飼料中喹乙醇的測(cè)定提取方法改進(jìn)

劉雪紅， 侯 穎， 喬 穎， 李 娜， 宋 平， 戚 驥， 李富榮， 陳 玲

（大連市獸藥飼料監(jiān)察所，遼寧大連 116037）

喹乙醇又稱喹酰胺醇，具有促進(jìn)畜禽對(duì)飼料的消化利用，提高生長(zhǎng)速度等作用。喹乙醇在配合飼料、濃縮飼料中添加量一般為50～400 mg/kg，在添加劑預(yù)混合飼料中添加量一般為1000 mg/kg。目前，采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 8381.7—2009飼料中喹乙醇的測(cè)定（高效液相色譜法）進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的取樣量和提取液量進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，當(dāng)添加濃度低于100 mg/kg時(shí)，回收率及重復(fù)性均能滿足要求；當(dāng)添加濃度高于100 mg/kg時(shí)，回收率低且重復(fù)性差。因此，在實(shí)際樣品檢測(cè)中，很可能將飼料產(chǎn)品錯(cuò)判。本實(shí)驗(yàn)考慮取樣均勻性及提取液體積，改進(jìn)了樣品處理方法。通過(guò)減少取樣量，增加提取液體積，提高了檢測(cè)準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備 電子天平RD-200，德國(guó)Sartorius公司；超聲波清洗器 KQ-250B，昆山市超聲儀器有限公司；往復(fù)振蕩搖床KS501，德國(guó)IKA公司；低速臺(tái)式大容量離心機(jī)RJ-TDL-40B，無(wú)錫瑞江分析儀器廠；數(shù)顯強(qiáng)力渦旋混合器MS3，德國(guó)IKA公司；超高效液相色譜儀，美國(guó)Waters公司；色譜柱 ACQUITY BEH C18：2.1 mm×100 mm，1.7 μm，Waters公司；固相萃取柱 Oasis HLB 1 mL 30 mg。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品 喹乙醇，批號(hào)H0061103，含量99.5%，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.2 供試品

1.2.2.1 空白樣品 乳豬配合飼料、育肥豬濃縮飼料、1%仔豬復(fù)合預(yù)混料，均為遼寧禾豐牧業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，經(jīng)檢測(cè)均不含喹乙醇。

1.2.2.2 空白添加樣品 分別按照 50、100、200、400、1000 mg/kg的比例在空白樣品中添加喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，混勻。

1.2.3 試劑 甲醇，色譜純；鹽酸，分析純；水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 提取液：甲醇∶水=5∶95。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制 準(zhǔn)確稱取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，于50 mL棕色容量瓶中，加30 mL水超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度搖勻，即為1000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。4℃保存，有效期為1個(gè)月。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制 精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液1 mL置100 mL容量瓶中，以水定容至刻度?；靹?，制成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)方法 稱取5 g試樣于具塞錐形瓶中，加入50 mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫振蕩器避光振蕩45 min（110 r/min）。提取液在3500 r/min下離心10 min，上清液經(jīng)濾紙過(guò)濾，濾液作為SPE小柱凈化使用。將濾液2 mL加入活化好的SPE小柱，分別用2 mL淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3淋洗小柱，并將小柱吹干。最后用2 mL洗脫液洗脫。洗脫液過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)測(cè)定。

1.3.2 改進(jìn)方法 稱取適量試樣 （按表1提取條件）于具塞錐形瓶中，加入提取液，具塞置入搖床中，其余步驟同標(biāo)準(zhǔn)方法。

表1 提取條件

1.3.3 液相色譜條件 柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

表2 梯度洗脫程序

2 結(jié)果

2.1 回收率及重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在空白樣品中分別添加不同濃度（50、100、200、400、1000 mg/kg）喹乙醇進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加濃度進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。分別按1.3.1和1.3.2進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3和表4。從表3可以看出，當(dāng)添加量為50 mg/kg時(shí)，回收率為90%，重復(fù)性好；當(dāng)添加量大于50 mg/kg時(shí)，回收率為15%～75%，重復(fù)性差，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大于15%。從表4可以看出，改進(jìn)方法后回收率為90%～101%，重復(fù)性好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。

表3 標(biāo)準(zhǔn)方法添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 改進(jìn)方法添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 實(shí)際樣品檢測(cè) 由表5可見(jiàn)，喹乙醇含量較低（100 mg/kg）的樣品，兩種提取方法的測(cè)定值雖然不一致，但不影響結(jié)果判定（配合料1和配合料2）；喹乙醇含量較高（大于100 mg/kg）的樣品，兩種提取方法的測(cè)定值不一致，影響結(jié)果判定（濃縮料1和濃縮料2）。

表5 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)飼料中喹乙醇含量時(shí)，應(yīng)根據(jù)喹乙醇的添加量大小，來(lái)決定取樣量和提取液體積。采用改進(jìn)的方法進(jìn)行檢測(cè)，提高了樣品的回收率和重復(fù)性。

[1]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫.GB/T 8381.7-2009[S].飼料中喹乙醇的測(cè)定-高效液相色譜法.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009-09-01.

[2]中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典（一部）[S].二〇一〇年版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.