光譜法研究羧甲基殼聚糖與牛血清白蛋白的相互作用

葛杏莉，賈　弦，汪　鑫，齊　炎，夏彩芬

(湖北工程學(xué)院 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北 孝感 432000)

光譜法研究羧甲基殼聚糖與牛血清白蛋白的相互作用

葛杏莉，賈弦，汪鑫，齊炎，夏彩芬*

(湖北工程學(xué)院 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北 孝感 432000)

摘要:采用熒光光譜法、紫外光譜法、紅外光譜法和圓二色譜法研究了羧甲基殼聚糖(CMCS)與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用過程及機理。研究結(jié)果表明，CMCS對BSA的內(nèi)源熒光有猝滅作用，且為靜態(tài)猝滅；紫外光譜分析表明，CMCS與BSA分子發(fā)生了相互作用，形成了基態(tài)復(fù)合物；圓二色譜和紅外光譜分析結(jié)果表明，CMCS與BSA中肽鍵發(fā)生作用，α-helix結(jié)構(gòu)含量發(fā)生改變，使BSA二級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化；三維熒光的實驗結(jié)果表明，當(dāng)在BSA中加入CMCS后，分子全局的內(nèi)源熒光強度明顯降低；同步熒光和位點競爭實驗結(jié)果表明，CMCS與BSA 的結(jié)合位點更接近于色氨酸殘基，結(jié)合部位為Site I。

關(guān)鍵詞：羧甲基殼聚糖；牛血清白蛋白；熒光光譜法；圓二色譜法；紫外光譜法

中圖分類號：O636.1

文獻標(biāo)志碼：碼：A

文章編號：號：2095-4824(2015)03-0005-07

收稿日期：2015-03-25

基金項目：湖北工程學(xué)院生物質(zhì)資源轉(zhuǎn)化利用湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心項目(XTCX041)

作者簡介：葛杏莉(1962-)，女，湖北通城人，湖北工程學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院實驗師。

通訊作者夏彩芬(1979-)，女，湖北武漢人，湖北工程學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院講師，博士，本文。

Abstract：The interaction process and mechanism between carboxymethyl chitosan (CMCS) and bovine serum albumin (BSA) are investigated by means of fluorescent spectrometry, ultraviolet spectroscopy, infrared spectroscopy, and circular dichroism (CD). And it is found that the fluorescence quenching of BSA accorded with the CMCS concentration-dependent. And the Stern-Volmer curve of the fluorescence quenching of BSA by CMCS shows that the mechanism is mainly static quenching. The UV indicates that the BSA molecules are combined with the CMCS, forming a complicated ground-state. The analytical results with the CD and infrared spectroscopy indicate that the peptide bonds within the CMCS and the BAS are affected each other and the α-helix content of BSA is changed with CMCS by CD, leading to the changes of secondary structure in the BSA. The experimental result with three-dimension fluorescence shows that the strength of overall intrinsic fluorescence is significantly reduced when the CMCS is added into the BAS. The results with the synchronous fluorescence and the site competition suggest that the binding sites between the CMCS and the BSA are more close to tryptophan residues, where the binding sites are located at Site I.

賈弦(1991-)，女，湖北荊州人，湖北工程學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院學(xué)生。

羧甲基殼聚糖(CMCS)是殼聚糖的高級衍生物之一。近年來，由于羧甲基殼聚糖在藥物載體體系、組織工程及生物改良支架等方面具有廣泛的應(yīng)用前景，已成為發(fā)展迅速的一種生物醫(yī)用材料[1-3]。

CMCS是由殼聚糖衍生而來的一種兩親性醚，與殼聚糖相比，有更好的水溶性、更優(yōu)異的生物相容性、可控生物降解性、成骨能力及一些其他優(yōu)秀的物理化學(xué)、生物學(xué)性能[4-5]。更為獨特的是，CMCS可負載疏水性藥物并顯示出良好的生物活性，這種優(yōu)良特性使其在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域有望成為明星材料，它不僅可作為藥物載體，也可制備無紡布、流延膜、涂層紗布、止血海綿、術(shù)后防粘連材料等多種醫(yī)用敷料。

作為具有重要應(yīng)用前景的生物醫(yī)用材料，CMCS一旦作用于生命體系，必然會與體內(nèi)生物大分子發(fā)生相互作用。盡管目前CMCS用于大分子檢測方面的研究已有相關(guān)報道[6-7]，但多是從體系是否符合經(jīng)典的Stern-Volmer方程線性相關(guān)來做出判斷，顯然并不全面系統(tǒng)。血清白蛋白常作為代表性蛋白質(zhì)用于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域的研究[8]，它可以與許多外源性物質(zhì)(如有機小分子、金屬離子等)結(jié)合，在生物體內(nèi)起到存儲與轉(zhuǎn)運作用[9]，是科學(xué)研究中經(jīng)常使用的藥物靶標(biāo)蛋白之一[10]。

本文主要利用多種光譜聯(lián)合使用的手段研究近似生理條件下CMCS與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，探討CMCS-BSA體系的猝滅作用機理、結(jié)合模式、結(jié)合部位等內(nèi)容，并深入考察了CMCS對BSA二級結(jié)構(gòu)的影響以及兩者結(jié)合點的部位。

1　材料與方法

表1是試驗所用的主要試劑。

表1　實驗試劑

1.2　主要實驗儀器

表2是試驗中所用的主要儀器。

1.3　實驗方法

1.3.1　熒光光譜法

①熒光變溫實驗：配制4×10-3mol/L的CMCS溶液。以280 nm為激發(fā)波長，先測試BSA(1×10-5mol/L)的熒光吸收光譜，再依次加入一定量的CMCS溶液，分別測試293 K、298 K、303 K時各體系的熒光吸收光譜，根據(jù)所得數(shù)據(jù)計算猝滅常數(shù)和結(jié)合常數(shù)。

②位點競爭實驗：采用熒光光譜法，固定BSA的濃度，向BSA-CMCS體系中分別加入一定量的華法林和布洛芬，以280 nm為激發(fā)波長，繪制研究體系的熒光光譜，根據(jù)所得數(shù)據(jù)判斷結(jié)合位點。

③三維熒光光譜：分別掃描BSA和BSA-CMCS體系的三維熒光光譜，初始激發(fā)波長選擇280 nm，在200～400 nm之間記錄發(fā)射光譜，選擇間距為10 nm，掃描次數(shù)為20次。

④同步熒光試驗：采用熒光光譜法，固定BSA的濃度，逐次加入等量CMCS溶液，分別測試Δλ= 15 nm 和Δλ= 60 nm下的熒光光譜圖。

1.3.2　紫外光譜法

分別測試BSA和BSA-CMCS體系的紫外光譜，其中 BSA-CMCS體系中CMCS濃度為梯度分布。

1.3.3　紅外光譜法

用傅立葉紅外光譜儀分別測試CMCS與CMCS-BSA體系的在室溫下的FTIR圖譜。其中CMCS-BSA體系預(yù)先在2～8 ℃下溫浴1 h而得，分別測試各體系的紅外光譜。

1.3.4　圓二色譜法

測定20 ℃下BSA和CMCS-BSA體系的遠紫外圓二色譜，分析CMCS作用前后BSA二級結(jié)構(gòu)變化。

2　分析與討論

2.1　CMCS與BSA相互作用的穩(wěn)態(tài)熒光分析

BSA分子中色氨酸和酪氨酸殘基是其內(nèi)源熒光的主要來源，當(dāng)激發(fā)光波長為280 nm時，在340 nm附近有很強的熒光峰；而CMCS在340 nm 處沒有熒光特性(圖1中未標(biāo)出)，表明CMCS不會產(chǎn)生與BSA相互影響的熒光。本實驗中，設(shè)定BSA的濃度為1.0×10-5mol/L，隨著體系中CMCS用量的增加，BSA的內(nèi)源熒光發(fā)生顯著的猝滅現(xiàn)象，實驗結(jié)果如圖1所示。

圖1　CMCS對BSA熒光光譜的影響(T=298 K)

由圖1結(jié)果可知，在BSA中加了CMCS后，BSA的熒光強度顯著降低，表明CMCS對BSA的內(nèi)源熒光有猝滅作用，且猝滅作用顯示出明顯的CMCS濃度依賴性。

2.2　CMCS與BSA相互作用的猝滅類型

2.2.1　變溫?zé)晒鈱嶒?/h4>

為研究熒光的猝滅機理，通常將猝滅過程分為動態(tài)猝滅和靜態(tài)猝滅來討論[11]。整體而言，任何一個猝滅過程均是包含動態(tài)和靜態(tài)猝滅的混合過程，可用如下方程來描述：

(1)

式中：F代表體系中存在猝滅劑時體系的熒光強度，F(xiàn)0代表不存在猝滅劑時體系的熒光強度：KD與KS分別為動態(tài)與靜態(tài)的猝滅常數(shù)，[Q]是猝滅劑的濃度[12-14]。

若猝滅過程表現(xiàn)為靜態(tài)猝滅(動態(tài)部分可忽略)，即猝滅劑與熒光物質(zhì)在基態(tài)時生成較穩(wěn)定的不產(chǎn)生熒光的復(fù)合物，從而導(dǎo)致熒光強度降低，則式(1)變?yōu)椋?/p>

(2)

式中：Ksv是靜態(tài)猝滅常數(shù)。

由公式(1)和(2)可知，在猝滅劑合適的濃度范圍，靜態(tài)猝滅過程中F0/F 與濃度[Q]之間應(yīng)存在線性關(guān)系。通常，判斷猝滅方式的本質(zhì)可通過變溫?zé)晒鈱嶒灥贸?。對于動態(tài)猝滅，其猝滅常數(shù)會隨著溫度升高而增大，而溫度升高可能導(dǎo)致基態(tài)配合物穩(wěn)定常數(shù)(Ksv)下降，從而削弱靜態(tài)猝滅的程度。因此，可以通過考察不同溫度下BSA的Ksv變化來區(qū)分猝滅類型。為此，實驗中檢測了不同溫度(293K、298K和303K)時，CMCS對BSA的熒光猝滅情況，結(jié)果如圖2所示。

圖2　不同溫度時CMCS與BSA相互作用的猝滅常數(shù)

根據(jù)公式(2)，以(F0-F)/F對[Q]作圖，發(fā)現(xiàn)在293 K時，CMCS與BSA的相互作用猝滅常數(shù)Ksv= 3.80×103L/mol；在298 K時，Ksv= 3.25×103L/mol；在303 L/mol；在298 K時，Ksv= 3.25×103L/mol；在303 K時，Ksv=2.73×103L/mol。該結(jié)果表明，隨著溫度的升高，CMCS與BSA的相互作用猝滅常數(shù)Ksv隨著體系溫度的升高呈現(xiàn)規(guī)律性的減小，由此推斷CMCS對BSA的猝滅過程符合靜態(tài)猝滅特征。

2.2.2　CMCS與BSA相互作用的結(jié)合常數(shù)

CMCS對BSA的猝滅過程具有靜態(tài)猝滅特征，因此其實驗數(shù)據(jù)可用修正的Stern-Volmer方程處理[15]：

(3)

圖3　CMCS猝滅BSA熒光的關(guān)系圖

根據(jù)公式(3)， 對1/[Q]作圖，線性擬合后Ka分別為1.84×104mol/L (293 K)、1.90×104mol/L(298 K)、2.09×104mol/L(303 K)，結(jié)果如圖3所示。圖3的結(jié)果表明，隨著溫度升高，CMCS-BSA體系結(jié)合常數(shù)呈增大趨勢，這一結(jié)果符合CMCS對BSA的靜態(tài)猝滅機理。

2.2.3　紫外光譜分析

文獻[15]表明：動態(tài)分子只在熒光分子處于激發(fā)態(tài)時才存在，因而猝滅劑對熒光分子的紫外可見吸收光譜一般不產(chǎn)生影響；而靜態(tài)猝滅則涉及基態(tài)復(fù)合物的生成，該復(fù)合物一般會使熒光分子的吸收光譜發(fā)生改變[16-17]。據(jù)此，本文又設(shè)計了CMCS對BSA的紫外吸收光譜的影響，結(jié)果如圖4所示。

從圖4的結(jié)果可以看出，BSA分子在280 nm處有很強的吸收峰，當(dāng)把CMCS加入BSA中時，其紫外圖譜在280 nm處的吸收增強，且發(fā)生微弱藍移，說明CMCS與BSA分子間發(fā)生了作用，形成基態(tài)復(fù)合物，進一步證明了其猝滅類型為靜態(tài)猝滅。

圖4　CMCS對BSA紫外光譜的影響(T=298 K)

綜合以上變溫?zé)晒夂妥贤夤庾V的分析結(jié)果，可以判定CMCS對BSA的猝滅過程符合靜態(tài)猝滅特征。

2.3　CMCS對BSA二級結(jié)構(gòu)的影響

2.3.1　紅外光譜分析

BSA分子中肽鍵(-NHCO-)的特征振動譜帶、主鏈骨架及側(cè)鏈的振動譜帶等都能通過紅外光譜進行表征。-NHCO-的結(jié)構(gòu)環(huán)境是蛋白質(zhì)主鏈構(gòu)象的重要反映，也是其能正常發(fā)揮生理功能的重要依據(jù)[13]。因此，可以根據(jù)-NHCO-的特征振動譜帶來推測BSA的主鏈構(gòu)象。本實驗中也檢測了CMCS存在時BSA結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)果如圖5所示。

圖5　CMCS與BSA相互作用的FTIR圖

從圖5的結(jié)果可以看出，BSA分子中的肽鍵在1 644.0 cm-1處有很強的吸收，當(dāng)把CMCS溶液加入到BSA中時，其紅外圖譜在1 647.0 cm-1處的吸收峰變窄，吸收減弱，且發(fā)生了藍移，說明CMCS與BSA分子的肽鍵發(fā)生了相互作用。波數(shù)在1 650～1 658 cm-1處的峰面積代表蛋白質(zhì)中α-helix的含量[12]，可知在CMCS存在的情況下，BSA中α-螺旋的含量有所減少。

根據(jù)以上分析結(jié)果，可以推斷CMCS與BSA分子的肽鍵發(fā)生了作用，其相互作用過程中使BSA的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，即α-helix含量減少。

2.3.2　圓二色譜分析

圓二色譜(CD)在研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)方面具有獨特的優(yōu)勢，不僅可以在接近生理條件下對蛋白質(zhì)實行低濃度、無損傷的分析，為蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化提供相關(guān)信息，而且還可以定量推算出其分子中ɑ-helix、β-fold以及無規(guī)則卷曲的含量等。因此，該方法在蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)分析中具有廣泛的應(yīng)用前景，成為解析蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的有效方法。為了進一步驗證CMCS對BSA構(gòu)象變化的影響，本實驗中還考察了BSA、CMCS-BSA兩個體系中CD譜的變化，實驗結(jié)果如圖6所示。

圖6　CMCS與BSA相互作用的CD譜

從圖6中的結(jié)果可知，BSA分子的CD譜是雙負峰形的，分別位于208 nm和222 nm處，隨著CMCS加入到BSA中，BSA分子在208 nm和222 nm這兩處的負峰振幅緩慢降低，表明BSA分子的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，ɑ-helix含量出現(xiàn)減少現(xiàn)象，該結(jié)果與前述FTIR的分析一致，表明BSA分子的肽鏈結(jié)構(gòu)在CMCS的作用下有所伸展。

2.3.3　CMCS與BSA的同步熒光分析

同步熒光光譜可以反映外源物對蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的影響。Δλ=60 nm 的同步熒光譜代表著色氨酸殘基的光譜特征，而Δλ=15 nm 的同步熒光譜則顯示出酪氨酸殘基的光譜特征。由于芳香氨基酸殘基的λem與其所存在環(huán)境的極性有關(guān)聯(lián)，因此，蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變可由λem的變化來進行判斷[15]。

圖7(Δλ = 60 nm)的結(jié)果表明，在固定BSA 濃度時，隨著CMCS濃度的逐漸增加，BSA熒光強度逐漸降低，λem也略有藍移，表明色氨酸殘基所處的微環(huán)境疏水性緩慢增加，其親水性逐漸降低。圖8(Δλ = 15 nm)顯示，隨著CMCS濃度的增加，BSA熒光強度與穩(wěn)態(tài)熒光結(jié)果(見圖1)相比沒有變化。由圖8和圖9結(jié)果可知，同步譜中色氨酸殘基熒光強度的降低程度比酪氨酸殘基的更加明顯。因此，可以推測CMCS與BSA的結(jié)合位點更趨近于色氨酸殘基。

圖7　Δλ=60 nm時CMCS-BSA體系的同步熒光光譜

圖8　Δλ=15 nm時CMCS-BSA體系的同步熒光光譜

2.4　CMCS作用于BSA體系的三維熒光光譜

三維熒光光譜不僅能夠直觀地體現(xiàn)蛋白質(zhì)分子在不同條件下的構(gòu)象(微環(huán)境)變化，而且可以全面顯示出待測物的熒光信息，據(jù)此可以得到更加科學(xué)可靠的蛋白質(zhì)特征構(gòu)象變化信息。

BSA的三維熒光圖譜如圖9(a)所示?？梢钥闯?，當(dāng)在BSA中加入CMCS后，其強度則明顯降低，這是由于與BSA發(fā)生靜態(tài)猝滅導(dǎo)致體系的熒光強度全面下降的結(jié)果。上述結(jié)果表明在BSA中加入CMCS后，分子全局的內(nèi)源熒光強度明顯降低。

圖9　CMCS作用于BSA體系的三維熒光光譜

2.5　CMCS與BSA結(jié)合部位的確定

為明確CMCS與BSA相互作用的結(jié)合位點，本實驗設(shè)計并檢測了位點標(biāo)記物布洛芬(ibuprofen)和華法林(warfarin)對CMCS-BSA體系的影響。

從X-射線結(jié)晶學(xué)研究結(jié)果得知，標(biāo)記物華法林(warfarin)的結(jié)合位點位于亞結(jié)構(gòu)域IIA(site I)，而布洛芬(buprofen)的結(jié)合位點位于亞結(jié)構(gòu)域IIIA(site II)處[18-19]。本實驗通過檢測標(biāo)記物存在時CMCS與BSA作用體系的熒光強度的變化，從而確定CMCS的結(jié)合位點。

由圖10可知，向BSA溶液中加入布洛芬后熒光強度有所下降，依次向BSA與布洛芬體系混合液中逐漸滴加CMCS，體系的熒光強度有規(guī)律地下降，此時熒光譜與不存在布洛芬時大致相同。相比而言，華法林的存在對CMCS-BSA體系的熒光強度的影響較為明顯(見圖11)。當(dāng)加入過量的華法林后BSA溶液的熒光強度顯著下降，向混合液中連續(xù)滴加CMCS，熒光強度緩慢降低，其熒光強度遠小于不存在華法林時的熒光強度。上述現(xiàn)象表明，華法林對CMCS-BSA體系的熒光強度的影響較大，而布洛芬對其幾乎沒有影響。由此可以推斷，華法林與CMCS競爭同一個位點，CMCS在BSA上的主要結(jié)合位置為Site I。

圖10　布洛芬對CMCS-BSA體系的影響

圖11　華法林對CMCS-BSA體系的影響

3　結(jié)論

本文采用熒光光譜法、紫外光譜法、圓二色譜法和紅外光譜法系統(tǒng)考察了CMCS與BSA的相互作用方式及機理。研究結(jié)果表明，CMCS可使BSA的內(nèi)源熒光發(fā)生猝滅，且猝滅作用表現(xiàn)出對CMCS濃度的依賴性，猝滅過程符合靜態(tài)猝滅機理。進一步研究還發(fā)現(xiàn)，BSA經(jīng)CMCS作用后，其二級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，α-helix的含量有所減少，同步熒光光譜和位點競爭的實驗證實了CMCS與BSA的結(jié)合位點更接近于色氨酸殘基，具體結(jié)合位置為BSA的亞結(jié)構(gòu)域IIA (Site I)處。

[參考文獻]

[1]Upadhyaya L，Singh J，Tewari R P，et al.The implications of recent advances in carboxymethyl chitosan based targeted drug delivery and tissue engineering applications[J].Journal of Controlled Release，2014，186:54-87.

[2]Maya S，Kumar L G，Sarmento B，et al.Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells[J].Carbohydrate Polymer，2013，93：661-669.

[3]Zou A，Chen Y，Huo M，et al.In vivo studies of octreotide-modified N-octyl-O，N-carboxymethyl chitosan micelles loaded with doxorubicin for tumor-targeted delivery[J].Journal of Pharmaceutical Sciences, 2013，102：126-135.

[4]Jayakumar R，Prabaharan M，Nair S V，et al.Novel carboxymethyl derivatives of chitin and chitosan materials and their biomedical applications[J].Progress in Materials Science, 2010，55：675-709.

[5]Lin Q，Lan X，Lu C，et al.Anti-washout carboxymethyl chitosan modified tricalcium silicate bone cement：preparation，mechanical properties and in vitro bioactivity[J].Journal of Materials Science - Materials in Medicine, 2010，21：3065-3076.

[6]李小芳，馮小強，黃晨亮，等.羧甲基殼聚糖-Ag配合物與鯡魚精DNA的相互作用[J].化學(xué)通報，2014，77(3)：285-288.

[7]馮小強，李小芳，蘇中興，等.O-羧甲基殼聚糖稀土配合物的制備及與牛血清白蛋白的作用[J].分析實驗室，2010，29(11)：5-8.

[8]鄭彩虹，梁文權(quán)，虞和永.海藻酸-殼聚糖-聚乳酸羥乙醇酸復(fù)合微球的制備及其對蛋白釋放的調(diào)節(jié)[J].藥學(xué)學(xué)報，2005，40(2)：182-186.

[9]魏永巨，李克安，童沈陽.溴甲酚綠與血清白蛋白的結(jié)合反應(yīng)[J].分析化學(xué)，1996，24(4)：387-391.

[10]玄光善，吳效楠，李玉平.熒光光譜法研究乙酰水楊酸和牛血清蛋白的相互作用[J].光譜實驗室，2005，22(7)：861-864.

[11]趙玉清.白藜蘆醇、補骨脂及熊果酸與蛋白質(zhì)的相互作用[D].武漢：中南民族大學(xué)，2009.

[12]蔡雪梅，劉冷，李建晴.金屬離子對一種ICT熒光探針與人血清白蛋白作用的影響[J].晉中學(xué)院學(xué)報，2010，27(3)：43-45.

[13]Qin Y，Zhang Y X，Ye L，et al.A comparison study on the interaction of hyperoside and bovine serum albumin with Tachiya model and Stern-Volmer equation[J].Spectrochimica Acta Part A:Molecular and Biomolecula Spectroscopy,2010，75：1506-1510.

[14]趙曉飛，徐靖源，謝承志,等.兩個多吡啶銅配合物與人血清蛋白的相互作用[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，19(4)：279-281.

[15]胡艷軍.生物活性小分子與蛋白質(zhì)和DNA相互作用的研究[D].武漢：武漢大學(xué)，2007.

[16]Naik P N，Chimatadar S A，Nandibewoor S T.Interaction between a potent corticosteroid drug-dexamethasone with bovine serum albumin and human serum albumin：a fluorescence quenching and fourier transformation infrared spectroscopy study[J].Journal of Photochemistry and Photobiology B：Biology, 2010，100：147-159.

[17]Hu Y J，Liu Y，Xiao X H，et al.Investigation of the interaction between berberine and human serum albumin[J].Biomacromolecules，2009，10：517-521.

[18]Li D. BSA-stabilized molecular hydrogels of a hydrophobic compound[J]. Nanoscale, 2012, 4(10):3047-3049.

[19]張國文，王安萍，蔣婷.山姜素與人血清白蛋白相互作用的熒光光譜法研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2008，28(4)：908-911.

Study on Interaction of Carboxymethyl Chitosan and Bovine Serum Albumin by Spectrometry

Ge Xingli, Jia Xian，Wang Xin，Qi Yan，Xia Caifen*

(SchoolofChemistryandMaterialsScience，HubeiEngineeringUniversity,Xiaogan,Hubei432000,China)

Key Words：carboxymethyl chitosan; bovin serum albumin; fluorescent spectrometry; circular dichroism; ultraviolet spectrometry

(責(zé)任編輯：張凱兵)