高效液相色譜法同時(shí)測定唇齒清胃丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量

張秀麗 李 鑫 張瑩瑩 勾曉丹

高效液相色譜法同時(shí)測定唇齒清胃丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量

張秀麗 李 鑫 張瑩瑩 勾曉丹

目的 探討一種同時(shí)測定唇齒清胃丸中黃芩苷和鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜法。方法 以 Kromasil100-5 C18柱（4.6 mm×150.0 cm，5 μm）為色譜柱；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫；檢測波長278 nm，柱溫30 ℃，流速為1.0 ml/min。結(jié)果 鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0124～0.3100 μg，進(jìn)樣量0.0217～0.5425 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為99.1%、99.04%，RSD分別為0.94%、0.85%（n=6）。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可靠專屬性強(qiáng)、結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好。

唇齒清胃丸；鹽酸小檗堿：黃芩苷；高效液相色譜法

唇齒清胃丸是由大黃、黃芩、黃柏、地黃等十四味藥制備而成的大蜜丸[1]，具有清胃火之功效，用于由胃火引起的牙齦腫痛、口干唇裂、咽喉痛。制劑中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效[2-3]。本品收載于衛(wèi)生管理部門藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第3冊，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有性狀、鑒別及常規(guī)的檢查項(xiàng)，無含量測定項(xiàng)，無法有效地控制藥品質(zhì)量，方中黃芩與黃柏的主要有效成分分別為黃芩苷與鹽酸小檗堿[4-6]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定黃芩苷和鹽酸小檗堿，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 采用島津 LC-20AT型高效液相色譜儀（包括LC-AT型紫外檢測器，LC solution 色譜工作站），CPA225D電子分析天平（德國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），9860A型超聲波清洗器（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試劑 黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715-201318，純度 93.3%），鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-200911，純度 86.8%），唇齒清胃丸（長春人民藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z22021094，批號(hào)：20130301、20130402、20130406），乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil100-5 C18柱（4.6 mm ×150.0 cm，5 μm）；流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫：0～10 min，A-B（21∶79）；10～30 min，A-B（33∶67）；檢測波長278 nm，柱溫30 ℃，流速1.0 ml/min；在此色譜條件下，鹽酸小檗堿和黃芩苷之間以及與其他相關(guān)鄰雜質(zhì)峰的分離度均符合要求（R＞1.5），理論板數(shù)以黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于6 000[7]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品2.17 mg與鹽酸小檗堿對照品1.24 mg，分別置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷與鹽酸小檗堿對照品貯備液。精密吸取1 ml置同一10 ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml黃芩苷0.0217 mg、鹽酸小檗堿0.0124 mg的混合對照溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取質(zhì)量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，精密稱取0.3024 g，置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 ml，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率260 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照液的制備 按處方比例稱取黃芩、黃柏以外的藥材，按照處方制備工藝制備缺黃芩、黃柏的陰性樣品。按照供試品溶液的制備方法操作，得缺黃芩、黃柏的陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 在2.1項(xiàng)下的色譜條件對供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液進(jìn)行分析，從圖1中可以看出，陰性樣品色譜圖上與黃芩苷和鹽酸小檗堿對照品相同保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，對供試品測定無干擾。

圖1 唇齒清胃丸高效液相色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖并測定峰面積積分值，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍，分別得回歸方程為：黃芩苷Y=80049.3X－10440.9，r=0.9996，鹽酸小檗堿Y=47036.4X－14883，r=0.9999。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.0217～0.5425 μg，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0124～0.3100 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算，黃芩苷和鹽酸小檗堿的RSD分別為0.46%、0.57%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20130301）適量，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，在確定的色譜條件下進(jìn)行分析，黃芩苷的RSD為0.63%，鹽酸小檗堿的RSD為0.72%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液10 μl（批號(hào)為20130301）按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)行測定，以峰面積計(jì)算，結(jié)果黃芩苷與鹽酸小檗堿的RSD分別為0.32%、0.45%，表明24 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已測定黃芩苷、鹽酸小檗堿的供試品（批號(hào)20130301，黃芩苷含量為5.3678 mg/g，鹽酸小檗堿含量為1.5114 mg/g）6份，每份0.15 g，置具塞錐形中，分別精密加入黃芩苷對照品貯備液4 ml和鹽酸小檗堿對照品貯備液2 ml，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.4 樣品含量測定 取3批樣品，按2.2.2項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，采用外標(biāo)峰面積法計(jì)算樣品中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，見表2。

表2 樣品中黃芩苷和鹽酸小檗堿的測定結(jié)果(mg/g)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 以甲醇為溶劑，分別在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描黃芩苷與鹽酸小檗堿的紫外吸收光譜圖，結(jié)果黃芩苷在274 nm有最大吸收，鹽酸小檗堿在 266 nm有最大吸收[8]。但在278 nm處有等吸收點(diǎn)，所以本實(shí)驗(yàn)選擇278 nm作為檢測波長，黃芩苷與鹽酸小檗堿均有較好的靈敏度，且分離度良好。

3.2 提取溶劑的選擇 提取樣品主成分時(shí)分別采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇與乙醇作為溶劑，對3種溶劑的提取率進(jìn)行比較，研究表明結(jié)果與乙醇含量無影響，故選70%乙醇作為提取溶劑。

3.3 提取時(shí)間的選擇 樣品分別超聲處理10、20、30、40 min，測定黃芩苷與鹽酸小檗堿，結(jié)果超聲30、40 min含量無差異，故選擇超聲處理30 min。

3.4 溶劑用量的選擇 取樣品分別加入 70%乙醇25、50、100 ml，制備供試品溶液，測定黃芩苷與鹽酸小檗堿，結(jié)果溶劑用量50、100 ml含量無差異，故選用50 ml作為提取溶劑。

[1]中華人民共和國國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典∶2010年版一部[S].北京∶中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2]吳雪丹,丁寶月,傅應(yīng)華.HPLC法測定復(fù)方苦參洗劑中鹽酸小檗堿和黃芩苷[J].中成藥,2012,34(5)∶868-871.

[3]陳風(fēng),黃登亮.HPLC法同時(shí)測定乙肝解毒膠囊中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥事,2008,22(8)∶686-688.

[4]趙嚴(yán)麗，陳淑娟.高效液相色譜法測定消渴平膠囊中鹽酸小檗堿含量[J].中國藥業(yè),2014,23(1)∶10-11.

[5]高文學(xué),劉斌.HPLC測定前列通膠囊中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國現(xiàn)代中藥,2013,15(11)∶992-994.

[6]王敏,王逢春,郭琪.高效液相色譜法測定半夏瀉心口服液中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].解放軍醫(yī)藥雜志,2013,25(10)∶76-78.

[7]瘳偉明,劉桂珍,周國波.HPLC法測定小兒止咳顆粒中黃芩苷的含量[J].中國藥房,2010,21(31)∶2946-2947.

[8]葉建晨,高效液相色譜法同時(shí)測定芩連膠囊中及鹽酸小檗堿含量[J].中國藥業(yè),2013,22(6)∶61-63.

Determination of Baicalin and Bererin Hydrochloride in Chunchiqingwei pills by HPLC

Zhang Xiuli Li Xin Zhang Yingying Gou Xiaodan

Objective To invtstigating a HPLC method for determination of Baicalin and Bererin Hydrochloride in Chunchiqingwei pills.Methods Using Kromasil100-5 C18column(4.6 mm×150.0 cm,5 μm) as chroma-tography, acetonitrile as mobile phase A,0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution as mobile phase B,the gradient elution was used;The detection wavelength was 278nm,the column temperature was 30℃,the flow rate was 1.0ml/min.Results Berberine Hydrochloride in 0.0124～0.3100 μg,Baicalin in 0.0217～0.5425 μg range has a good linear relation,the average recoveries were 99.1%,99.04%,RSD respectively 0.94%,0.85%(n=6).Conclusion The method is accurate and reliable results of strong specificity,stability,repeatability.

Chunchiqingwei pills;Baicalin;Berberine Hydrochloride;HPLC

R927.2

A

1673-5846(2015)01-0025-03

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧朝陽 122000