶解，而且可以使其均勻分散在溶劑中，通過提高底物與催化劑的有效碰撞次數(shù)，加速反應的進行［4］。本文采用超聲-酶法協(xié)同的方法合成L-抗壞血酸脂肪酸酯，旨在縮短反應時間，獲得較高產(chǎn)率。

國內(nèi)外關于L-抗壞血酸脂肪酸酯的研究主要集中于L-抗壞血酸飽和脂肪酸酯的合成及其性質，但有文獻報道，相比飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸被認為對人體健康更有好處［5］，所以本文在L-AA上引入不飽和脂肪酸亞油酸，酯化生成L-抗壞血酸亞油酸酯(L-AL)(圖1)，希望在增加脂溶性的基礎上也能提高其營養(yǎng)性。亞油酸學名為順式十八碳-9，12-二烯酸，是一種人體必需的不飽和脂肪酸，具有降低血漿膽固醇、調(diào)節(jié)免疫、促進生長發(fā)育等重要作用［6］，目前國內(nèi)外對L-AL的合成以及性質的研究較少，華東理工大學主要比較了不同來源的酶的催化效應以及L-AL對細胞氧化的保護作用［7-8］，但對L-AL的清除自由基能力、油脂抗氧化性能評價等并沒有涉及［9］。本文通過條件優(yōu)化確定了其超聲-酶法合成的最佳條件，通過紅外、質譜及碳譜分析對L-AL結構進行了鑒定，另外從清除羥基自由基和DPPH自由基、還原能力以及油脂抗氧化方面對其進行了抗氧化能力測試，并與抗氧化劑LAP、L-AA和VE的抗氧化能力進行比較，旨在得到一種新型的兼具抗氧化性和營養(yǎng)性的食品添加劑，并為其工業(yè)生產(chǎn)和應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

圖1 L-抗壞血酸亞油酸酯(L-AL)的結構Fig.1 Structure of L-ascorbyl linoleate(L-AL)

L-AA、鄰二氮菲，天津市天新精細化工開發(fā)中心;亞油酸，阿拉丁試劑網(wǎng);L-AP，東莞市感恩食品科技有限公司;叔戊醇、乙酸乙酯、硅膠、分子篩，天津市富宇精細化工有限公司;硫酸亞鐵、三氯化鐵、三氯乙酸，DPPH，阿法埃莎(天津)化學有限公司;天津市福晨化學試劑廠;脂肪酶Novozym?435，諾維信(中國)生物技術有限公司;葵花籽油、花生油，金龍魚股份有限公司。

RE-52 AAB型旋轉蒸發(fā)器，上海嘉鵬科技有限公司;DZF-6030A真空干燥箱，上海一恒科學技術有限公司;SB25-12DTDN超聲波處理機，寧波新芝生物科技有限公司;2XZ型旋片式真空泵，上海儀器供銷公司;B-260恒溫水浴鍋，上海亞榮生化儀器廠;743型Rancimat氧化穩(wěn)定性測試儀，瑞士萬通中國有限公司;KDC-1044低速離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 L-AL的合成

將 L-AA 10 mmol，亞油酸 30 mmol，分子篩 5 g，叔戊醇50 mL，固定化脂肪酶(Novozym?435)0.44 g置于避光容器中，于設定溫度55℃的超聲儀中反應6 h。

反應液經(jīng)固液分離分出固定化脂肪酶、分子篩和未反應的L-AA后，所得濾液經(jīng)旋蒸蒸出溶劑叔戊醇，得到的粗產(chǎn)物用乙酸乙酯溶解，再經(jīng)水洗除去LAA，分液后經(jīng)旋蒸蒸出乙酸乙酯，得到的產(chǎn)物用硅膠柱進行分離，收集后蒸出溶劑，真空干燥后得油狀淡黃色產(chǎn)物1.53 g，產(chǎn)率35%。

1.2.2 羥自由基清除能力的測定

采用Fenton反應對羥基自由基清除能力進行測定。將2 mL 0.2 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)與1 mL 0.75 mmol/L鄰二氮菲無水乙醇溶液混合于試管中，然后加入1 mL不同質量濃度(100，150，200，250，300 μg/mL)的L-AL 與1 mL 0.75 mmol/L FeSO2溶液為處理樣，對照樣加入2 mL蒸餾水補充體積。最后加入1 mL 0.01%H2O2，空白對照以蒸餾水補充體積。在37℃保溫1 h后，用紫外分光光度計測定在536 nm處的不同濃度樣品溶液的吸光度值［9］。同時按相同方法測定L-AP、L-AA和VE的羥自由基清除能力。樣品對羥自由基的清除率計算見式(1):

1.2.3 DPPH自由基清除能力測定

首先，配制濃度為0.2 mmol/L的DPPH乙醇溶液。然后將2 mL不同質量濃度(10，20，40，80，100 μg/mL)的L-AL與2 mL 0.2 mmol/L的DPPH乙醇溶液混合，搖勻后放置在黑暗處30 min，用無水乙醇調(diào)零，用紫外分光光度計測定不同濃度樣品溶液在517 nm處的吸光值A樣品，再測定2 mL DPPH溶液與2 mL乙醇在517 nm處的吸光值ADPPH［10］。同時按相同方法測定L-AP、L-AA和VE的DPPH自由基清除能力。計算樣品對DPPH清除率［式(2)］:

1.2.4 還原能力測定

將 0.5 mL 不同質量濃度(10，20，40，80，100 μg/mL)的L-AL溶液與2.5 mL 0.2 mol/L的磷酸緩沖溶液(pH 6.6)和2.5 mL 1%的K3Fe(CN)6混合，50℃水浴20 min后快速冷卻。然后加入2.5 mL 10%的三氯乙酸溶液，2 000 r/min離心15 min。取上清液2.5 mL與2.5 mL蒸餾水、0.5 mL 0.1%的FeCl3溶液混合均勻，混合液靜置15 min后用紫外分光光度計測定不同濃度樣品溶液在700 nm處的吸光值［11］。同時按相同方法測定L-AP、L-AA和VE的還原能力。

1.2.5 油脂中抗氧化性測定

在Rancimat儀上測定各油樣的氧化誘導時間，油樣葵花籽油和花生油添加量為3.00 g，L-AL添加比例為200 mg/kg，空氣流速為10 mL/min，實驗溫度為120℃［12］。同時按相同方法測定 L-AP、L-AA和VE在油脂中的抗氧化能力。

1.3 HPLC分析

通過高效液相色譜對產(chǎn)物進行測定，色譜條件為:Synthesis C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:V(甲醇)∶V(水)=85∶15，;檢測器:島津 SPD-10A 紫外檢測器，流速1 mL/min，進樣量15 μL，檢測波長280 nm，柱溫:40℃。

1.4 數(shù)據(jù)處理

每組數(shù)據(jù)均平行測定3次后取平均值。數(shù)據(jù)采用Origin 8.0軟件處理。

2 結果與討論

2.1 L-AL合成工藝優(yōu)化

2.1.1 溶劑對產(chǎn)率的影響

溶劑的極性是否合適對脂肪酶的催化效率有很大影響，而反應物L-AA和亞油酸在溶劑中的溶解性好壞，也決定著酯化反應是否能順利高效進行。本文以溶劑為變量，保持其他條件恒定:L-AA 10 mmol、亞油酸30 mmol、分子篩5 g、脂肪酶0.44 g、超聲反應溫度55℃、反應時間6 h。選用叔戊醇、叔丁醇、丙酮和正己烷作為溶劑，得到產(chǎn)率結果如圖2所示。叔戊醇、叔丁醇和丙酮都可以作為反應的溶劑，而以正己烷為反應溶劑時幾乎沒有產(chǎn)物生成，因為原料L-AA在正己烷中不能溶解，所以不能參與酯化。其中叔戊醇作為溶劑時產(chǎn)率最高，因此選擇叔戊醇作為反應溶劑。

圖2 溶劑種類對L-AL產(chǎn)率的影響Fig.2 Effect of solvent on yield of L-AL

2.1.2 反應時間對產(chǎn)率的影響

底物L-AA在溶劑中的溶解度有限，隨著反應進行，L-AA在溶劑中逐漸溶解參與反應，且酯化反應需要一定的時間才達到平衡，所以反應時間也是影響產(chǎn)率的一個重要因素。本文以反應時間為變量，保持其他條件恒定:L-AA 10 mmol、亞油酸30 mmol、分子篩5 g、叔戊醇50 mL、脂肪酶0.44 g、超聲反應溫度55℃，分別反應 2、4、6、8、10 h，以探究反應時間對產(chǎn)率的影響。

當反應時間由2 h變化至10 h時L-AL的產(chǎn)率變化結果如圖3所示。當反應時間小于6 h時，產(chǎn)率隨著時間的增加逐漸升高，超過6 h，產(chǎn)率趨于平穩(wěn)不再明顯升高，這說明這時反應已達到平衡，再延長反應時間對提高產(chǎn)率作用不大。因此，最佳反應時間可以確定為6 h。

圖3 反應時間對L-AL產(chǎn)率的影響Fig.3 Effect of reaction time on yield of L-AL

2.1.3 反應溫度對產(chǎn)率的影響

酶催化需要在合適的溫度下才能進行，所以溫度是影響酶催化效率的一個重要因素，本文以超聲反應溫度為變量，保持其他條件恒定:L-AA 10 mmol、亞油酸30 mmol、分子篩5 g、叔戊醇50 mL、脂肪酶0.44 g、反應時間6 h，設定40、45、50、55、60 ℃五個溫度梯度來探究固定化脂肪酶(Novozym?435)的最適催化溫度。

如圖4所示，反應溫度為40～55℃時L-AL的產(chǎn)率隨著溫度的升高而提高，但在55℃達到最大值之后開始下降，這是因為溫度過高會使固定化酶的催化活性受到限制。此外，過高的溫度可能破壞L-AL結構內(nèi)的連烯二醇結構和雙鍵。因此，反應溫度選為55℃最合適。

圖4 反應溫度對L-AL產(chǎn)率的影響Fig.4 Effect of temperature on yield of L-AL

2.1.4 酶使用量對產(chǎn)率的影響

固定化酶的價格比較昂貴，而且過量使用對提高產(chǎn)率影響不大，出于效率和成本考慮，本文以酶使用量為變量，其他條件保持恒定:L-AA 10 mmol、亞油酸30 mmol、分子篩5 g、叔戊醇50 mL、超聲反應溫度55℃、反應時間6 h，探究不同酶使用量(與L-AA的質量百分比)10%，15%，20%，25%，30%對產(chǎn)率的影響。

如圖5所示，隨著酶用量的增大L-AL的產(chǎn)率不斷提高，但酶使用量大于25%后，產(chǎn)率幾乎不再升高，這是因為在酶催化反應中，酶使用量越大，酶的催化活化中心也就越多，酶催化效果也就更好，但酶用量一旦飽和，再增加酶用量幾乎對產(chǎn)率沒有影響，所以選取酶使用量為L-AA質量的25%最合適。

2.1.5 亞油酸和L-AA摩爾比對產(chǎn)率的影響

酯化反應是可逆反應，可通過使其中一種底物過量從而平衡右移來達到提高產(chǎn)率的效果，所以本文以反應物摩爾比為變量，保持其他條件恒定:分子篩5 g、叔戊醇50 mL、脂肪酶0.44 g、超聲反應溫度55℃、反應時間6 h，探究不同底物摩爾比(亞油酸∶L-抗壞血酸)0.5、1、2、3、4 對產(chǎn)率的影響。

圖5 酶使用量對L-AL產(chǎn)率的影響Fig.5 Effect of amount of lipase on yield of L-AL

如圖6所示，當亞油酸和L-AA摩爾比小于3∶1時，產(chǎn)率隨底物摩爾比的增大而升高，且在摩爾比為3∶1時達到最大后幾乎不再升高。且當L-AA過量時，L-AL產(chǎn)率很低，只有10%左右，這是因為L-AA在叔戊醇中的溶解度不高，所以L-AA過量對產(chǎn)率的提高影響不大，而亞油酸過量則可以不斷消耗溶劑中的L-AA，使未溶解的L-AA不斷補充溶解，從而提高L-AA的轉化率達到提高產(chǎn)率的效果。因此，本反應底物亞油酸與L-AA的最佳摩爾比可確定為3∶1。

圖6 底物摩爾比對L-AL產(chǎn)率的影響Fig.6 Effect of substrate molar ratio on yield of L-AL

2.2 L-AL結構的鑒定

2.2.1 L-AL紅外表征

L-AL紅外掃描圖譜如圖7所示。3 380.20 cm-1處為—OH的吸收峰;2 923.83 cm-1及 2 854.22 cm-1處的吸收峰為烷烴飽和CH伸縮振動的特征吸收;1 736.65 cm-1處的吸收峰是酯的特征吸收峰;1 135.16 cm-1處為酯基中C—O伸縮振動吸收峰;1 687.93和3 009.28 cm-1為雙鍵特征吸收峰。

2.2.2 L-AL ESI質譜分析

圖8中出現(xiàn)的437.5、473.6、483.6峰分別為［MH］-、［M+Cl］-、［M+HCOO］-質譜信號峰。所對應的M值與L-AL的分子量438.5相符合，證實了所得產(chǎn)物為L-AL。

2.2.3 L-AL核磁分析

如圖 9所示，L-AL的13C-NMR(126 MHz，CDCl3)分析如下:14.07(C18)，20.59-34.06(C2-C8，C11，C14-C17)，64.05(C6’)，67.32(C5’)，76.14(C4’)，118.58(C3’)，127.90-130.23(C9，C10，C12，C13，C=C)，153.51(C2’)，172.65(C1，C=O);174.17(C1，C=O)，其中化學位移為76.78-77.29的峰為CDCl3的溶劑峰。

圖7 L-AL的紅外譜圖Fig.7 Infrared spectrum of L-AL

圖8 L-AL的ESI質譜圖Fig.8 Mass spectrum of L-AL

圖9 L-AL的13C-NMR譜圖Fig.9 13C-NMR of L-AL

2.2.4 L-AL HPLC分析

L-AL的HPLC分析如圖10所示，在波長280 nm下L-AL的保留時間為3.79 min。

2.3 L-AL抗氧化能力的測定

2.3.1 羥自由基清除能力的測定

圖10 L-AL的HPLC圖譜Fig.10 HPLC graph of L-AL

鄰二氮菲溶液與Fe2+形成的紅色絡合物，在536 nm處有最大吸收，加入H2O2后，F(xiàn)e2+被·OH氧化為Fe3+，從而使吸收減弱，所以若加入的抗氧化劑清除·OH能力越強，則Fe2+越多，其溶液在536 nm處的吸光值也就越高。如圖11所示，L-AA、L-AP、L-AL和VE這4種抗氧化劑對羥自由基都有比較好的清除能力，且在試驗的質量濃度范圍內(nèi)，4者的清除能力都隨著濃度的增加而增強，其中L-AA和L-AP的羥自由基清除能力最強，在質量濃度為300 μg/mL時，清除率分別為95%和78%，而相同質量濃度下L-AL的清除率為59%，VE的清除率則最弱，為38%。綜上，4種抗氧化劑在相同的質量濃度下，羥自由基清除能力大小為:L-AA＞L-AP＞L-AL＞VE。

圖11 L-AA、L-AP、L-AL和VE清除羥自由基能力測定Fig.11 The hydroxyl radical scavening capacity of L-AA，L-AP，L-AL and VE

2.3.2 DPPH自由基清除能力測定

DPPH自由基在乙醇溶液中是一種穩(wěn)定的自由基，在517 nm處有強吸收，抗氧化劑可使DPPH自由基被還原成DPPH，進而使其在517 nm處的吸收減弱或消失，所以可用517 nm處的吸光度值來評價抗氧化劑的抗氧化能力。如圖12所示，在試驗的質量濃度范圍內(nèi)，L-AA、L-AP、L-AL和VE這4種抗氧化劑都顯示出良好的清除DPPH自由基的能力，且4者的清除能力都隨著濃度的增加而增強。且當質量濃度大于40 μg/mL時，L-AA與L-AP的DPPH自由基清除能力非常接近，清除率都在90%左右，而在質量濃度為100 μg/mL時，L-AL的DPPH自由基清除率也達到了70%以上，這說明L-AL有較好的DPPH自由基清除能力。另外，相較而言，VE的DPPH自由基清除能力則最弱。綜上，4種抗氧化劑在相同的質量濃度下清除DPPH自由基的能力大小為:L-AA＞L-AP＞L-AL＞VE。

圖12L-AA、L-AP、L-AL和VE清除DPPH自由基能力測定Fig.12 The DPPH radical scavening capacity of L-AA，L-AP，L-AL and VE

2.3.3 還原能力測定

如圖13所示，L-AA、L-AP、L-AL和 VE這4種抗氧化劑的還原力都隨著質量濃度的增加而增強。當質量濃度為 10、20、40 μg/mL 時，L-AA、L-AP、L-AL三者的還原能力比較接近，吸光度值都在0.2～0.3，但隨著質量濃度的增加，L-AA逐漸表現(xiàn)出更強的還原能力，在質量濃度為100 μg/mL，L-AA的吸光度值達到了0.55，而L-AP和L-AL的吸光度值都在0.3左右，這說明在相同質量濃度下L-AL與L-AP的還原能力相當，而VE在質量濃度為100 μg/mL時的吸光度值僅為0.16，顯示出較弱的還原能力。綜上可知，這4種抗氧化劑相同質量濃度的還原能力大小為:L-AA＞L-AP＞L-AL＞VE。

圖13 L-AA、L-AP、L-AL和VE還原能力的測定Fig.13 The reducing power of L-AA，L-AP，L-AL and VE

2.3.4 油脂中抗氧化能力的測定

油脂抗氧化測定的原理為儀器通入熱空氣促使油脂加速氧化，從而產(chǎn)生揮發(fā)性物質如醇、酸、醛等，這些物質被吸收后會引起吸收液電導的變化。通過測定吸收液的電導變化，可以得知油脂的氧化穩(wěn)定性，其表示方法為氧化誘導時間［13］，誘導時間越長，說明其抗氧化性越好。L-AA、L-AP、L-AL和VE的油脂抗氧化結果如圖14所示，與空白對照相比，L-AA、L-AP、L-AL和VE均表現(xiàn)出一定的油脂抗氧化作用，且相比葵花籽油，在花生油中的抗氧化作用更明顯。另外，從圖中還可以得出，同一油脂試驗中L-AA的油脂抗氧化作用比L-AP、L-AL和VE要弱，這是因為L-AA的油溶性沒有其他3種抗氧化劑好，故沒有起到很好的抗氧化作用。此外，L-AL作為L-抗壞血酸不飽和脂肪酸酯其油脂抗氧化效果不如作為L-抗壞血酸飽和脂肪酸酯的L-AP，推測其原因是由于其側鏈帶有不飽和雙鍵，易被通入的熱空氣氧化，而氧化分解產(chǎn)生的揮發(fā)性物質使得氧化誘導時間縮短，故導致抗氧化效果不佳。綜上，4種抗氧化劑在葵花籽油和花生油中的氧化誘導時間為:L-AP＞L-AL＞VE＞L-AA。

圖14L-AA、L-AP、L-AL和VE在油脂中的抗氧化性能測定Fig.14 The effect on induction time of L-AA，L-AP，L-AL and VE

3 結論

本文以L-AA和亞油酸為原料，通過超聲-酶法協(xié)同法合成L-AL，并通過條件優(yōu)化得到了其最佳合成條件，結果表明，相較常規(guī)酶催化合成方法［7-8］，超聲-酶法協(xié)同合成方法具有反應時間短，產(chǎn)率高等優(yōu)點。采用紅外、質譜及核磁共振碳譜確定了其結構，并通過與抗氧化劑L-AA、L-AP、L-AL和VE的抗氧化對比實驗，評價了其抗氧化能力。結果表明，相同質量濃度下L-AL與L-AP的還原能力相當;L-AL相較VE具有較好的還原能力以及清除羥基自由基和DPPH自由基的能力，但相較L-AA和L-AP，其能力較弱，這是因為在相同質量濃度的情況下，L-AL分子由于被鍵入的脂肪酸長鏈相對分子量更大，結果導致結構內(nèi)的抗氧化結構所占比重比L-AA和L-AP要小［14］，故使得其抗氧化效果稍弱，但由于L-AL油溶性更好，因此其在油脂中的抗氧化能力要強于L-AA。由以上結論可知，L-AL具有較好的清除羥基自由基、DPPH自由基的能力以及還原能力，并且對油脂有一定的抗氧化能力，是一種新型的、富有潛力的營養(yǎng)型抗氧化劑，有一定的應用潛力和商業(yè)價值。

［1］ Kuwabra K，Watanabe Y，Adachi S，et al.Stability of saturated acyl L-ascorbates in aqueous solution［J］.Journal of Food Science，2005，70(1):7-11.

［2］ 林富強，陳永恒，何松.L-抗壞血酸棕櫚酸酯在配方乳品中的應用［J］.現(xiàn)代食品科技，2010(10):1 114-1 116.

［3］ 李紅，陶靜，姚小娟.L-抗壞血酸棕櫚酸酯的化學合成工藝優(yōu)化［J］.中國食品添加劑，2010(5):144-148.

［4］ Micol V，Caturla N L，Perez-Fons V，et al.The olive leaf extract exhibits antiviral activity against viral haemorrhagic septicaemia rhabdovirus(VHSV)［J］.Antiviral Research，2005，66(2/3):129-136.

［5］ LU Yu-yun，YAN Ri-an，MA Xiang，et al.Synthesis and characterization of raffinose fatty acid monoesters under ultrasonic irradiation［J］.European Food Research Technology，2013，237(2):237-244.

［6］ 李明.紅花籽油中亞油酸的分離及微膠囊化［D］.無錫:江南大學，2006.

［7］ 趙瑩.非水相中酶法合成L-抗壞血酸亞油酸酯的初步研究［D］.上海:華東理工大學，2005.

［8］ 宋慶訓.抗壞血酸油酸酯和抗壞血酸亞油酸酯的生物催化合成及抗氧化活性研究［D］.上海:華東理工大學，2004.

［9］ SONG Qing-xun，ZHAO Ying，XU Wei-qin，et al.Enzymatic synthesis of L-ascorbyl linoleate in organic media［J］.Bioprocess and Biosystems Engineering，2006，28(4):211-215.

［10］ Oloyede G K，Willie I E，Adeeko O O.Synthesis of Mannich bases:2-(3-Phenylami-nopropionyloxy)-benzoic acid and 3-Phenylamino-1-(2，4，6-trimethoxy-phenyl)-propan-1-one，their toxicity，ionization constant，antimicrobial and antioxidant activities［J］.Food Chemistry，2014，165(20):515-521.

［11］ GAO Jie，ZHANG Ting，JIN Zheng-yu，et al.Structural characterisation，physicochemical properties and antioxidant activity of polysaccharide from Lilium lancifolium Thunb［J］.Food Chemistry，2015，169:430-438.

［12］ A gˇirtas M S，Karatas C，?zdemir S.Synthesis of some metallophthalocyanines with dimethyl 5-(phenoxy)-isophthalate substituents and evaluation of their antioxidant-antibacterial activities［J］.Spectrochimica Acta Part A:Molecular and Biomolecular Spectroscopy，2015，135(11):20-24.

［13］ 李卓，晏日安，曾永青.超聲波強化酶法合成L-抗壞血酸癸酸酯及其抗氧化性研究［J］.食品工業(yè)科技，2013，34(2):204-209.

［14］ Kharrat N，Aissa I，Sghaier M，et al.Lipophilization of ascorbic acid:a monolayer study and biological and antileishmanial activities［J］.Agricultural and Food Chemistry，2014，62(37):9 118-9 127.