奶牛醋酮血癥最佳檢測(cè)方法的篩選

陳鳳梅 程光民 劉英龍 范作良 胡士林（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061 ）

奶牛醋酮血癥最佳檢測(cè)方法的篩選

陳鳳梅 程光民 劉英龍 范作良 胡士林*（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061 ）

本試驗(yàn)選取90頭規(guī)?；膛?chǎng)產(chǎn)后0～28d奶牛，采用酮粉法與TNN型奶牛血酮測(cè)試儀相結(jié)合的方法，調(diào)查規(guī)模化奶牛場(chǎng)奶牛醋酮血癥的發(fā)病情況，并以TNN型奶牛血酮測(cè)試儀BHBA含量大于1.2mmol/L作為醋酮血癥奶牛的診斷標(biāo)準(zhǔn)，采用酮粉法分別對(duì)尿、乳和血樣品進(jìn)行檢測(cè)，并將定性檢測(cè)的結(jié)果與定量檢測(cè)的結(jié)果相比較。結(jié)果表明，血酮儀檢測(cè)β-羥丁酸測(cè)得的陽(yáng)性率為18.89%，與此結(jié)果相比較,符合率最高的是酮粉法測(cè)血酮，符合率為96.18%；其次是酮粉法測(cè)乳酮，符合率為92.47%；酮粉法檢測(cè)尿酮與乳酮、血酮相比較差異極顯著(P<0.01)；檢測(cè)尿酮與乳酮結(jié)果差異顯著不(P>0.05)。假陽(yáng)性率最低的方法是用酮粉法測(cè)血酮,假陽(yáng)性率為9.08%，酮粉法測(cè)乳酮為21.06%，而假陽(yáng)性率最高的是酮粉法測(cè)尿酮，為48.56%。從假陽(yáng)性率分析3種檢測(cè)方法差異極顯著(P<0.01)。幾種方法中漏檢率最低的是酮粉法測(cè)乳酮，漏檢率為9.11%；其次為酮粉法測(cè)尿酮,漏檢率為9.18%；漏檢率最高的方法是試酮粉法測(cè)血酮，漏檢率為17.96%。酮粉法測(cè)血酮與測(cè)尿酮乳酮相比漏檢率差異極顯著(P<0.01)。

奶牛 醋酮血癥 BHBA

奶牛醋酮血癥具有三高一低，即血液、乳汁、尿液中酮體含量低，同時(shí)低血糖。臨床醋酮血癥奶牛有較明顯消化紊亂癥狀，容易作出診斷;而亞臨床醋酮血癥無(wú)明顯的臨床癥狀，很難診斷。而目前規(guī)?；翀?chǎng)酮病的發(fā)生給養(yǎng)殖戶(hù)帶來(lái)很大損失，因此早期醋酮血癥的的及時(shí)準(zhǔn)確的檢測(cè)對(duì)應(yīng)預(yù)防高產(chǎn)奶牛的醋酮血癥至關(guān)重要。通常檢測(cè)奶牛血液中β-羥丁酸(BHBA)的含量作為衡量醋酮血癥的“金標(biāo)準(zhǔn)”[1]，但此方法由于價(jià)格昂貴在生產(chǎn)一線難以推廣。本試驗(yàn)旨在以β-羥丁酸測(cè)定結(jié)果為依據(jù)，探討最佳檢測(cè)方法，為奶牛生產(chǎn)一線預(yù)防醋酮血癥篩選經(jīng)濟(jì)適用的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 在山東濰坊某集約化奶牛場(chǎng)隨機(jī)選擇產(chǎn)后0～28d內(nèi)荷斯坦奶牛共90頭，胎次主要為2～6胎，年產(chǎn)奶量為7500～9000kg。成乳牛預(yù)產(chǎn)期前2月轉(zhuǎn)入干奶牛群，預(yù)產(chǎn)期前15d轉(zhuǎn)入產(chǎn)房，產(chǎn)后1w轉(zhuǎn)入泌乳牛群。飼喂方式TMR飼喂，精粗比5:5，3次/d飼喂，分別于5:00、12:00、19:00。2次/d擠奶。

1.1.2 儀器 TNN型奶牛血酮測(cè)試儀及試紙條 北京怡成生物電子技術(shù)有限公司生產(chǎn)

1.2 方法

1.2.1 血樣的采集 所有試驗(yàn)?zāi)膛＞谇宄靠崭範(fàn)顟B(tài)下用10ml注射器采集尾靜脈血大約5ml，肝素抗凝，血液推入5ml真空采血管，置冷藏采樣箱內(nèi)。采集的血液盡快以3000rpm/min離心10min，將析出的血清移入離心管中，記好牛號(hào)，放入-20℃冰箱中保存待檢。1.2.2 尿液的采集 早晨飼喂前用50ml大離心管采集新鮮尿液，置冰盒待檢。尿樣盡快檢測(cè)。

1.2.3 乳樣的采集 機(jī)器擠奶前采集新鮮乳樣，盛放于5ml離心管中，采集完立即放入帶有冰塊的冷藏采樣箱。采集的乳樣盡快檢測(cè)。

1.2.4 酮粉的配置[2]以及檢測(cè)方法 取約0.2g酮粉，置于載玻片上，用滴管吸取2～3滴新鮮尿樣、乳樣或血清滴于粉劑上，浸濕粉末即可，約3min后判讀結(jié)果。根據(jù)顏色變化做出判斷：淺紫紅色為弱陽(yáng)性(＋)；紫色為陽(yáng)性(＋＋)；深紫色或暗紫紅色為強(qiáng)陽(yáng)性(＋＋＋，＋＋＋＋)。不變色為陰性(－)；顏色反應(yīng)不明顯為可疑(±)。

1.2.5 BHBA的檢測(cè) 血酮儀試紙條檢測(cè)奶牛血液，按照血酮儀說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 用SPSS 12.0數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

見(jiàn)附表。

附表 不同檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果 (個(gè)、%)

本試驗(yàn)中每種檢測(cè)方法樣品總數(shù)均為90個(gè)，血酮儀檢測(cè)β-羥丁酸測(cè)得的陽(yáng)性率為18.89%。β-羥丁酸(BHBA)的含量為衡標(biāo)準(zhǔn)，符合率最高的是酮粉法測(cè)血酮，符合率為96.18%；其次是酮粉法測(cè)乳酮，符合率為92.47%；準(zhǔn)確率最差的是酮粉法測(cè)尿酮，符合率為83.27%。酮粉法檢測(cè)尿酮與乳酮、血酮相比較差異極顯著(P<0.01)；檢測(cè)血酮與乳酮結(jié)果無(wú)顯著差異(P>0.05)。從假陽(yáng)性率上分析，假陽(yáng)性率最低的方法是用酮粉法測(cè)血酮，假陽(yáng)性率為9.08%，酮粉法測(cè)乳酮為21.06%，而假陽(yáng)性率最高的是酮粉法測(cè)尿酮為48.56%。3種方法檢測(cè)結(jié)果差異極顯著(P<0.01)。幾種方法中漏檢率最低的是酮粉法測(cè)乳酮，漏檢率為9.11%；其次為酮粉法測(cè)尿酮，漏檢率為9.18%;漏檢率最高的方法是試酮粉法測(cè)血酮，漏檢率為17.96%。酮粉法測(cè)血酮與測(cè)尿酮乳酮相比漏檢率差異極顯著(P<0.01)。3 討論

（1）目前隨著奶牛養(yǎng)殖集約化規(guī)模化的發(fā)展，養(yǎng)殖戶(hù)不斷追求奶牛的高產(chǎn)奶量，不斷增加精料的飼喂量，奶牛的產(chǎn)奶量有了顯著的提升，但是與之而來(lái)的醋酮血癥的發(fā)生也愈演愈烈，給養(yǎng)殖戶(hù)帶來(lái)難以估量的損失。因此早期醋酮血癥的及時(shí)準(zhǔn)確的檢測(cè)對(duì)預(yù)防高產(chǎn)奶牛的醋酮血癥至關(guān)重要。夏成等[3]、張生福等[4]報(bào)道，用酮粉法測(cè)定的陽(yáng)性與水楊醛比色法或改良式水楊醛比色法定量測(cè)定的結(jié)果一致，表明酮粉法對(duì)奶牛隱性醋酮血癥檢測(cè)具有靈敏度高的特點(diǎn)。（2）本試驗(yàn)中采用酮粉法與TNN型奶牛血酮測(cè)試儀相結(jié)合的方法，以TNN型奶牛血酮測(cè)試儀BHBA含量大于1.2mmol/L作為醋酮血癥奶牛的診斷標(biāo)準(zhǔn)，采用酮粉法分別對(duì)尿、乳和血樣品進(jìn)行檢測(cè)，并將定性檢測(cè)的結(jié)果與定量檢測(cè)的結(jié)果相比較，來(lái)分析不同檢測(cè)樣品結(jié)果的可靠性。（3）從成本上計(jì)算，血酮儀測(cè)BHBA能準(zhǔn)確定量檢測(cè)，但成本較高，不適合欄圈旁的檢驗(yàn)。本試驗(yàn)中用酮粉法測(cè)定不同的樣品，血、乳、尿，雖然符合率最高的是酮粉法測(cè)血酮，但是操作最復(fù)雜，從操作難度上來(lái)比較，酮粉法測(cè)乳酮、尿酮均比較簡(jiǎn)單;從樣品的采集難易度來(lái)看，乳樣的采集最簡(jiǎn)單，其次為血樣，最難采集的是尿樣，而其中酮粉法測(cè)乳酮漏檢率最低。綜上所述，酮粉法測(cè)乳酮相對(duì)來(lái)說(shuō)簡(jiǎn)單易行，準(zhǔn)確度較高，比較適合大型牧場(chǎng)醋酮血癥發(fā)病情況的監(jiān)測(cè)。

[1]Tyopponen J, and Kauppinen K. The stability and automatic determination of ketone bodies in blood samples taken in field conditions[J]. Acta Veterinaria Scandinavic, 1980, 21: 55-61.

[2] 王建華主編. 家畜內(nèi)科學(xué)3版[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2002. 6.

[3] 夏成, 張洪友, 馮萬(wàn)宇等. 酮粉法檢測(cè)泌乳牛尿酮乳酮的應(yīng)用研究[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志, 2003(12): 3-4.

[4] 張生福, 何寶祥, 王應(yīng)安. 對(duì)酮粉法測(cè)定奶牛尿液、乳汁中酮體的評(píng)價(jià)[J]. 青海畜牧獸醫(yī)雜志, 1992(3): 5-7.

S858.23

A

1007-1733(2015)12-0008-02

2015–20–20）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(SDAIT-06-011-05)

*通訊作者