厚樸葉與厚樸皮、厚樸花的毒性比較研究

徐文慧，黃玉珊，王 霞，孫朝越，胡存華，周細(xì)根，賴(lài) 斌，賴(lài) 丹

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343009）

來(lái)源于木蘭科木蘭屬植物厚樸和凹葉厚樸的干燥干皮、枝皮和根皮的中藥厚樸，具有燥濕消痰、下氣除滿(mǎn)的功效?？捎糜跐駵?、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳[1]。厚樸作為常用中藥，不少常用處方和中成藥制劑中都有厚樸，國(guó)內(nèi)外需求量很大[2]。厚樸為多年生高大喬木，其樹(shù)皮一般要生長(zhǎng)15～20年以上才符合藥用質(zhì)量要求，藥材生產(chǎn)周期很長(zhǎng)。而現(xiàn)今厚樸主要是靠砍樹(shù)剝皮，因此，藥用厚樸與環(huán)境生態(tài)保護(hù)產(chǎn)生很大的矛盾[3]。為滿(mǎn)足對(duì)厚樸不斷增大的需求量，現(xiàn)已大力發(fā)展厚樸種植[4]。除此之外，尋找開(kāi)發(fā)厚樸替代品也是滿(mǎn)足厚樸需求的途徑。國(guó)內(nèi)大量厚樸葉未加利用，任其凋落腐爛，經(jīng)前人研究表明厚樸葉含有厚樸的主要有效成分[5]。本研究通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)，小鼠骨髓微核實(shí)驗(yàn)，小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)，大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探尋厚樸葉的毒性作用，和與已經(jīng)入藥的厚樸皮、厚樸花毒性比較，以期實(shí)現(xiàn)厚樸資源的綜合利用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品

厚樸葉和厚樸皮、厚樸花（購(gòu)自井岡山，經(jīng)井岡山大學(xué)生藥實(shí)驗(yàn)室鑒定）；Giemsa染液（購(gòu)于上海江萊生物科技有限公司）；環(huán)磷酰胺試劑（規(guī)格：50 mL/瓶，編號(hào)：0703210-L，購(gòu)于上海然泰生物有限公司）；HE染液（規(guī)格；500 mL/ 瓶，編號(hào)：070024-H，購(gòu)于北京博潤(rùn)萊特科技有限公司）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠（SPF級(jí)，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003），SD大鼠（購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào):SCXK（湘）2001-0018）。

1.1.3 儀器

中藥材粉碎機(jī)（型號(hào)S—L250），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州亞榮儀器有限公司，型號(hào) RE—2000A），動(dòng)物天平（型號(hào) ZX—2007，購(gòu)與上海臺(tái)衡儀器儀表有限公司），生物顯微鏡（型號(hào)CX21，購(gòu)與于國(guó)華電器有限公司），分析天平（型號(hào)EMB200-3V，購(gòu)于上海島韓實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 厚樸葉和厚樸皮、厚樸花水煎液的制備

取經(jīng)過(guò)初步粉碎后的藥物，加8倍的蒸餾水浸泡1 h后，煎煮30 min，倒出煎液；再加4倍的蒸餾水，煎煮20 min，重復(fù)后面步驟1次；合并3次煎液，四層紗布過(guò)濾后，用旋轉(zhuǎn)揮發(fā)儀蒸干成浸膏狀待用。用蒸餾水配成以下所需的藥物濃度（生藥濃度）。

1.2.2 急性毒性試驗(yàn)

昆明種小鼠60只，雌、雄各半，體重(18～22) g。動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后，先適應(yīng)性喂養(yǎng) 3 d，然后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，于實(shí)驗(yàn)前禁食16 h，不限飲水。根據(jù)最大耐受劑量法[6-7]， 受試樣品劑量設(shè)置為20 g/kg。實(shí)驗(yàn)分為厚樸皮、厚樸葉、厚樸花三組。把厚樸皮、厚樸葉、厚樸花配成2 g/mL，灌胃體積均為10 ml/kg，累積劑量為20 g/kg。記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn)及死亡情況，連續(xù)觀察14 d，實(shí)驗(yàn)結(jié)束解剖動(dòng)物進(jìn)行大體觀察。按毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)受試物的急性毒性強(qiáng)弱。

1.2.3 骨髓微核試驗(yàn)

昆明種小鼠70只，雌、雄各半，體重(25～30) g。按體重隨機(jī)分為7組，每組10只。第1～3組為厚樸葉劑量組，劑量分別為10、5、2.5g/kg；第4組為陰性對(duì)照組（給蒸餾水）；第 5組為陽(yáng)性對(duì)照組（給環(huán)磷酰胺0.04 g/kg）；第6～7組為厚樸皮、厚樸花組，劑量為10 g/kg。厚樸葉水煎液用蒸餾水配制，濃度分別為1.0、0.5、0.25 g/mL，厚樸皮、厚樸花水煎液濃度分別為1.0 g/mL，環(huán)磷酰胺濃度為40 mg/mL，灌胃量都為10 mL/kg。根據(jù)30 h給受試物法[6-7]，各組分別間隔24 h給兩次藥物，于第二次灌胃6 h后頸椎脫臼處死小鼠，取股骨，用1.0 mL生理鹽水沖出骨髓液，離心收集骨髓液，常規(guī)涂片。涂片干燥后放入甲醇中固定5～10 min。將固定好的涂片放入 Giemsa染液應(yīng)用液中染色 10～15 min。立即用 pH6.8的磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液配制方法為：將磷酸二氫鉀4.5 g和磷酸二氫鈉11.81 g，加至1000 mL蒸餾水中。）沖洗、晾干、閱片。每鼠計(jì)數(shù)多個(gè)高倍視野下 1000個(gè)左右的嗜多染紅細(xì)胞，記錄含微核細(xì)胞數(shù)、微核發(fā)生率（微核數(shù)與嗜多染紅細(xì)胞比值），每鼠記數(shù)至少 10～20個(gè)高倍視野下的嗜多染紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞，計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值。

1.2.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

雄性昆明種小鼠56只，體重(25～35) g。隨機(jī)分為7組，每組8只。分組及給藥同小鼠骨髓微核實(shí)驗(yàn)，每天灌胃1次，連續(xù)5 d，于第35 d，頸椎脫臼處死小鼠，取兩側(cè)副睪，放入盛有l(wèi) mL生理鹽水的小燒杯中，用眼科剪將副睪縱向剪2～3刀，靜止1～3 min，輕輕搖動(dòng)。用四層擦鏡紙過(guò)濾，吸濾液涂片?？諝飧稍锖?，用甲醇固定10 min，干燥，用1.5%伊紅染色l.0 h，用水輕沖，干燥，鏡檢。每鼠計(jì)數(shù)多個(gè)高倍視野下1000條左右的精子，計(jì)數(shù)各組精子畸變數(shù)及畸變類(lèi)型，計(jì)算精子畸變率(%)，畸變率為畸形精子與正常精子的比例[6-7]。

1.2.5 大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

選用SD大鼠120只，雌、雄各半，體重(60～90)g，飼養(yǎng)室溫度：(20～25) ℃，相對(duì)濕度：40%～70%。按體重隨機(jī)分為6組，每組20只，雌雄各半。根據(jù)中藥的人體推薦用量，厚樸葉設(shè)15、7.5、3.75 g/kg三個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人用劑量的 100、50、25倍，另設(shè)厚樸皮和厚樸花劑量組，都為 7.5 g/kg，和一個(gè)正常組（陰性對(duì)照組，給予蒸餾水）。用蒸餾水將厚樸葉水煎液配制成1.5、0.75、0.375 g/mL，厚樸皮、厚樸花水煎液配成0.75 g/mL按10 mL/kg的體積給相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，陰性對(duì)照組給等量的蒸餾水，每天灌胃1次。大鼠單籠飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。每周稱(chēng)重1次，稱(chēng)飼料剩余量2次。每天觀察動(dòng)物的一般狀況、有無(wú)中毒表現(xiàn)和死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死大鼠，進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，觀察指標(biāo)如下[6,8]：

每周進(jìn)食量、體量、計(jì)算總的食物利用率（每攝入100 g飼料的體重增長(zhǎng)克數(shù)）。

血常規(guī)指標(biāo)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比、單核細(xì)胞百分比、嗜酸性性粒細(xì)胞百分比、嗜堿性粒細(xì)胞百分比、血紅蛋白、紅細(xì)胞數(shù)、平均紅細(xì)胞體積、血小板數(shù)。

血液生化指標(biāo)：肌酐、尿素氮、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、血糖、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶。

臟體系數(shù)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束前稱(chēng)體質(zhì)量，處死動(dòng)物后，取肝、腎、脾、睪丸、卵巢稱(chēng)濕重，計(jì)算相應(yīng)的臟體比。臟體比的計(jì)算方法為臟器重量/體重×100。

病理組織學(xué)檢查：實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物，取心、肺、肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢等臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

厚樸葉水煎液20 g/kg劑量給小鼠灌胃給藥1次，觀察14 d，未出現(xiàn)中毒癥狀和死亡。根據(jù)毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，厚樸葉屬于無(wú)毒級(jí)。對(duì)照品厚樸皮、厚樸花水煎液按照同樣的方法試驗(yàn)，結(jié)果也是屬于無(wú)毒級(jí)。厚樸葉和厚樸皮、厚樸花的急性毒性無(wú)差異。

2.2 骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果

厚樸葉水煎液劑量分別為10、5、2.5 g/kg，給藥兩次后，微核發(fā)生率和嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值，與正常組比較無(wú)差異，說(shuō)明厚樸葉水煎液在此劑量下無(wú)致骨髓細(xì)胞突變作用。厚樸皮、厚樸花水煎液按照劑量為 10 g/kg，同樣的方法做實(shí)驗(yàn)，也無(wú)致骨髓細(xì)胞突變作用。而陽(yáng)性對(duì)照藥物環(huán)磷酰胺有明顯的至突變作用。厚樸葉和厚樸皮、厚樸花的無(wú)致骨髓細(xì)胞突變毒性無(wú)差異。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 厚樸葉及厚樸皮、厚樸花對(duì)骨髓微核發(fā)生率的影響（ , n=10）Table 1 Magnolia officinalis leaves, bark and flower on bone marrow micronucleus incidence in mice

表1 厚樸葉及厚樸皮、厚樸花對(duì)骨髓微核發(fā)生率的影響（ , n=10）Table 1 Magnolia officinalis leaves, bark and flower on bone marrow micronucleus incidence in mice

**P ＜ 0.01，與正常組比較。

組別 微核發(fā)生率(%) 嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值正常組(陰性對(duì)照組) 0.94 ± 0.43 0.98 ± 0.10環(huán)磷酰胺 0.04 g/kg 組 8.50 ±1.85** 0.97 ± 0.05厚樸皮 10 g/kg 組 0.96 ± 0.17 1.01 ± 0.14厚樸花 10 g/kg 組 0.95 ± 0.32 0.99 ± 0.03厚樸葉 10 g/kg 組 1.08 ± 0.45 0.97 ± 0.07厚樸葉 5 g/kg 組 0.94 ± 0.41 0.97 ± 0.12厚樸葉 2.5 g/kg 組 0.93 ± 0.52 0.98 ± 0.11

2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果

厚樸葉水煎液劑量分別為10、5、2.5 g/kg，給藥5 d后，精子畸變率與正常組比較無(wú)差異，說(shuō)明厚樸葉水煎液在10、5、2.5 g/kg劑量下無(wú)生殖細(xì)胞毒性。厚樸皮、厚樸花水煎液按照劑量為10 g/kg，同樣的方法做，也無(wú)生殖細(xì)胞毒性。而陽(yáng)性對(duì)照藥物環(huán)磷酰胺有明顯的至精子畸形作用。厚樸葉和厚樸皮、厚樸花的無(wú)生殖細(xì)胞毒性無(wú)差異。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 厚樸葉及厚樸皮、厚樸花對(duì)小鼠精子畸變率的影響（ ，n= 8）Table 2 Magnolia officinalis leaves, bark and flower of sperm abnormality rate in mice

表2 厚樸葉及厚樸皮、厚樸花對(duì)小鼠精子畸變率的影響（ ，n= 8）Table 2 Magnolia officinalis leaves, bark and flower of sperm abnormality rate in mice

**P ＜ 0.01，與正常組比較?；冾?lèi)型包括胖頭，無(wú)鉤，香蕉形，尾折疊，雙尾，雙頭。其中以無(wú)鉤居多。

組別 精子畸變率(%)正常組（陰性對(duì)照組） 2.11 ± 0.18環(huán)磷酰胺0.04 g/kg組 12.89 ± 1.75**厚樸皮10 g/kg組 2.03 ± 0.05厚樸花10 g/kg組 2.01 ± 0.06厚樸葉10 g/kg組 1.97 ± 0.20厚樸葉5 g/kg組 2.08 ± 0.27厚樸葉2.5 g/kg組 1.99 ± 0.31

2.4 大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.1 食物利用率

對(duì)雄性大鼠厚樸葉低劑量組、厚樸皮組、厚樸花組在第2周都降低了食物利用率，厚樸皮組、厚樸花組在第3周也降低了食物利用率。厚樸皮組在第4周出現(xiàn)了一只大鼠體重明顯下降。對(duì)雌性大鼠厚樸葉中、低劑量組、厚樸皮組、厚樸花組在第 2周都提高了食物利用率。具體結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表3 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)雄性大鼠食物利用率的影響（，n = 10，g/100 g飼料）Table 3 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect food utilization in male rats

表3 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)雄性大鼠食物利用率的影響（，n = 10，g/100 g飼料）Table 3 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect food utilization in male rats

注：&出現(xiàn)了一只大鼠體重明顯下降。* P ＜ 0.05，** P ＜ 0.01，與正常組比較。

分組 正常組 厚樸葉15 g/kg組 厚樸葉7.5 g/kg組 厚樸葉3.75 g/kg組 厚樸皮7.5 g/kg組 厚樸花7.5 g/kg組第 1 周 22.39 ± 4.37 22.89 ± 3.36 26.46 ± 2.13 26.58 ± 5.18 24.91 ± 2.95 25.29 ± 1.65第 2 周 22.14 ± 1.32 19.39 ± 3.28 19.53 ± 2.27 17.07 ± 1.02** 11.55 ± 1.85** 17.47 ± 2.71*第 3 周 19.26 ± 2.15 18.56 ± 7.43 20.77 ± 1.69 21.19 ± 4.11 15.56 ± 4.11* 15.60 ± 3.15*第 4 周 20.37 ± 5.64 22.39 ± 5.62 22.40 ± 3.65 21.83 ± 2.93 1.90 ± 27.18& 18.47 ± 3.42

表4 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)雌性大鼠食物利用率的影響（，n = 10, g/100 g飼料）Table 4 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect food utilization in female rats

表4 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)雌性大鼠食物利用率的影響（，n = 10, g/100 g飼料）Table 4 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect food utilization in female rats

注： * P ＜ 0.05，與正常組比較。

分組 正常組 厚樸葉15 g/kg組 厚樸葉7.5 g/kg組 厚樸葉3.75 g/kg組 厚樸皮7.5 g/kg組 厚樸花7.5 g/kg組第 1 周 20.53 ± 4.75 16.18 ± 2.65 17.66 ± 2.59 21.89 ± 6.20 19.84 ± 3.03 19.52 ± 5.76第 2 周 20.70 ± 1.68 24.08 ± 4.93 28.53 ± 3.48* 31.48 ± 8.84* 28.83 ± 4.04* 29.27 ± 6.17*第 3 周 20.78 ± 4.27 20.59 ± 2.65 20.19 ± 3.03 20.29 ± 6.62 22.98 ± 4.95 22.43 ± 5.09第 4 周 19.12 ± 3.51 19.98 ± 3.76 20.12 ± 4.35 18.99 ± 3.79 19.03 ± 2.16 19.77 ± 3.45

2.4.2 血常規(guī)指標(biāo)

厚樸葉高劑量組有1例白細(xì)胞減少；厚樸葉中劑量組可以增加淋巴細(xì)胞數(shù)；厚樸葉低劑量組升高白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和降低紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積；其它與正常組比較無(wú)差異。厚樸皮與厚樸花組不影響血常規(guī)。具體結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠血常規(guī)的影響（ s，n= 20）Table 5 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect routine blood in rats

表5 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠血常規(guī)的影響（ s，n= 20）Table 5 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect routine blood in rats

注：* P ＜ 0.05，與正常組比較。

分組 正常組 厚樸葉15 g/kg組 厚樸葉7.5 g/kg組 厚樸葉3.75 g/kg組 厚樸皮7.5 g/kg組 厚樸花7.5 g/kg組白細(xì)胞(109 /L) 4.86 ± 0.99 5.08 ± 1.45 6.54 ± 1.62 7.73 ± 2.25* 5.16 ± 1.86 5.18 ± 0.99中性粒細(xì)胞(109 /L) 1.10 ± 0.39 0.83 ± 0.18 1.34 ± 0.51 1.27 ± 0.51 1.11 ± 0.59 1.15 ± 0.44淋巴細(xì)胞(109 /L) 3.58 ± 0.66 4.12 ± 1.33 5.00 ± 1.12* 6.25 ± 1.99* 3.89 ± 1.29 3.86 ± 0.74單核細(xì)胞(109 /L) 0.126 ± 0.078 0.102 ± 0.034 0.13 ± 0.060 0.145 ± 0.046 0.114 ± 0.069 0.123 ± 0.077嗜酸性粒細(xì)胞(109 /L) 0.044 ± 0.009 0.034 ± 0.011 0.040 ± 0.020 0.058 ± 0.034 0.040 ± 0.020 0.043 ± 0.019嗜堿性粒細(xì)胞(109 /L) 0.006 ± 0.005 0.003 ± 0.004 0.004 ± 0.005 0.009 ± 0.011 0.001 ± 0.004 0.007 ± 0.008紅細(xì)胞(1012 /L) 7.38 ± 0.59 6.80 ± 0.50 7.15 ± 0.83 6.71 ± 0.37* 7.03 ± 0.70 7.21 ± 0.60血紅蛋白(g L) 146.80 ± 8.93 136.88 ± 9.03 143.57 ± 11.38 135.88 ± 5.22* 140.43 ± 9.23 141.50 ± 7.79紅細(xì)胞平均體積(fL) 56.70 ± 1.83 55.80 ± 1.44 54.80 ± 2.00 55.17 ± 1.44 54.51 ± 2.39 54.35 ± 1.61紅細(xì)胞壓積（%） 41.86 ± 3.94 37.98 ± 3.29 39.07 ± 3.63 36.99 ± 1.72* 38.24 ± 2.93 39.13 ± 2.29血小板(109 /L) 828.60 ± 61.57 820.50 ± 102.53 790.86 ± 114.05 815.38 ± 87.48 831.14 ± 127.29 886.33 ± 82.72

2.4.3 血生化指標(biāo)

厚樸葉高劑量組與正常組比較可以降低血清肌酐含量；厚樸葉中劑量組有4例肌酐異常升高；厚樸葉低劑量組有4例肌酐異常升高；厚樸皮組有4例肌酐異常升高，可以降低尿素氮；厚樸花組有3例肌酐異常升高，可以降低尿素氮；其它沒(méi)有差異。厚樸葉各劑量組及厚樸皮組、厚樸花組對(duì)血液中總蛋白、球蛋白、總膽固醇、甘油三酯、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖無(wú)影響。具體結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠腎功能的影響（s, n = 20)Table 6 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect renal function in rats

表6 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠腎功能的影響（s, n = 20)Table 6 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect renal function in rats

注：* P ＜ 0.05，與正常組比較。

分組 正常組 厚樸葉15 g/kg組 厚樸葉7.5 g/kg組 厚樸葉3.75 g/kg組 厚樸皮7.5 g/kg組 厚樸花7.5 g/kg組尿素氮(mmol / L) 7.97 ± 1.28 7.52 ± 1.56 7.59 ± 1.03 7.50 ± 1.81 6.75 ± 0.36* 6.80 ± 0.71*肌酐(umol / L) 25.22 ± 4.89 19.50 ± 4.00* 150.10 ± 161.29* 123.88 ± 111.78* 111.78 ± 99.95* 144.14 ± 212.38*

2.4.4 臟體系數(shù)

對(duì)于雄鼠，厚樸葉各劑量組、厚樸皮組、厚樸花組可降低肝的臟體系數(shù)；厚樸葉低劑量組、厚樸皮組、厚樸花組還可降低睪丸的臟體系數(shù)；厚樸皮組還出現(xiàn)了一例睪丸重量異常低。對(duì)于雌鼠，厚樸葉高低劑量組、厚樸皮組可降低卵巢臟體系數(shù)。具體結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠臟體系數(shù)的影響（，n=10，臟器重量/體重×100）Table 7 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect organs and body weight ratio in rats

表7 厚樸葉、厚樸皮和厚樸花對(duì)大鼠臟體系數(shù)的影響（，n=10，臟器重量/體重×100）Table 7 Magnolia officinalis leaves, bark and flower affect organs and body weight ratio in rats

注：* P ＜ 0.05，* *P ＜ 0.01，與正常組比較，&有1例睪丸重量異常低。

分組 正常組 厚樸葉15 g/kg組 厚樸葉7.5 g/kg組 厚樸葉3.75 g/kg組 厚樸皮7.5 g/kg組 厚樸花7.5 g/kg組肝 4.41 ± 0.25 3.60 ± 0.22** 3.66 ± 0.41* 3.84 ± 0.15** 3.90 ± 0.08* 3.58 ± 0.31**雄鼠腎 0.40 ± 0.04 0.39 ± 0.01 0.42 ± 0.02 0.37 ± 0.03 0.41 ± 0.02 0.36 ± 0.02脾 0.20 ± 0.02 0.19 ± 0.02 0.19 ± 0.01 0.20 ± 0.02 0.19 ± 0.01 0.19 ± 0.02睪丸 0.43 ± 0.02 0.42 ± 0.04 0.42 ± 0.03 0.37 ± 0.01** 0.28 ± 0.16*& 0.35 ± 0.02**雌鼠肝 4.27 ± 0.37 4.56 ± 0.17 4.17 ± 0.36 4.20 ± 0.15 4.28 ± 0.19 4.01 ± 0.61腎 0.39 ± 0.02 0.42 ± 0.02 0.39 ± 0.02 0.41 ± 0.04 0.39 ± 0.01 0.39 ± 0.02脾 0.24 ± 0.02 0.24 ± 0.02 0.24 ± 0.01 0.25 ± 0.04 0.22 ± 0.03 0.25 ± 0.01卵巢 0.08 ± 0.01 0.06 ± 0.00* 0.07 ± 0.01 0.06 ± 0.01* 0.066 ± 0.00* 0.07 ± 0.01

2.4.5 病理組織學(xué)檢查

對(duì)大鼠心、肺、肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢等臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，未見(jiàn)明顯異常。

3 討論

厚樸作為常用中藥，我國(guó)歷代主要本草所載正品厚樸其藥用部位均為樹(shù)皮，古今均未見(jiàn)有葉入藥的記載。厚樸生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，一般要生長(zhǎng) 15年以上才能砍樹(shù)剝皮供藥用。全國(guó)厚樸種植面積很大，厚樸葉資源十分豐富，而且每年可以再生，現(xiàn)今國(guó)內(nèi)大量厚樸葉未加以利用，任其凋落腐爛，造成資源的浪費(fèi)。如能將葉開(kāi)發(fā)利用，將有利于厚樸藥材資源的綜合利用和可持續(xù)利用。根據(jù)同種植物不同部位可能含有相同或相似的化學(xué)成分，具有相似的藥效和臨床療效[9]，我們對(duì)厚樸葉進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)、骨髓微核實(shí)驗(yàn)、精子畸形實(shí)驗(yàn)及慢性毒性實(shí)驗(yàn)，以探討厚樸葉的毒性和與已經(jīng)入藥的厚樸皮、厚樸花毒性比較，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為藥物提供一定的參考依據(jù)。

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，我們可以得知厚樸葉是無(wú)急性毒性，無(wú)致骨髓突變毒性作用，無(wú)致精子畸形毒性作用，有慢性毒性作用。慢性毒性主要表現(xiàn)在影響食物利用率、血常規(guī)、腎功能、睪丸和卵巢的發(fā)育方面。厚樸葉與厚樸皮及厚樸花毒性的比較，其差異主要在厚樸葉會(huì)影響血常規(guī)，而厚樸皮及厚樸花不影響血常規(guī)，其他方面無(wú)差異。對(duì)厚樸葉的開(kāi)發(fā)利用，可以綜合地從藥效、毒性和藥動(dòng)學(xué)等多方面來(lái)研究。就毒性研究而言，雖然民間認(rèn)為中藥的毒性沒(méi)有西藥那么明顯[10-11]，但對(duì)中藥或可發(fā)展為中藥的物質(zhì)，還應(yīng)該進(jìn)行更長(zhǎng)期的、更廣泛的毒性研究。

[1] 陳笈,王伯初. 厚樸的藥理研究進(jìn)展[J]. 重慶大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,28(9):136-139.

[2] 楊竹雅. 厚樸葉藥用價(jià)值研究[D]. 成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2012:30-30.

[3] 熊璇,于曉英,魏湘萍,等.厚樸資源綜合應(yīng)用研究進(jìn)展[J].林業(yè)調(diào)查規(guī)劃,2009,34(4):88-92

[4] 權(quán)婧婧,房藝丹,雷迎,等.厚樸葉的開(kāi)發(fā)利用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(33): 20396-20397, 20423.

[5] 瞿京紅.厚樸皮與葉及不同炮制法酚性成分的比較[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2000, 20(12): 766-766.

[6] 原海曉.神來(lái)片功能及毒理研究[D].廣州:南方醫(yī)科大學(xué),2007:35-38.

[7] 劉月鳳,龔朋飛,袁慧,等.杜仲提取物的急性毒性試驗(yàn)研究[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,55(3): 52-52,60.

[8] 劉月鳳,陳建文,龔朋飛,等. 杜仲提取物的亞慢性毒理學(xué)研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2006, 17(11): 2185-2187.

[9] 衛(wèi)瑩芳,龍飛,謝達(dá)溫,等. 厚樸葉和皮不同提取部位的藥理作用比較研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2007,19(5):772-775.

[10] 張科學(xué), 趙佳佳, 李華超,等. 水合氯醛對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育、學(xué)習(xí)記憶和治療指數(shù)的影響[J]. 井岡山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2011,32(2):98-101.

[11] 嚴(yán)濤, 夏歡, 江維, 等. 不同劑量的曲馬多對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響[J]. 井岡山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2011,32(3):118-120.