兒童A型流感病毒與呼吸道合胞病毒性肺炎血清細(xì)胞間黏附分子-1的表達(dá)及意義

江文輝趙明奇陳 翊連廣琬

兒童A型流感病毒與呼吸道合胞病毒性肺炎血清細(xì)胞間黏附分子-1的表達(dá)及意義

江文輝①趙明奇①陳 翊①連廣琬①

目的：探討兒童A型流感病毒肺炎與呼吸道合胞病毒性肺炎中血清可溶性細(xì)胞間黏附分子-1的表達(dá)及其意義，以指導(dǎo)臨床治療和預(yù)防。方法：選取于本科住院的肺炎兒童，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果分為FA組（A型流感病毒陽性）36例，RSV組（呼吸道合胞病毒陽性）22例，同時選取同期來本院體檢的健康兒童41例為對照組，分析比較三組兒童的血清sICAM-1值。結(jié)果：FA組和RSV組血清sICAM-1值均高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：A型流感病毒肺炎與呼吸道合胞病毒性肺炎兒童中sICAM-1表達(dá)水平升高，是導(dǎo)致兒童氣道炎癥的重要炎癥因子之一，可為臨床治療采用抗粘附療法及抗炎抑制炎性因子提供佐證。

兒童； A型流感病毒； 呼吸道合胞病毒； 肺炎； 血清可溶性細(xì)胞間黏附分子-1

肺炎是兒科常見肺部疾病，嚴(yán)重威脅小兒的健康及生命，據(jù)統(tǒng)計，在世界范圍內(nèi)肺炎是5歲以下兒童主要死亡原因，在我國兒童死亡原因中占首位[1]。隨著病原學(xué)變遷以及疾病譜的改變，病毒所致的小兒肺炎有逐年增高趨勢[2]。為探討兒童A型流感病毒（FA）肺炎與呼吸道合胞病毒性（RSV）肺炎時血清可溶性細(xì)胞間黏附分子-1（solube intercellular adhesion moleculet， sICAM-1）表達(dá)水平的差異，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗法對2013年1-4月在本科住院的FA肺炎和RSV肺炎兒童進(jìn)行血清sICAM-1水平檢測，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1-4月在本科住院的符合肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]的兒童，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法進(jìn)行檢測呼吸道病原學(xué)9項（包括A型流感病毒、B性流感病毒、合胞病毒、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、人偏肺病毒、人博卡病毒及腸道病毒），篩選出A型流感病毒陽性病例36例（FA組），男27例，女9例，年齡3～60個月，平均（31.4±22.7）月；呼吸道合胞病毒陽性病例22例（RSV組），男14例，女8例，年齡1～38個月，平均（8.5±2.1）月，兩觀察組均排除兩種或以上病原混合感染患兒；另設(shè)正常兒童對照組41例，系同期來本院體檢的健康兒童，其中男24例，女17例，年齡3～50個月，平均（12.1±1.9）月，無心、肺、肝、腎臟等基礎(chǔ)疾病，3周內(nèi)無傳染性病史及變態(tài)反應(yīng)等病史。FA組、RSV組分別與對照組年齡比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見圖1。FA組、RSV組分別與對照組性別構(gòu)成比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），圖2。

圖1 三組兒童年齡比較圖注：group1：RSV組；group2：對照組；group3：流感組

圖2 三組兒童性別構(gòu)成比較注：group1：RSV組；group2：對照組；group3：流感組

1.2 方法 （1）標(biāo)本采集：采集住院當(dāng)天的咽拭子標(biāo)本，放入含雙抗和二性霉素的1640取材液中，冰上運送至實驗室。（2）核酸提?。焊鳈z測項目病毒核酸采用擴增熒光定量檢測試劑盒的配套抽提試劑提取。（3）病毒核酸檢測：FA、RSV采用廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司的病毒核酸檢測試劑盒，采用PCR-熒光探針法，操作按試劑盒說明進(jìn)行。（4）血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1（sICAM-1）測定：各組入選兒童空腹抽取靜脈血3 mL，分離血清，-40 ℃?zhèn)溆么龣z。所有標(biāo)本的血清sICAM-1采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法， 試劑盒由深圳欣博盛生物科技有限公司提供，按試劑盒說明書要求操作，結(jié)果用ELx800酶標(biāo)儀讀取。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，應(yīng)用t檢驗和線性回歸方法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測三組兒童的血清sICAM-1水平，F(xiàn)A組兒童血清sICAM-1水平為（1312.8±756.2）μg/mL，RSV組為（991.7±183.4）μg/mL，對照組為（852.3±170.8）μg/mL。RSV組、FA組分別與對照組血清sICAM-1水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在調(diào)整了的年齡和性別影響因素采用線性回歸比較方法RSV組、FA組分別與對照組血清sICAM-1水平比較仍有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 調(diào)整了年齡和性別的差異后三組兒童的血清sICAM-1比較

3 討論

近二、三十年來，由于診斷技術(shù)的進(jìn)步，特別是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的應(yīng)用，肺炎病原檢出率尤其是病毒感染逐漸增加[4]。肺炎時，感染性因素經(jīng)氣道入肺，刺激肺泡，產(chǎn)生多種炎癥細(xì)胞因子，他們再刺激肺內(nèi)多炎癥細(xì)胞因子介導(dǎo)外周循環(huán)的炎癥細(xì)胞遷徙到肺間質(zhì)和肺泡，進(jìn)一步釋放大量炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子造成炎癥反應(yīng)的進(jìn)一步加重[5-7]。細(xì)胞粘黏分子是一大類膜蛋白，在免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、病毒感染等生理和病理生理過程中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要生物活性物質(zhì)，對局部炎癥的發(fā)生和形成具有重要作用[8]。氣道上皮細(xì)胞既是炎癥的靶細(xì)胞，又扮演著效應(yīng)細(xì)胞的角色，可分泌和表達(dá)多種細(xì)胞因子及黏附分子，從而參與炎癥反應(yīng)的全過程。在靜息狀態(tài)下，白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞黏附的黏附分子表達(dá)量低，在炎癥介質(zhì)的作用下，白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子表達(dá)增多。有體外實驗研究顯示RSV感染可顯著上調(diào)氣道上皮ICAM-1表達(dá)，RSV毛細(xì)支氣管炎患兒也存在黏附分子表達(dá)增多[9]。流感病毒感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后，在炎癥因子作用2 h時，內(nèi)皮細(xì)胞表面的ICAM-l增加約30倍，ICAM-l的增高在12～24 h達(dá)到高峰，可持續(xù)72 h[10]。sICAM-1是ICAM-l的另一種形式，表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，可調(diào)節(jié)白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促進(jìn)白細(xì)胞向組織內(nèi)遷移，白細(xì)胞激活后釋放各種酶和自由基，可引起組織的損失[11]。它在哮喘中的作用機制已引起相當(dāng)重視，而ICAM-l與其他肺部炎癥性疾病的關(guān)系研究甚少，國內(nèi)外已有多項研究證實鼻病毒后，ICAM-1由于其雙重作用而成為注視的焦點：（1）作為上皮細(xì)胞之間、或上皮細(xì)胞結(jié)合滲出的白細(xì)胞如嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞群的黏附分子[12]；（2）主要的RV的受體。體外和體內(nèi)研究證實RV感染上調(diào)ICAM-1表達(dá)。近年來隨著黏附機制對肺損傷與修復(fù)機制的闡明，越來越多的證據(jù)表明黏附分子參與并介導(dǎo)細(xì)胞以及細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用，在決定肺內(nèi)炎癥和纖維化過程中起著重要作用。ICAM-1在呼吸系統(tǒng)中參與許多炎癥性疾病，其中黏附功能是參與許多炎癥性疾病的重要病理生理基礎(chǔ)。中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，而后滲出至炎癥部位是一個多重性的過程，這過程需要不同種細(xì)胞黏附分子（如ICAM-1、選擇素、整合素）的上調(diào)參與。由于黏附分子在炎癥形成過程中起著決定性作用，尤其是在肺組織中的表達(dá)，乃至ARDS的發(fā)病以及治療中均有其非常重要的實驗意義以及臨床價值。因而有選擇性地抑制及調(diào)節(jié)CAMs功能，可望抑制炎性細(xì)胞浸潤及炎性反應(yīng)[13]。

肺部病毒性感染時，感染上皮細(xì)胞通過高表達(dá)ICAM-1促進(jìn)其與中性粒細(xì)胞黏附，從而導(dǎo)致氣道損傷。研究發(fā)現(xiàn)感染呼吸道合胞病毒72 h后，上皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1明顯上升，IFN-γ、IL-1、TNF-α均能增進(jìn)其表達(dá)，最早可于感染后24 h達(dá)頂峰，從而提高中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞黏附至呼吸道上皮細(xì)胞，進(jìn)而引起各種炎癥細(xì)胞游走入氣道產(chǎn)生損傷，病毒感染后1～2 d支氣管上皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)量成倍增長，抗ICAM-1單克隆抗體可抑制中性粒細(xì)胞與上皮細(xì)胞黏附。實驗中鼠肺組織中ICAM-1及其受體表達(dá)含量在攻毒后1 d即開始升高，第4天達(dá)高峰[14]。在以往對呼吸道合胞病毒和腺病毒肺炎的研究中，炎癥細(xì)胞黏附是其肺部感染的重要環(huán)節(jié)，而ICAM-1與其結(jié)合是炎癥細(xì)胞黏附聚集的關(guān)鍵。ICAM-1正常呈低水平表達(dá)，受到炎癥因子刺激數(shù)小時后迅速表達(dá)，表達(dá)上調(diào)的ICAM-1與其白細(xì)胞表面受體相互作用介導(dǎo)了炎癥反應(yīng)中白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷徙及想炎癥部位的積聚過程[15]。

A型流感病毒和呼吸道合胞病毒是導(dǎo)致嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎和肺炎住院的主要的病原體之一。本研究結(jié)果顯示住院呼吸道合胞病毒性肺炎的平均年齡在8個月左右，A型流感病毒性肺炎的平均年齡在12個月左右，提示這兩種病原的肺炎住院兒童以嬰幼兒為主，尤其是12個月以下嬰兒，但男女無性別上的差異。FA組、兒童血清sICAM-1水平為（1312.8±756.2）μg/mL，RSV組兒童血清sICAM-1水平為（991.7±183.4）μg/mL，與正常對照組sICAM-1水平（852.3±170.8）μg/mL比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示FA和RSV感染后氣道上皮和血管內(nèi)皮受損，促發(fā)了炎性因子的釋放，sICAM-1就是其中之一，因此，在治療上宜選用抗黏附抗炎抑制炎性因子的藥物，以減輕或緩解病程。

[1]胡亞美，江載芳.諸福棠實用兒科學(xué)[M].第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：1180.

[2]董琳，李昌崇，陳小芳，等.呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎血清Th2類細(xì)胞因子及粘附分子水平的研究[J].中華兒科雜志，2002，40（4）：235-236.

[3]關(guān)秀茹，王優(yōu)良，張萱，等.流感病毒與血管內(nèi)皮細(xì)胞功能變化的體外實驗研究[J].中國動脈硬化雜志，2011，19（8）：641-644.

[4]陳一芳.哮喘兒童血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1測定與氯雷他定治療效應(yīng)的觀察[J].浙江實用醫(yī)學(xué)，2000，5（6）：1-2.

[5]徐莉，崔文賢，瞿云，等.支原體肺炎患兒血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1及心肌酶譜聯(lián)合檢測的意義[J].中國婦幼保健，2013，28（17）：2723-2725.

[6]劉純義，金萍，楊艷霞.血清可溶性細(xì)胞間黏附分子-1與重癥肺炎的關(guān)系研究[J].中國當(dāng)代兒科雜志，2007，9（6）：537.

[7]馬亞萍，肖延風(fēng).過敏性紫癜患兒血清人可溶性細(xì)胞間粘附分子-1水平的變化及臨床意義[J].中國醫(yī)藥指南，2011，9（33）：99.

[8]盧美萍.感染性肺炎新生兒血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1水平的變化[J].浙江醫(yī)學(xué)，2001，23（5）：274-275.

[9]羅運春，王強，張信良.哮喘兒童血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1和白介素-8質(zhì)量濃度測定及其意義[J].中國實用兒科雜志，2006，21（2）：135-136.

[10]鄭忠生，陳潮欽，黃新蘇.非小細(xì)胞肺癌患者血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1的水平及臨床價值[J].河北醫(yī)學(xué)，2004，10（3）：196-198.

[11]諸留珍.兒童支氣管哮喘血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1的變化及其臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥，2002，28（8）：595-596.

[12]盧美萍，孫眉月.新生兒敗血癥血清可溶性細(xì)胞間粘附分子1水平的變化[J].浙江大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2001，30（3）：119-121.

[13]羅冠瀛.支氣管哮喘患者血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1和白介素-4水平測定及其臨床意義[J].嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志，2008，13（4）：249-250.

[14]羅宏.支氣管哮喘患者血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1水平及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，31（3）：222-223.

[15]潘建平.肺癌患者血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1與C-反應(yīng)[J].浙江大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2000，29（4）：149-150.

The Expression of Solube Intercellular Adhesion Moleculet-1 with Children Suffered from Influenza-A and Respiratory Syncytial Virus Pneumonia

JIANG Wen-hui， ZHAO Ming-qi， CHEN YU， et al.//Medical Innovation of China，2015，12（01）：007-009

Objective： The expression and significance of serum soluble intercellular adhesion molecule-1 in children with influenza A virus pneumonia and respiratory syncytial virus pneumonia in -1， in order to guide the clinical treatment and prevention. Method： In our hospital from pneumonia in children， according to the reverse transcriptase polymerase chain reaction results were divided into FA group （A influenza virus positive） 36 cases， group RSV （respiratory syncytial virus positive） in 22 cases， at the same time in healthy children at our hospital physical examination 41 cases as control group， serum sICAM-1 were compared between the three groups children’s value. Result： In FA group and RSV group， serum sICAM-1 values were higher than those in the control group， there was significant difference （P＜0.05）. Conclusion： The expression of A increased the level of sICAM-1 influenza virus pneumonia and respiratory syncytial virus pneumonia in children， which is one of the important inflammatory airway inflammation in children， can provide clinical treatment with anti adhesion therapy and anti-inflammatory， inhibiting inflammatory factors to provide evidence.

Children； Influenza A virus； Respiratory syncytial virus； Pneumonia； Serum soluble intercellular adhesion molecule-1

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.01.003

2014-05-26） （本文編輯：王宇）

①廣州市婦女兒童醫(yī)療中心 廣東 廣州 510120

江文輝

First-author’s address： Guangzhou Women and Children Center， Guangzhou 510120， China