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    人參皂苷Rg1對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制

    2015-12-08 03:17:07劉燃宋蕊袁麗凌露楊萍郭家智張戈陸地孫林
    中國循環(huán)雜志 2015年11期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)箱皂苷

    劉燃,宋蕊,袁麗,凌露,楊萍,郭家智,張戈,陸地,孫林

    人參皂苷Rg1對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制

    劉燃,宋蕊,袁麗,凌露,楊萍,郭家智,張戈,陸地,孫林

    目的:從細(xì)胞和分子層面探討人參皂苷Rg1(G-Rg1)對心肌細(xì)胞的影響及其信號傳導(dǎo)機(jī)制。

    方法:體外培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞,按實(shí)驗(yàn)要求隨機(jī)分13組,每組5個(gè)平行孔,分別為空白對照組,單純?nèi)毖毖? h、6 h、12 h、24 h、48 h組,G-Rg1 5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L組,缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的特異性抑制劑(YC-1)組,YC-1+G-Rg1組,蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化特異性抑制劑(Wortmannin)組,Wortmannin+G-Rg1組。檢測G-Rg1、缺血缺氧以及YC-1對心肌細(xì)胞活力及心肌細(xì)胞損傷的影響。同時(shí)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測心肌細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、葡萄糖載體蛋白-1(GLUT-1)和血紅素氧合酶-1(HO-1)的信使核糖核酸mRNA表達(dá)水平變化。用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測HIF-1α、GLUT-1和HO-1、活化轉(zhuǎn)錄因子-6(ATF-6)、抑制CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)和Akt等細(xì)胞信號通路蛋白表達(dá)水平變化。

    結(jié)果:缺血缺氧時(shí)間與心肌細(xì)胞活力呈負(fù)相關(guān)(r=-0.8580,P<0.05),與乳酸脫氫酶溢出率呈正相關(guān)(r=0.9201,P<0.05)。G-Rg1 10 μmol/L組較單純?nèi)毖毖?4 h組細(xì)胞活力明顯回升(87.8%、62.6%,P<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清乳酸脫氫酶(LDH)含量明顯減少(25.0%、74.8%,P<0.05),且上調(diào)了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的mRNA表達(dá)水平(P<0.05)。蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示:YC-1+G-Rg1組較G-Rg1組,心肌細(xì)胞活力下降(68.0%,87.8%,P<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量增加(56.4%,25.0%,P<0.05),同時(shí)YC-1拮抗了G-Rg1對HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控(P<0.05);Wortmannin可拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控(P<0.05),及對Akt兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的激活作用(P<0.05)。

    結(jié)論:心肌細(xì)胞損傷程度與缺血缺氧時(shí)間有關(guān);G-Rg1對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,其機(jī)制激活HIF-1α及其下游因子的表達(dá)并抑制了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng),可能與G-Rg1激活A(yù)kt有關(guān)。

    人參皂苷Rg1;磷脂酰肌醇3激酶;缺氧誘導(dǎo)因子-1α;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;凋亡

    Methods: H9c2 cells were cultured and treated in different conditions by following groups:①Blank control group, ②Hypoxia alone group, the cells were treated for (2, 6, 12, 24, 48) hr respectively, ③G-Rg1 group, the cells were treated by G-Rg1 at (5, 10, 50) μmol/L respectively,④YC-1 group, which is the specifc inhibitor of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α), ⑤YC-1 + G-Rg1 group, ⑥Wortmannin group, which is the specifc inhibitor for protein kinase B (Akt) phosphorylation and ⑦Wortmannin + G-Rg1 group. Each experiment was conducted with 5 replicates. The effects of G-Rg1, hypoxia and YC-1 on cell activity and injury were studied; intracellular mRNA expressions of HIF-1α, glucose

    transporter-1 (GLUT-1) and heme oxygenase-1 (HO-1) were examined by RT-PCR; protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, activating transcription factor-6 (ATF-6), CCAAT/enhancer binding protein homologous protein (CHOP) and Akt with its signal pathway factors were measured by Western blot analysis.

    Results: The time of hypoxia was negatively related to cell activity (r=-0.8580, P<0.05) and positively related to LDH overfow rate (r=0.9201, P<0.05). G-Rg1 (10μmol/L) group showed increased cell activity than Hypoxia alone (24 hr) group (87.8% vs 62.6 %, P<0.05), while decreased LDH overfow (25.0% vs 74.8%, P<0.05), and up-regulated mRNA expressions of HIF-1α, GLUT-1 and HO-1, P<0.05. YC-1+ G-Rg1 group had decreased cell activity than G-Rg1 group (68.0% vs 87.8%, P<0.05), while increased LDH overfow (56.4% vs 25.0%, P<0.05). Meanwhile, YC-1 clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, ATF-6 and CHOP, P<0.05; wortmannin clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, CHOP, P<0.05 and suppressed the two phosphorylation sites for Akt activation, P<0.05.

    Conclusion: G-Rg1 may protect rat’s H9c2 cells in vitro by activating expressions of HIF-1α with its downstream factors and inhibiting endoplasmic reticulum stress, which might be related to the effect of G-Rg1 on Akt activation.

    (Chinese Circulation Journal, 2015,30:1096.)

    人參皂苷Rg1(G-Rg1)是人參、三七等人參屬藥材的主要活性成分之一,有促進(jìn)海馬神經(jīng)生長[1]以及對心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用[2,3]。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt),參與了多種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié),在細(xì)胞存活和抗凋亡中起重要作用。心肌細(xì)胞缺血缺氧時(shí),其功能、代謝和結(jié)構(gòu)均可能發(fā)生變化,同時(shí)可表達(dá)缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1),受缺氧信號調(diào)控的HIF-1α是活性亞基,HIF-1的下游基因涉及能量代謝、血管新生、鐵與血紅素的代謝以及一氧化氮的合成等。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)與許多心血管疾病有關(guān),其中抑制CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主要通路[4]。研究證明作為依賴缺血缺氧表達(dá)的HIF-1和ERS相關(guān)因子有潛在的聯(lián)系[5]。那兩者之間是否會存在交叉通路的調(diào)控現(xiàn)象,互相影響各自的下游基因表達(dá);G-Rg1對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用是否與抑制ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān),本研究做進(jìn)一步探討。

    1 材料與方法

    主要儀器及試劑:蛋白電泳系統(tǒng)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)儀、水平電泳系統(tǒng)和凝膠成像儀(BIO-RAD,美國);普通培養(yǎng)箱及三氣培養(yǎng)箱(Theromo electron Corporation, 美國);G-Rg1(純度≥98%,由昆明制藥廠提供);Wortmannin及YC-1(Sigma-Aldrich Co. LLC, 美國);HIF-1α(Novus Biologicals, 美國);GLUT-1(Millipore,Germany);血紅素氧合酶-1(HO-1)、活化轉(zhuǎn)錄因子-6(ATF-6)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(內(nèi)參,GAPDH)(Santa Cruz Biotechnology, 美國);Akt、phosphor-Akt (Ser473)、phosphor-Akt (Thr308)和CHOP(Cell Signaling technology, 美國);所有PCR引物(Invitrogen Corporation,中國)。

    分組:使用10%小牛血清 DMEM/F12 高糖培養(yǎng)液(于2014年購自Santa Cruz Biotechnology, 美國)培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞(于2014年由廣東醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中心林秋雄教授饋贈),以 1×106個(gè)/ml濃度接種于底面積25 cm2培養(yǎng)瓶中,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱(37℃,5% CO2飽和濕度)中培養(yǎng),每隔兩天傳代。因前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)進(jìn)行細(xì)胞饑餓同步化處理后,使心肌細(xì)胞提前出現(xiàn)應(yīng)激狀態(tài)導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定,故當(dāng)細(xì)胞密度均勻生長至 80%~90%時(shí),隨機(jī)分13組,每組5個(gè)平行孔。空白對照組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),不作任何處理;單純?nèi)毖毖? h、6 h、12 h、24 h、48 h組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后進(jìn)行缺氧,使用1%O2的三氣培養(yǎng)箱,處理H9c2心肌細(xì)胞 2 h、6 h、12 h、24 h和48 h;G-Rg1 5 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后再分別加入5、10和50 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h,而后再置入三氣培養(yǎng)箱處理12 h、24 h和48 h;HIF-1α的特異性抑制劑(YC-1)組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用10 μmol/L YC-1處理細(xì)胞 15 min,置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h;YC-1+G-Rg1組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用10 μmol/L

    YC-1處理細(xì)胞 15 min,而后用10 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h,最后置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h;蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化特異性抑制劑(Wortmannin)組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用1 μmol/L Wortmannin 處理細(xì)胞 15 min,置入三氣培養(yǎng)箱處理24 h。Wortmannin+G-Rg1組:將高糖培養(yǎng)液置換為無血清 DMEM低糖培養(yǎng)基后使用1 μmol/L Wortmannin 處理細(xì)胞 15 min,而后用10 μmol/L G-Rg1處理細(xì)胞0.5 h,最后置入三氣培養(yǎng)箱處理6 h、24 h。

    細(xì)胞活性測定[3]:培養(yǎng)細(xì)胞單層鋪滿 96孔平底板,選取細(xì)胞密度均一、狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),每組設(shè)十個(gè)孔。按說明書依次加入相應(yīng)試劑后,酶標(biāo)儀 OD 550 nm 處測量各孔的吸光值并記錄數(shù)據(jù)。同樣實(shí)驗(yàn)條件,重復(fù)五次。復(fù)孔數(shù)據(jù)求相應(yīng)均值后依據(jù)公式:(缺血缺氧板OD值—空白對照組OD值)/(對照板OD值—空白對照組OD值)求出相應(yīng)的細(xì)胞相對活性。

    細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)溢出率測定[6]:按上述的細(xì)胞分組處理細(xì)胞,不同培養(yǎng)時(shí)間后用移液器吸盡培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)上清至高壓滅菌的離心管中。向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1 ml 0.5% TritonX-100,置于普通培養(yǎng)箱,20 min 后用移液器吸盡培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞裂解液至另一批高壓滅菌的離心管中。按說明書依次加入相應(yīng)試劑后,酶標(biāo)儀 OD 340 nm 處測量各孔的吸光值并記錄數(shù)據(jù)。同樣實(shí)驗(yàn)條件,重復(fù)五次。復(fù)孔數(shù)據(jù)求相應(yīng)均值后依據(jù)公式:LDH(U/L)=(測定OD值 — 對照OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)OD值 — 空白OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(0.2 mmol/L)×1000求出細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞裂解液各自的LDH含量,再依據(jù)公式:LDH%=細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH/(細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH+細(xì)胞裂解液LDH)× 100%求出相應(yīng)各組的細(xì)胞LDH溢出率百分比。

    RT-PCR檢測:細(xì)胞總RNA提取后進(jìn)行純度和濃度測定,按說明書行cDNA逆轉(zhuǎn)錄。所有引物已用PubMed BLAST進(jìn)行引物來源、引物反應(yīng)條件、引物長度和引物鏈配對等檢測。各基因引物系列見表1。并按照相應(yīng)反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增,完成后將PCR產(chǎn)物鑒定并定量分析,電泳完成后將瓊脂糖膠置于 Bio-Rad ChemiDoc XRS凝膠圖像分析系統(tǒng)中拍照采集圖像,Quantity one 4.4.0 計(jì)算各條帶的熒光強(qiáng)度值及其與GAPDH的比值進(jìn)行定量分析。同樣實(shí)驗(yàn)條件,重復(fù)五次。

    蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測:蛋白質(zhì)提取后定量,進(jìn)行SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳,而后使用半干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)轉(zhuǎn)膜,完成后按照抗體說明書按一定比例依次加入一抗、二抗進(jìn)行孵育,孵育最佳時(shí)間后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光、顯影、定影、拍照并晾干。用掃描儀掃描圖片后進(jìn)行灰度分析。同樣實(shí)驗(yàn)條件,重復(fù)五次。

    表1 各基因引物序列

    2 結(jié)果

    缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系(表2):缺血缺氧時(shí)間與心肌細(xì)胞活力呈負(fù)相關(guān)(r=-0.8580,P<0.05),與細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量呈正相關(guān)(r=0.9201,P<0.05),驗(yàn)證了體外缺血缺氧模型的建立。RT-PCR分析顯示HIF-1α、葡萄糖載體蛋白-1(GLUT-1)和HO-1在心肌細(xì)胞缺血缺氧2 h出現(xiàn)mRNA表達(dá)高峰。

    表2 缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系

    表2 缺血缺氧時(shí)間與細(xì)胞損傷的關(guān)系

    注:LDH:細(xì)胞乳酸脫氫酶;RT-PCR:逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。與空白對照組比*P< 0.05。余注見表1

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    不同劑量G-Rg1對心肌細(xì)胞的作用(圖1):分別用5 μmol/L、10 μmol/L和50 μmol/L的濃度梯度G-Rg1預(yù)處理心肌細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)的G-Rg110 μmol/L組較

    單純?nèi)毖毖?4 h組細(xì)胞活力明顯回升(87.8%、62.6%,P<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量明顯減少(25.0%、74.8%,P<0.05),且上調(diào)了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的信使核糖核酸mRNA表達(dá)水平(P<0.05)。

    圖1 濃度梯度的G-Rg1 對心肌細(xì)胞內(nèi)三個(gè)因子信使核糖核酸表達(dá)的RT-PCR 圖

    G-Rg1可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(圖2):蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示:YC-1+G-Rg1組較G-Rg1組,心肌細(xì)胞活力下降(68.0%,87.8%,P<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清LDH含量增加(56.4%,25.0%,P<0.05)。同時(shí)YC-1拮抗了G-Rg1對HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控(P<0.05)。

    圖2 YC-1拮抗G-Rg1對心肌細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白水平的調(diào)控作用的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

    G-Rg1通過激活A(yù)kt信號通路抑制了CHOP介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡(圖3、4):蛋白質(zhì)免疫印跡法分析顯示用Wortmannin預(yù)處理后,可拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平的調(diào)控(P<0.05)。同時(shí)可拮抗G-Rg1在對Akt兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的激活作用(P<0.05)。

    圖3 Wortmannin拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白表達(dá)水平調(diào)控的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

    圖4 Wortmannin拮抗G-Rg1對Akt的蛋白磷酸化調(diào)控的蛋白質(zhì)免疫印跡法圖

    3 討論

    HIF-1α是缺血前預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理起到心肌保護(hù)作用的關(guān)鍵調(diào)控基因[7,8],經(jīng)脯氨酸羥

    化酶(PHD)羥化修飾后降解,缺氧、藥物等刺激抑制PHD活性,使HIF-1α蛋白迅速增加,HIF-1α與HIF-1β聚合形成異二聚體,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用,調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。缺氧時(shí),HIF-1α可激活心肌營養(yǎng)蛋白-1以抑制心肌凋亡[9],同時(shí)抑制心肌過度收縮,以保持降低能量代謝[10]。當(dāng)氧化磷酸化過程受抑制時(shí),HIF-1通過誘導(dǎo)GLUT-1和糖酵解酶類以增加糖酵解,滿足心肌對能量代謝的需要。HO-1可催化降解血紅素產(chǎn)生鐵離子、膽紅素和一氧化碳,能抑制動脈斑塊和粥樣硬化的形成及發(fā)展并保護(hù)心肌。本研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α、GLUT-1和HO-1 三個(gè)內(nèi)源性保護(hù)因子的mRNA表達(dá)高峰出現(xiàn)在缺血缺氧2 h時(shí),通過G-Rg1預(yù)處理后,可使三個(gè)因子mRNA表達(dá)水平和蛋白水平的高峰明顯延長,起到更長時(shí)間的保護(hù)作用。

    適度的ERS是種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制,可使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)固有分子伴侶增加、蛋白質(zhì)翻譯受抑制、未折疊蛋白的降解增加或自噬作用增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)G-Rg1可抑制神經(jīng)毒性致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[11]。CHOP基因缺陷小鼠可避免缺血再灌注引起的心肌細(xì)胞炎癥及凋亡[12]。適當(dāng)?shù)腅RS可增加ATF-6表達(dá),以增強(qiáng)心肌在缺血再灌注中的生存能力[13,14],同時(shí)還可以抑制由CHOP介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[15]。一些ERS分子伴侶如HO-1等可同時(shí)由ATF-6和HIF-1誘導(dǎo)表達(dá)。心肌梗死后,使用HIF-1的下游因子促紅細(xì)胞生成素的注射治療,可抑制CHOP介導(dǎo)的凋亡,保護(hù)缺血心肌以改善心功能[16]。本研究發(fā)現(xiàn)G-Rg1激活HIF-1α后上調(diào)了ATF-6表達(dá),同時(shí)下調(diào)了CHOP的表達(dá),抑制HIF-1α表達(dá)后明顯削弱了G-Rg1對CHOP表達(dá)的抑制效應(yīng),提示HIF-1可能位于ATF-6、CHOP的調(diào)控上游。但CHOP的下調(diào)與ATF-6的上調(diào)是否有關(guān),本研究尚未探討。

    PI3-K/Akt信號通路在缺血缺氧誘導(dǎo)的損傷反應(yīng)中發(fā)揮了保護(hù)作用,而PI3K/Akt信號通路可調(diào)控HIF-1α其下游因子, G-Rg1可抑制脂多糖誘導(dǎo)炎性蛋白酶及促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)[17],也可以通過PI3K/Akt信號通路上調(diào)HIF-1α及其下游基因,提示PI3K/Akt位于HIF-1α和CHOP的調(diào)控上游。本研究證實(shí)G-Rg1先激活PI3-K/Akt信號通路Akt的兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)后,再上調(diào)了HIF-1α及其下游保護(hù)因子的表達(dá),起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用,并通過上調(diào)HIF-1α的表達(dá)以抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡因子CHOP的表達(dá),減少了心肌細(xì)胞的傷亡。初步證實(shí)了作為依賴缺血缺氧表達(dá)的HIF-1和ERS相關(guān)因子之間存在交叉通路的調(diào)控現(xiàn)象,G-Rg1對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用與抑制ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)解釋了G-Rg1發(fā)揮其保護(hù)效應(yīng)涉及到的部分信號通路之間的調(diào)控關(guān)系。隨著越來越多G-Rg1機(jī)制學(xué)研究的完善,可使其成為臨床上用于保護(hù)心肌細(xì)胞的關(guān)鍵藥物。

    [1] 陳彥, 吳鴻浩, 何斌, 等. 人參皂苷Rg1對大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧/復(fù)糖氧后鈣內(nèi)流的影響. 中國急救醫(yī)學(xué), 2012, 010: 1002-1949.

    [2] 張慶勇, 陳燕萍, 劉芬, 等. 人參皂苷Rg1對大鼠急性心肌缺血抗氧化損傷指標(biāo)及超微結(jié)構(gòu)的影響. 中國循環(huán)雜志, 2015, 30: 164-167.

    [3] Zhang ZL, Fan Y, Liu ML. Ginsenoside Rg1 inhibits autophagy in H9c2 cardiomyocytes exposed to hypoxia/reoxygenation. Mol Cell Biochem, 2012, 365: 243-250.

    [4] Xu J, Zhou Q, Xu W, et al.Endoplasmic reticulum stress and diabetic cardiomyopathy.Exp Diabetes Res, 2012, 2012: 1-12.

    [5] 劉燃, 孫林, 張戈. 人參皂苷Rg1對缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)展. 中國循環(huán)雜志, 2014, 29: 77-79.

    [6] Cuadrado I, Fernández-Velasco M, Boscá L, et al. Labdane diterpenes protect against anoxia/reperfusion injury in cardiomyocytes: involvement of AKT activation. Cell Death Dis. 2011, 11: e229.

    [7] Sarkar K, Cai Z, Gupta R, et al. Hypoxia-inducible factor 1 transcriptional activity in endothelial cells is required for acute phase cardioprotection induced by ischemic preconditioning. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109: 10504-10509.

    [8] Cai Z, Luo W, Zhan H, et al. Hypoxia-inducible factor 1 is required for remote ischemic preconditioning of the heart. Proc Natl Acad Sci USA, 2013, 110: 17462-17467.

    [9] Robador PA, San Jose G, Rodriguez C, et al. HIF-1-mediated upregulation of cardiotrophin-1 is involved in the survival response of cardiomyocytes to hypoxia. Cardiovasc Res, 2011, 92: 247-255.

    [10] Ronkainen VP, Skoumal R, Tavi P. Hypoxia and HIF-1 suppress SERCA2a expression in embryonic cardiac myocytes through two interdependent hypoxia response elements. J Mol Cell Cardiol, 2011, 50: 1008-1016.

    [11] Luo FC, Zhou J, Lv T, et al. Induction of endoplasmic reticulum stress and the modulation of thioredoxin-1 in formaldehyde-induced neurotoxicity. Neurotoxicology, 2012, 33: 290-298.

    [12] Miyazaki Y, Kaikita K, Endo M, et al. C/EBP homologous protein deficiency attenuates myocardial reperfusion injury by inhibiting myocardial apoptosis and inflammation. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2011, 31: 1124-1132.

    [13] Belmont PJ, Chen WJ, Thuerauf DJ, et al. Regulation of microRNA Expression in the Heart by the ATF6 Branch of the ER Stress Response. J Mol Cell Cardiol, 2012, 52: 1176-1182.

    [14] Doroudgar S, Thuerauf DJ, Marcinko MC, et al. Ischemia activates the ATF6 branch of the endoplasmic reticulum stress response. J Biol Chem, 2009, 284: 29735-29745.

    [15] Isodono K, Takahashi T, Imoto H, et al. PARM-1 is an endoplasmic reticulum molecule involved in endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis in rat cardiac myocytes. PLoS One, 2010, 5: e9746.

    [16] 馬驥, 鄭嗚之, 俞月萍. 促紅細(xì)胞生成素抑制心梗大鼠心肌核轉(zhuǎn)錄因子CHOP表達(dá)的研究. 中國藥學(xué)雜志, 2011, 46: 25-27

    [17] Zong Y, Ai QL, Zhong LM, et al. Ginsenoside Rg1 attenuates lipopolysaccharide-induced inflammatory responses via the phospholipase C-γ1 signaling pathway in murine BV-2 microglial cells. Curr Med Chem, 2012, 19: 770-779.

    Effect of Ginsenoside-rg1 on Rat's Cardiomyocytes With its Mechanism of Signal Pathway in vitro

    LIU Ran, SONG Rui, YUAN Li, LING Lu, YANG Ping, GUO Jia-zhi, ZHANG Ge, LU Di, SUN Lin.
    Department of Cardiology Third Ward, The second Affliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming (650101), Yunnan, China
    Co-corresponding Authors: SUN Lin, Email: sunlinkm@sina.com and LU Di, Email: ludi20040609@126.com

    Objective: To investigate the effect of ginsenoside-rg1 (G-Rg1) on rat’s cardiomyocytes H9c2 with its mechanism of signal pathway in vitro.

    Ginsenoside-rg1; Phosphoinositide-3 kinase; Hypoxia inducible factor-1α; Endoplasmic reticulum stress; Apoptosis

    2015-03-31)

    (編輯:王寶茹)

    國家自然科學(xué)基金(81260061);云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合專項(xiàng)基金(2012FB046、2014FB047);云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究聯(lián)合專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目(2013FB101)

    650101 云南省昆明市,昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 心內(nèi)科三病區(qū)(劉燃、宋蕊、袁麗、凌露、張戈、孫林);昆明醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程中心(楊萍、郭家智、陸地)

    劉燃 住院醫(yī)師 碩士 主要從事冠心病及缺血再灌注損傷研究 Email:179143498@qq.com 通訊作者:孫林 Email:sunlinkm@sina.com陸地 Email:ludi20040609@126.com

    R54

    A

    1000-3614(2015)11-1096-05

    10.3969/j.issn.1000-3614.2015.11.015

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