滁菊鮮品與干品中化學(xué)成分的色譜分析

沈 潔，郭立瑋

(1.南京市第二醫(yī)院藥劑科，江蘇 南京 210003;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥復(fù)方分離工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210023)

滁菊為菊科植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥頭狀花序，主產(chǎn)于安徽滁州，為我國(guó)的道地藥材之一［1］，具有散風(fēng)清熱，平肝明目，清熱解毒之功效［2］。為儲(chǔ)存和臨床使用方便，滁菊多在采收后陰干、焙干或曬干后入藥［3］?，F(xiàn)代研究表明，滁菊中的揮發(fā)油對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌、流感病毒等有明顯的的抑制作用，其中的桉葉油素、龍腦、桉葉二烯酮明顯高于其他菊花［4］。因此，筆者通過(guò)氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)和高效液相色譜(HPLC)法，對(duì)滁菊鮮品與干品中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析比較，旨在為該藥材的干燥加工和合理使用提供參考。

1 儀器與試劑

Agilent 6890N5973氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó))，Waters 515/2487高效液相色譜儀，乙腈為色譜純(德國(guó)Merck公司)，甲醇為色譜純(德國(guó)Merck公司)，乙醚為分析純(揚(yáng)州三和化工有限公司)，滁菊鮮品由滁州市滁菊研究所提供，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室吳啟南教授鑒定符合2010年版《中國(guó)藥典》一部的規(guī)定，滁菊干品由鮮品經(jīng)60℃干燥2 h得到。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 揮發(fā)油的提取 按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法［5］，取滁菊鮮品、干品各100 g，剪碎，置于3 000 mL圓底燒瓶中，并在瓶中加入少量沸石，加入1 200 mL蒸餾水浸泡2h，用揮發(fā)油提取器采用水蒸氣蒸餾法提取10 h，即得揮發(fā)油。

2.2 GC－MS分析

2.2.1 供試品溶液的制備 將水蒸氣蒸餾法提取的滁菊鮮品和干品的揮發(fā)油，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水后，以乙醚為溶劑分別配成濃度0.1%的溶液，進(jìn)GC－MS分析。

2.2.2 GC條件 石英毛細(xì)管柱HP－5MS;進(jìn)樣口溫度:280℃，程序升溫:60～130℃，4℃·min－1，130℃保持5 min，再以6℃·min－1的速度升溫到280℃，280℃保留2 min。不分流進(jìn)樣。

2.2.3 MS條件 電轟擊電離(EI)源，電離電壓70 eV;離子源溫度250℃;四極桿溫度160℃;掃描范圍40～400 aum。

2.3 HPLC 分析

2.3.1 供試品溶液的制備 分別取滁菊鮮品7 g、干品碎花1 g(根據(jù)鮮品的含水量進(jìn)行折算)，加甲醇20 mL，超聲提取30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液定容至10 mL量瓶中，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.3.2 HPLC 條件 色譜柱:Hypersil ODS2(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，大連依利特公司;流動(dòng)相:乙腈—甲醇—水(20∶40∶100);流速:1.0 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):349 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:5μL。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 GC-MS結(jié)果分析 按“2.2”項(xiàng)下 GC-MS條件對(duì)滁菊鮮品和干品的揮發(fā)油分別進(jìn)行測(cè)試，得到總離子流圖，見(jiàn)圖1，2;對(duì)總離子流圖中的各峰進(jìn)行MS掃描，所得MS圖再通過(guò)計(jì)算機(jī)檢索并與標(biāo)準(zhǔn)MS圖相對(duì)照，從中鑒定出了鮮品與干品揮發(fā)油中的部分化合物，經(jīng)面積歸一化法測(cè)定各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［6］，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 滁菊鮮品與干品中揮發(fā)油的化學(xué)成分對(duì)比結(jié)果

峰號(hào) 保留時(shí)間/min 分子式 中文名 鮮品質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%干品質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%37 33.469 C21 H36 O4 2，3－ 羥丙基 －(Z，Z，Z)9，12，15－十八碳三烯酸酯0.06—38 33.618 C17 H34 O 2 － 七癸酮 0.13 0.09 39 33.758 C17H32 O4二丁基壬二酸酯0.40 0.26 40 34.076 C17 H34 O2 14－甲基－十五酸甲酯0.08 0.10 41 34.871 C16H32 O2 正十六碳酸 4.35 8.63 42 36.680 C18 H34 O2 油酸 23.01 23.72 43 39.991 C21 H40 O3 環(huán)氧丙醇 2.23 1.90 44 40.118 C35 H68 O5 1－羥甲基－1，2－二乙基－十六烷酸酯0.19 0.37 45 41.886 C38 H74 O2二十四烷基油酸酯0.13 －46 42.725 C27H56 二十七烷 1.37 1.21 47 45.016 C27 H52 O4 Si2 2，3－二［(三甲基硅烷基)氧］丙酯 －(Z，Z，Z)9，12，15 － 十八碳三烯酸0.32 0.44 48 45.214 C26H54 3－乙基－5(2－－乙基丁基)－十八烷0.29 0.17 49 46.315 C27H52O4Si2 2，3 － 二(三甲基硅烷基)丙基(Z，Z，Z)－ 9，12，15－十八碳三烯酸酯0.50 0.49合計(jì)77.08 80.35

3.2 HPLC指紋圖譜及相似度評(píng)價(jià) 按“2.3”項(xiàng)下HPLC條件對(duì)滁菊鮮品和干品的提取物分別進(jìn)行測(cè)試，得到鮮品和干品的HPLC指紋圖譜，見(jiàn)圖3，4;將采集的HPLC圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004 A版)”，進(jìn)行譜峰匹配和相似度計(jì)算［7］，結(jié)果分別見(jiàn)表2，結(jié)果發(fā)現(xiàn)滁菊鮮品和干品的化學(xué)成分有較大差別，指紋圖譜的相似度不高。

表2 菊花鮮品與干品中成分的HPLC指紋圖譜相似度

4 討論

滁菊中揮發(fā)性成分主要包括烴類(lèi)、醛類(lèi)、酮類(lèi)、醇類(lèi)、酸類(lèi) 、酯類(lèi)、雜環(huán)類(lèi)和酚類(lèi)等化合物［8］，成分比較復(fù)雜，對(duì)其揮發(fā)性成分的分析技術(shù)要求較高。GC－MS聯(lián)用技術(shù)廣泛用于植物揮發(fā)油和精油化學(xué)成分分析［9］，因此本文選擇GC－MS對(duì)滁菊鮮品和干品的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分離鑒定。由表1可知，滁菊鮮品和干品中的揮發(fā)性成分存在著差別:滁菊鮮品中鑒定出43個(gè)成分，經(jīng)面積歸一化法測(cè)定各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，占總峰面積的77.08%;相對(duì)百分含量在1%以上的是樟腦、龍腦、4α－甲基－1－亞甲基 －7－(1－ 甲基乙烯基)－ ［4αR －(4aà，7à，8aá)］－十氫萘、表藍(lán)桉醇、雪松－8－烯－13－醇、芹子－6－烯－4－醇、喇叭茶醇、正十六碳酸、環(huán)氧丙醇、油酸、二十七烷等;干品中鑒定出41個(gè)成分，經(jīng)面積歸一化法測(cè)定各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，占總峰面積的80.35%;相對(duì)百分含量在1%以上的是樟腦、龍腦、4α－甲基－1－亞甲基－7－(1－甲基乙烯基)－ ［4αR －(4aà，7à，8aá)］－ 十氫萘、表藍(lán)桉醇、二表雪松烯－1－氧化物、反式－長(zhǎng)松香芹醇、芹子－6－烯－4－醇、喇叭茶醇、正十六碳酸、環(huán)氧丙醇、油酸、二十七烷等;鮮品中有8個(gè)成分在干品中未測(cè)到，說(shuō)明滁菊經(jīng)干燥后有一些成分揮發(fā)了;而干品中新出現(xiàn)了6個(gè)成分在鮮品中未測(cè)到，說(shuō)明滁菊在干燥過(guò)程中揮發(fā)性成分發(fā)生了變化。此外，滁菊鮮品與干品的HPLC指紋圖譜顯示，鮮品與干品的化學(xué)成分存在著較大的區(qū)別，同時(shí)兩者的指紋圖譜相似度較低，進(jìn)一步說(shuō)明滁菊經(jīng)干燥后成分發(fā)生了較大的變化。

滁菊為國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品，因具有良好的藥用功效，被譽(yù)為我國(guó)“四大藥菊”之首［10］。有關(guān)藥理學(xué)研究表明，滁菊的主要成分為黃酮類(lèi)、揮發(fā)油萜類(lèi)化合物及綠原酸等，具有多種生理活性，有很好的應(yīng)用開(kāi)發(fā)價(jià)值［11－14］。為了儲(chǔ)存和臨床使用的方便，滁菊多以干品入藥或食用，本文的GC－MS和HPLC研究結(jié)果表明，滁菊經(jīng)60℃干燥后的干品與鮮品的成分已經(jīng)發(fā)生了較大變化，因此滁菊在干燥工藝上應(yīng)選擇低溫干燥，以保持滁菊的原有成分及功效。

［1］俞 浩，張成孜，毛斌斌.滁菊多糖抗疲勞耐缺氧作用效果觀察［J］.食品工業(yè)科技，2014，35(12):365 －367，372.

［2］張蓓蓓，陳志武，羅勝勇，等.滁菊總黃酮的鎮(zhèn)痛作用及與一氧化氮和前列腺素E2的關(guān)系［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，49(3):323－326.

［3］劉漢珍，俞 浩，毛斌斌，等.不同貯藏溫度對(duì)滁菊鮮品有機(jī)酸、黃酮類(lèi)成分的影響［J］.安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，28(5):34－37.

［4］張蓓蓓.滁菊總黃酮的鎮(zhèn)痛抗炎作用及部分機(jī)制研究［D］.合肥:安徽醫(yī)科大學(xué)，2013.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄63.

［6］謝 彬，顧 健，譚 睿，等.藏藥打箭菊揮發(fā)油的GC－MS分析［J］.中國(guó)藥房，2014，25(3):260 －261.

［7］樊文玲，郭立瑋，林 瑛，等.膜富集荊芥等6種揮發(fā)油過(guò)程中的共性規(guī)律研究——理化性質(zhì)和指紋圖譜相似度［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38(20):3461 －3466.

［8］韓 婷，毛 健，姬中偉，等.滁菊揮發(fā)性成分的全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜研究［J］.食品科學(xué)，2013，34(2):159 －164.

［9］賈淑云，王 斌.HS－GC－MS法測(cè)定績(jī)獨(dú)活中揮發(fā)性成分［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18(8):1429 －1433.

［10］謝 越，俞 浩，汪建飛，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定滁菊樣品中的9種酚酸［J］.分析化學(xué)，2013，41(3):383－388.

［11］熊 磊，姚應(yīng)水，陳祥攀.滁菊化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34(14):2109 －2111.

［12］王 甜，趙明月，徐秀娟，等.滁菊總黃酮提取條件優(yōu)化研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2015，27(4):661 －666.

［13］劉保華，汪冬庚，周?chē)?guó)梁.滁菊揮發(fā)油的抗炎實(shí)驗(yàn)研究［J］.化學(xué)與生物工程，2015，32(2):57 －59.

［14］舒俊生，黃桂東，毛 健，等.滁菊95%乙醇提取液中黃酮類(lèi)和酚酸類(lèi)物質(zhì)的鑒定及分離［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2013，13(4):207－213.