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    抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體提取方法探究

    2015-12-14 09:23:26張桂榮王振輝劉玉梅劉
    獸醫(yī)導(dǎo)刊 2015年18期
    關(guān)鍵詞:辛酸脫脂效價(jià)

    張桂榮王振輝劉玉梅劉 軍

    (1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹(shù)鎮(zhèn)畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正業(yè)生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

    抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體提取方法探究

    張桂榮1王振輝1劉玉梅2劉 軍3

    (1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹(shù)鎮(zhèn)畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正業(yè)生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

    為了探究抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體的最佳提取方法。采用泊洛沙姆法卵黃抗體的脫脂方法試驗(yàn)。通過(guò)對(duì)濃度、蛋白質(zhì)含量、效價(jià)等結(jié)果進(jìn)行比較。試驗(yàn)結(jié)果顯示:由泊洛沙姆作為脂肪沉淀劑,其泊洛沙姆濃度為1.2%、辛酸濃度為0.2%時(shí)制得的抗體物理性狀好,抗體收率最高,效價(jià)高,抗體效價(jià)為1:64。

    雛鴨病毒性肝炎;卵黃抗體;脫脂

    1 方法

    1.1 免疫雞蛋收集與蛋黃的分離

    取收集的雞蛋,浸入42℃的0. 1%新潔爾滅水溶液中消毒15 min;隨后將雞蛋浸入溫度為95℃以上的水中消毒5 s,取出后于無(wú)菌條件下晾干或吹干;打蛋分離蛋清與卵黃,充分除去蛋清和卵黃系膜,將卵黃收集于一容器中,攪拌均勻,然后分別裝在三個(gè)容器內(nèi)。

    1.2 泊洛沙姆法雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體去脂試驗(yàn)[1]

    泊洛沙姆法提卵黃抗體步驟

    1.2.1 泊洛沙姆濃度的優(yōu)化

    分別取卵黃液20ml,用去離子水做4倍稀釋?zhuān)尤氩绰迳衬罚蛊浣K濃度分別為0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%。靜置后用紗布過(guò)濾,取上清。

    1.2.2 pH值的優(yōu)化

    分別取卵黃液20ml,用去離子水做4倍稀釋?zhuān)尤氩绰迳衬?,使其終濃度為上步所得的最佳濃度。用稀鹽酸調(diào)pH值,使pH值分別為5.2、5.7、6.2、6.7、7.2、7.7。靜置后用紗布過(guò)濾,取上清。

    1.2.3 辛酸濃度的優(yōu)化

    分別取卵黃液20ml,用去離子水做4倍稀釋?zhuān)尤氩绰迳衬?,使其終濃度為上步所得的最佳濃度和pH。靜置后用紗布過(guò)濾,取上清,加入不同濃度辛酸,靜置48h。此后去除上層脂肪層,將粗提的抗體液用微孔濾器過(guò)濾至澄清。

    1.3 脫脂抗體的效價(jià)測(cè)定[2]

    采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)。將1%瓊脂溶于100ml的8%NaCl溶液的適量稀釋后的抗體與等量瓊脂混勻加入約0.01%的硫氯汞鈉鹽作為防腐劑,澆注成板,凝固后,在板上打孔,孔徑3mm,孔間距10mm,孔中加入抗原,每孔10μl,放置濕盒中,37℃溫箱,抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò)散,邊擴(kuò)散邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。24~48h后觀察結(jié)果。

    1.4 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定

    將制得的抗體液用飽和硫酸銨法沉淀蛋白后,各組試驗(yàn)樣品以同樣的稀釋倍數(shù)稀釋?zhuān)肗D-1000型紫外分光光度計(jì)測(cè)定卵黃抗體的蛋白含量。

    2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

    2.1 泊洛沙姆法的脫脂及效價(jià)測(cè)定結(jié)果

    2.1.1 泊洛沙姆濃度的結(jié)果

    表1 不同泊洛沙姆濃度的結(jié)果

    表1可見(jiàn),隨著泊洛沙姆濃度的增大,卵黃抗體水溶液逐漸澄清,顏色逐漸變淡,蛋白質(zhì)濃度逐漸降低。1%~1.4%為不影響效價(jià)的濃度范圍,當(dāng)泊洛沙姆濃度增加到1.6%及以上時(shí),抗體效價(jià)開(kāi)始降低。綜合考慮,故選1.4%的濃度為宜。

    2.1.2 泊洛沙姆沉淀法沉淀離心條件的結(jié)果

    表2 不同離心條件的結(jié)果

    表2表明,不同離心速度離心結(jié)果與不離心直接紗布過(guò)濾處理結(jié)果無(wú)明顯區(qū)別。泊洛沙姆的沉淀脂肪效果很好,不用離心處理即可得到清澈透明。用泊洛沙姆提取卵黃抗體可以簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝。

    2.1.3 辛酸濃度的結(jié)果

    表3 不同辛酸濃度的結(jié)果

    表3表明,隨著辛酸濃度的增大,蛋白質(zhì)濃度逐漸降低,辛酸濃度為0.2%時(shí)抗體效價(jià)為1:64。結(jié)果表明1.4%的泊洛沙姆濃度和0.2%的辛酸濃度是最合適的。

    3 討論

    脂類(lèi)約占卵黃總量的90%,大量脂類(lèi)的存在導(dǎo)致卵黃粘稠度很高,未經(jīng)去脂的高免卵黃液,容易堵塞注器,注射到動(dòng)物體內(nèi)吸收慢,在注射部位易滯留而影響肉的品質(zhì),并有醫(yī)源性感染的危險(xiǎn)。為避免上述缺點(diǎn),泊洛沙姆可以使卵黃脂類(lèi)迅速沉淀,提取的抗體液澄清,抗體效價(jià)降低較少,可以提高卵黃脂類(lèi)的分離

    速度,簡(jiǎn)化工藝流程。其缺點(diǎn)是價(jià)格相對(duì)稍貴;泊洛沙姆是無(wú)毒無(wú)害的藥用輔料,所以本試驗(yàn)最終確定由更為安全的泊洛沙姆代替PEG-6000作為脂肪沉淀劑。

    4 結(jié)論

    采用泊洛沙姆法卵黃抗體的脫脂方法,可獲得穩(wěn)定效價(jià)、穩(wěn)定性狀的脫脂抗體液。綜合比較,濃度1.2%的泊洛沙姆抗體效價(jià)結(jié)果最佳,抗體損失量少,制備工藝簡(jiǎn)單,更適合于工業(yè)進(jìn)一步擴(kuò)大生產(chǎn)研究。

    [1] 閔嗣璠,李彬,萬(wàn)思平,等.PEG6000用于卵黃抗體提取條件初探[J].食品科學(xué),2007,(2):8.

    [2] 徐錫殿,臧福學(xué).泊洛沙姆對(duì)雞卵黃脫脂作用的研究[J].山東家雞,2004,(2):10-11.

    張桂榮(1962—),女,吉林省公主嶺市人,副教授,碩士,預(yù)防獸醫(yī)學(xué)方向。

    此篇文章是教育廳2012年項(xiàng)目論文 論文項(xiàng)目基金編號(hào):吉教科合字[201]

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