ER-β在骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌中的表達

羅會芹，何義富，，姚藝瑋，閆 瀅，吳書勝，胡小秀，柯麗紅，牛佳郁，李慧敏，胡 冰，季楚舒

臨床醫(yī)學研究

ER-β在骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌中的表達

羅會芹1，何義富1，2，姚藝瑋1，閆 瀅2，吳書勝2，胡小秀2，柯麗紅2，牛佳郁2，李慧敏2，胡 冰1，季楚舒

目的檢測分析骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌中ER-β的表達，分析其與臨床預后相關性。方法應用免疫組織化學方法檢測經(jīng)病理證實骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌腫瘤組織標本中ER-β的表達，利用χ2檢驗檢測組間表達差異，生存率單因素采用Kaplan-Meier法及Log-rank方法分析，多因素采用COX回歸模型進行分析。結果46例骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌中ER-β總陽性78.3%，χ2檢驗未見性別、年齡、病理類型、骨轉移灶數(shù)目、有無骨外其他部位轉移、ALK及CEA影響ER-β表達，各組陽性率差異無統(tǒng)計學意義。多因素分析顯示ER-β為影響該類患者預后的獨立影響因素（P＝0.035），單因素分析可見ER-β陽性表達組的生存時間明顯長于陰性表達組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。另外ER-β陽性表達時腺癌、單發(fā)骨轉移患者能獲得較長的生存時間，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論骨轉移為首發(fā)的非小細胞肺癌ER-β表達陽性率高，ER-β陽性表達的患者預后明顯好于陰性患者，且其可能為影響患者預后的獨立影響因素，ER-β的陽性表達可能與腺癌及單發(fā)骨轉移患者的預后相關。

骨轉移癌；非小細胞肺癌；ER-β

乳腺癌是激素依賴性腫瘤，有研究者提出非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）也是激素依賴性腫瘤，并發(fā)現(xiàn)肺癌組織中存在雌激素受體（estrogen receptor，ER）［1］。ER位于核或胞質內，與雌激素結合即形成二聚體，通過與靶基因中的雌激素反應元件特異性結合刺激靶基因轉錄，從而促進細胞增殖和分化［2］。進一步文獻［3］報道肺癌組織中的ER包括雌激素受體-α（estrogen receptor-alpha，ER-α）和雌激素受體-β（estrogen receptor-beta，ER-β），主要為ER-β。有報道［4－5］顯示NSCLC組織中ER-β陽性表達約45%～69%，且其與肺癌患者的預后密切相關。臨床發(fā)現(xiàn)腫瘤組織雌激素受體陽性表達與骨轉移癌之間密切相關［6］。但目前國內外尚未見骨轉移為首發(fā)的NSCLC中ER-β表達及其與預后的相關性報道。該研究收集以骨轉移為首發(fā)表現(xiàn)的NSCLC 46例患者資料，就此類患者的ER-β表達及其與患者的預后關系加以分析，以期為臨床治療以及預后提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例資料 收集2010年8月～2012年8月以骨轉移為首發(fā)表現(xiàn)的NSCLC 57例患者資料，來自安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院41例，安徽省腫瘤醫(yī)院16例，資料不完整6例，拒絕治療5例，不計入分析，故46例患者納入本組分析，年齡46～66歲，中位年齡58歲，男女比例2∶1（31∶15），腺癌33例，鱗癌13例?；颊呔?jīng)肺穿刺活檢、骨活檢或其他轉移部位活檢取病理明確診斷。

1.1.2 骨轉移癌的診斷 ①病理診斷：骨轉移部位取組織活檢經(jīng)病理學明確診斷，共14例。②影像學診斷：骨掃描提示多發(fā)骨轉移；骨掃描陽性同時經(jīng)CT、MRI或X線任一證實；骨掃描陽性同時有臨床癥狀，如局部疼痛或壓痛、病理性骨折、截癱者；PET-CT提示骨轉移者。符合以上其中1條即診斷為骨轉移癌，共46例。③病理及影像學均支持診斷，共14例。

1.2 治療 所有患者均接受至少2個療程的鉑類藥物為基礎化療，一線化療方案為：吉西他濱或紫杉醇或長春瑞濱聯(lián)合鉑類，分別為12、17、17例。其中3例患者一線聯(lián)合使用重組人血管內皮抑素治療。在化療基礎上所有患者均接受雙磷酸鹽抗骨破壞治療至少1次，有疼痛患者，接受鎮(zhèn)痛治療，包括藥物及局部姑息性放療鎮(zhèn)痛，部分患者至外科行局部固定術。

1.3 免疫組織化學方法將石蠟包埋的癌組織切片，厚4 μm，常規(guī)脫蠟，60℃烤箱2 h修復，利用全自動免疫組化儀進行免疫組織化學染色。ER-β試劑盒購自北京博奧森生物有限公司，以細胞核或胞質出現(xiàn)典型棕黃色顆粒為陽性，每次試驗均設立陽性與陰性對照組，ER-β采用陽性的卵巢癌切片作為陽性對照組，PBS代替一抗作為陰性對照組。

1.4 隨訪方法采用電話、信件及門診的形式隨訪，生存期自確診肺癌骨轉移日期開始計算至死亡日期為止。如出現(xiàn)中途失訪、死于其他原因、隨訪截止則定義為截尾數(shù)據(jù)。生存時間以天表示，中位隨訪時間為24.0個月（3.0～36.0個月）。

1.5 統(tǒng)計學處理采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析，采用χ2檢驗檢測組間ER-β表達的差異，單因素分析采用Kaplan-Meier及Log-rank方法，多因素分析采用COX回歸模型。

2 結果

2.1 免疫組織化學結果ER-β陽性定位于腫瘤細胞質。見圖1。ER-β的總陽性率為78.3%，χ2檢驗未見各組間ER-β陽性率表達差異有統(tǒng)計學意義。見表1。

2.2 ER-β的表達與臨床特征及預后的關系多因素分析顯示ER-β可能為影響該類患者預后的獨立影響因素（P＜0.05），見表2。單因素分析可見ER-β陽性表達組的生存時間明顯長于陰性表達組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖2。另外ER-β陽性表達可能使腺癌（P＜0.05）、單發(fā)骨轉移（P＜0.05）患者獲得較長的生存時間。見表3。

3 討論

目前發(fā)現(xiàn)的雌激素亞型有3種，分別為ER-α、ER-β、ER-γ，ER-β主要分布于卵巢、雄性生殖器官、中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，以卵巢表達水平最高。目前研究［7］已表明ER-β在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌及肺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。近些年有研究［8］顯示肺癌組織的ER-β有較高的陽性表達，且與預后密切相關。

本研究顯示ER-β的表達在骨轉移為首發(fā)的NSCLC陽性率高達78.3%，較既往報道［5］的肺癌ER-β陽性表達45%～69%明顯高出。由此推測ER-β高表達的肺癌患者可能更易發(fā)生骨轉移。該組分析可見ER-β的表達與肺癌患者的年齡、性別、病理類型、骨轉移灶數(shù)目、有無骨外其他部位轉移及血清ALK、CEA升高與否無相關性，差異無統(tǒng)計學意義。這與Navaratnam et al［9］報道基本一致。

ER在乳腺癌組織的表達及其預測預后的積極作用已被臨床廣泛認可。研究［10］發(fā)現(xiàn)ER-β高表達的乳腺癌患者預后較差，然而該組分析發(fā)現(xiàn)ER-β陽性表達組的生存時間明顯長于陰性表達組，差異有統(tǒng)計學意義，且ER-β與骨轉移灶數(shù)目及病理類型同為骨轉移為首發(fā)癥狀NSCLC患者的獨立預后影響因素。究其原因可能是ER-β和表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）的表達呈負相關，而EGFR陽性表達是NSCLC的不良預后因素［11-12］。故猜想在骨轉移為首發(fā)癥狀NSCLC中 ER-β抑制了EGFR的表達，從而決定了較好的預后。但具體仍需試驗進一步驗證。此外ER-β的表達可能與腫瘤分化程度相關，分化程度越高，ER陽性表達率越高，從而決定了較好的預后。更甚者認為ER-β陰性表達NSCLC患者即使處于臨床早期仍屬于高風險人群［13］。故臨床上可利用檢測ER-β的表達判斷骨轉移為首發(fā)的NSCLC治療效果及預后。

目前乳腺癌的雌激素治療已廣泛應用于臨床，且取得了較好的效果。骨轉移為首發(fā)的NSCLC就診時已處于臨床晚期，無手術時機，預后差。該組中位生存時間僅237 d，傳統(tǒng)的治療多是鉑類為基礎的化療聯(lián)合支持治療，但療效均欠佳，主要原因是腫瘤細胞對化療易產(chǎn)生耐藥。內分泌治療可能通過改變激素依賴性腫瘤生長所需的內分泌微環(huán)境，促使腫瘤細胞增殖停滯于G0／G1期，從而使疾病得到緩解。同時還可作為化療的多藥耐藥調節(jié)劑，具有化療增敏、逆轉耐藥作用。國際肺癌聯(lián)盟的一項來自多中心的研究［14］顯示口服避孕藥或接受雌激素或雌、孕激素聯(lián)合治療的肺癌患者風險顯著下降。三苯氧胺是ER陽性表達的乳腺癌患者最常見的激素治療藥物，近些年逐漸被應用于NSCLC的治療。其目前主要是通過與傳統(tǒng)化療藥物或靶向藥物聯(lián)合治療肺癌實現(xiàn)抗腫瘤作用，例如三苯氧胺聯(lián)合鹽酸?？颂婺峥擅黠@增加NSCLC的化療療效［15］。故可認為雌激素受體聯(lián)合化療可顯著提高化療療效，增加患者耐受性，從而延長生存時間。

綜上所述，ER-β在骨轉移為首發(fā)NSCLC中表達率高，且和患者預后密切相關，ER-β陽性表達患者生存期明顯延長，故ER-β可作為預后指標指導臨床醫(yī)師評估患者病情。關于ER-β的表達及肺癌的內分泌治療療效值得臨床進一步探索分析。因本組樣本量較少，故分析存在局限性，仍需擴大樣本進一步研究。

［1］ Beattie C W，Hansen N W，Thomas P A.Steroid receptors in human lung cancer［J］.Cancer Res，1985，45（9）：4206－14.

［2］ Burek M，Steinberg K，F(xiàn)?rster C Y.Mechanisms of transcriptional activation of the mouse claudin-5 promoter by estrogen receptor alpha and beta［J］.Mol Cell Endocrinol，2014，392（1-2）：144－51.

［3］ Siegfried J M，Stabile L P.Estrongenic steroid hormones in lung cancer［C］／／Seminars in oncology.WB Saunders，2014，41（1）：5－16.

［4］ Atmaca A，AI-Batran S E，Wirtz R M，et al.The validation of estrogen receptor 1 mRNA expression as a predictor of outcome in patients with metastatic non-small cell lung cancer［J］.Int J Cancer，2014，134（10）：2314－21.

［5］ Siegfried J M，Hershberger P A，Stabile L P.Estrogen receptor signaling in lung cancer［C］／／Seminars in oncology.WB Saunders，2009，36（6）：524－31.

［6］ Chen L，Zhang Z，Qiu J，et al.Chaperonin CCT-mediated AIB1 folding promotes the growth of ERα-positive breast cancer cells on hard substrates［J］.PLoS One，2014，9（5）：e96085.

［7］ Bogush T A，Dudko E A，Beme A A，et al.Estrogen receptor expression in tumors different from breast cancer［J］.Antibiot Khimioter，2009，54（7－8）：41－9.

［8］ Monica V，Longo M，F(xiàn)elice B，et al.Role of hormone receptor expression in patients with advanced-stage lung cancer treated with chemotherapy［J］.Clin Lung Cancer，2012，13（6）：416－23.

［9］ Navaratnam S，Skliris G，Qing G，et al.Differential role of estrogen receptor beta in early versus metastatic non-small cell lung cancer［J］.Horm Cancer，2012，3（3）：93－100.

［10］Rizza P，Barone I，Zito D，et al.Estrogen receptor beta as a novel target of androgen receptor action in breast cancer cell lines［J］. Breast Cancer Res，2014，16（1）：R2.

［11］Marotti J D，Collins L C，Hu R，et al.Estrogen receptor-beta expression in invasive breast cancer in relation to molecular phenotype：results from the Nurses＇Health Study［J］.Mod Pathol，2010，23（2）：197－204.

［12］Koz?owski M，Laudański W，Mroczko B，et al.Serum tissue inhibitor of metalloproteinase 1（TIMP-1）and vascular endothelial growth factor A（VEGF-A）are associated with prognosis in esophageal cancer patients［J］.Adv Med Sci，2013，18：1－8.

［13］Kawai H，Ishii A，Washiya K，et al.Estrogen receptor alpha and beta are prognostic factors in non-small cell lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2005，11（14）：5084－9.

［14］Pesatori A C，Carugno M，Consonni D，et al.Hormone use and risk for lung cancer：a pooled analysis from the International Lung Cancer Consortium（ILCCO）［J］.Br J Cancer，2013，109（7）：1954－64.

［15］Ko J C，Chiu H C，Syu J J，et al.Tamoxifen enhances erlotinibinduced cytotoxicity through down-regulating AKT-mediated thymidine phosphorylase expression in human non-small-cell lung cancer cells［J］.Biochemical pharmacology，2014，88（1）：119－27.

The expression of ER-β in NSCLC with symptoms of bone metastases at time of diagnosis

Luo Huiqin1，He Yifu1，2，Yao Yiwei1，et al
（1Dept of Medical Oncology，The Affiliated Provincial Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230001；2
Dept of Medical Oncology，Anhui Provincial Cancer Hospital，Hefei 230001）

ObjectiveTo analyze the relationship between ER-β and clinical prognosis by detecting its expression in NSCLC with symptoms of bone metastases at the time of diagnosis.MethodsThe expression of ER-β in tissues was investigated by immunohistochemistry.The differences between groups were analyzed by chi-square test.The survival rates were calculated using the Kaplan-Meier method.The log-rank method was used for univariate analysis，and the Cox regression model was used for multivariate analysis.ResultsThe positive percentage of ER-β expressed in 46 NSCLC patients with bone metastases at the time of diagnosis was 78.3%.The expression of ER-β had no difference among groups of sex，age，tumor subtype，number of bone metastases，more than one bone metastasis，ALK，CEA.Chi-square test did not find statistical differences of ER-β expression among groups.Multivariate analysis showed that ER-β was an independent predictor of overall survival（OS）（P＝0.035）.Univariate analysis showed that the patients who had ER-β positive expression had longer survival time（P＜0.05）.The patients with lung adenocarcinoma or NSCLC with single bone metastasis who present with ER-β positive expression had a significant superior survival rate to ER-β negative expression patients（P＜0.05）.ConclusionHigher expression of ER-β was found in NSCLC patients with bone metastases at time of diagnosis.The patients with ER-β positive expression have a favorable prognosis，and it may be an independent prognosis predictor of these patients. In addition，ER-β positive expression may be closely related with OS of NSCLC patients who have single bone metastasis or adenocarcinoma.

bone metastasis；NSCLC；ER-β

R 734.2

1000－1492（2015）01－0062－04

2014－09－18接收

安徽省自然科學基金（編號：1408085MH179）；安徽省衛(wèi)生廳醫(yī)學科研課題（編號：13zc012）

1安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院腫瘤科，合肥 2300012安徽省腫瘤醫(yī)院腫瘤內科，合肥 230001

羅會芹，女，碩士研究生；何義富，男，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導師，責任作者，E-mail：heyifu＠csco.org.cn