艾塞那肽對脫氫表雄酮誘導的PCOS大鼠胰島素抵抗及炎癥因子水平的影響

孫宇，沈山梅，胡明玥，田甜，金露，孟然，畢艷，朱大龍

(1南京大學醫(yī)學院附屬南京鼓樓醫(yī)院集團宿遷市人民醫(yī)院，江蘇宿遷223800;2南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院)

多囊卵巢綜合征(PCOS)是育齡期女性最常見的一種婦科內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，胰島素抵抗(IR)在其發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［1，2］。近年研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者體內(nèi)存在炎癥狀態(tài)，可能參與PCOS的發(fā)生、發(fā)展［3］。有研究顯示，二甲雙胍在PCOS的治療中占有重要地位，不僅能改善IR狀態(tài)，還能降低血清炎癥因子水平［4］。艾塞那肽屬于胰升糖素樣肽1(GLP-1)受體激動劑，具有類似二甲雙胍樣作用。因此，推測其亦可用于治療PCOS，但相關(guān)報道較少。2012年7～11月，我們觀察了艾塞那肽對脫氫表雄酮誘導的PCOS大鼠IR及炎癥因子水平的影響。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 雌性清潔級SD大鼠50只，21日齡，體質(zhì)量40～50 g，購自南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖中心，由南京大學醫(yī)學院動物實驗中心飼養(yǎng)，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由攝食飲水。注射用脫氫表雄酮及血清胰島素(INS)、睪酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)、IL-6，內(nèi)脂素(visfatin)、色素上皮細胞衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒，均購自武漢華美華科技集團有限公司上海分公司;注射用油劑，購自武漢頂輝化工有限公司;二甲雙胍，購自中美上海施貴寶制藥有限公司;艾塞那肽注射液，購自美國禮來公司。

1.2 動物分組及模型制備 SD大鼠常規(guī)喂養(yǎng)2天，隨機取30只，連續(xù)20天于頸背部皮下注射脫氫表雄酮 6 mg/100 g+ 注射用油劑 0.2 mL［5，6］。造模20天，在光學顯微鏡下觀察一個動情周期(連續(xù)4天)的陰道涂片，若發(fā)現(xiàn)陰道上皮持續(xù)角化、失去完整動情周期即為造模成功。隨機將成模大鼠分為模型組、二甲雙胍組、艾塞那肽組，每組10只。剩余SD大鼠隨機取10只作為正常組。造模第21天二甲雙胍組給予二甲雙胍0.265 g/(kg·d)+1 mL生理鹽水灌胃，1次/d;艾塞那肽組皮下注射艾塞那肽注射液10 μg/(kg·d)+10倍生理鹽水稀釋，1次/d，均連續(xù)處理28天(等于大鼠7個動情周期)。正常組、模型組給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)28天。模型對照組及干預組皮下注射脫氫表雄酮(6 mg/100 g+0.2 mL注射用油劑)以防止其自身恢復排卵。

1.3 相關(guān)指標觀察

1.3.1 腹腔糖耐量試驗 末次給藥后予禁食12 h，予水合氯醛麻醉，眶靜脈取血1 mL，檢測空腹血糖(FPG)和空腹胰島素(INS);行腹腔糖耐量試驗(50%葡萄糖注射液以2 g/kg腹腔注射)120 min，另一側(cè)眶靜脈取血1 mL，檢測餐后2 h血糖(2 h PG)和餐后2 h胰島素(2 h INS)。同步計算穩(wěn)態(tài)模型下的胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。

1.3.2 性激素及炎癥因子 末次給藥第2天，麻醉大鼠，下腔靜脈取血4～5 mL，采用ELISA法檢測血清性激素(包括T、FSH、LH、SHBG)及炎癥因子(IL-6、visfatin、PEDF)水平。

1.3.3 體質(zhì)量 模型組成模后檢測體質(zhì)量(0周)，正常組、二甲雙胍組和艾塞那肽組同期檢測體質(zhì)量，之后每周檢測，連續(xù)檢測5周。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組腹腔糖耐量試驗結(jié)果比較 二甲雙胍組、艾塞那肽組各指標比較，P均＞0.05。具體見表1。

2.2 各組血清性激素水平比較 二甲雙胍組、艾塞那肽組各指標比較，P均＞0.05。具體見表2。

表1 各組腹腔糖耐量試驗結(jié)果比較(±s)

表1 各組腹腔糖耐量試驗結(jié)果比較(±s)

注:與正常組比較，#P ＜0.05;與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 n INS(mU/L) FPG(mmol/L) HOMA-IR 2 h INS(mU/L) 2 h PG(mmol/L)正常組 10 13.00 ±1.77 4.72 ±0.33 2.73 ±0.51 22.54 ±2.445.28 ±0.13模型組 10 17.36 ±1.49# 5.63 ±0.49 4.09 ±0.62# 29.01 ±1.10 7.18 ±0.52#二甲雙胍組 10 11.50 ±0.98* 4.80 ±0.39 2.46 ±0.32* 22.44 ±0.45* 5.42 ±0.58*艾塞那肽組 10 13.26 ±3.57 4.88 ±0.29 3.26 ±0.87 22.99 ±3.41 5.42 ±0.38*

2.3 各組炎癥因子水平比較 二甲雙胍組、艾塞那肽組各指標比較，P均＞0.05。具體見表3。

表2 各組血清性激素水平比較(±s)

表2 各組血清性激素水平比較(±s)

注:與正常組比較，#P ＜0.05;與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 n LH(IU/L) FSH(IU/L) LH/FSH T(ng/mL) SHBG(nmol/L)正常組 10 17.32 ±1.48 3.67 ±0.40 4.75 ±0.56 12.71 ±0.64 81.97 ±12.82模型組 10 36.59 ±0.96# 4.94 ±0.39 7.46 ±0.72# 16.63 ±0.59# 69.14 ± 3.03二甲雙胍組 10 33.03 ±1.46* 7.20 ±0.29* 4.59 ±0.24* 9.05 ±0.70* 87.19 ± 3.08*艾塞那肽組 10 22.43 ±1.41* 6.21 ±0.36* 3.67 ±0.33* 11.99 ±0.53* 83.32 ± 2.96*

表3 各組炎癥因子水平比較(±s)

表3 各組炎癥因子水平比較(±s)

注:與正常組比較，#P ＜0.05;與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 n IL-6(pg/mL)visfatin(ng/mL)PEDF(ng/mL)10 24.96 ±2.07 3.42 ±0.49 25.96 ±0.70模型組 10 32.10 ±1.68# 4.67 ±0.42 32.89 ±0.71#二甲雙胍組 10 21.85 ±2.17* 2.49 ±0.47* 16.62 ±0.68*艾塞那肽組 10 23.67 ±2.43* 2.41 ±0.74* 19.99 ±0.58正常組*

2.4 各組不同時間體質(zhì)量比較 二甲雙胍組、艾塞那肽組不同時間體質(zhì)量比較，P均＞0.05。但艾塞那肽組降低體質(zhì)量的起效時間早于二甲雙胍組。具體見表4。

3 討論

目前PCOS的發(fā)病機制尚不明確，IR及炎癥因子可能在其發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［7］。二甲雙胍在PCOS治療中占有重要地位，被廣泛用于改善IR，同時還能降低體內(nèi)的炎癥狀態(tài)［8，9］。本研究結(jié)果顯示，模型組經(jīng)過二甲雙胍干預后，IR狀態(tài)明顯改善，各項炎癥因子水平均顯著降低。提示二甲雙胍在改善IR的同時能改善PCOS炎癥狀態(tài)，理論上能減少遠期并發(fā)癥的發(fā)生。

表4 各組不同時間體質(zhì)量比較(±s)

表4 各組不同時間體質(zhì)量比較(±s)

注:與正常組比較，#P ＜0.05;與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 n體質(zhì)量(g)0周 1周 2周 3周 4周正常組 10 161.3 ± 9.8 175.2 ± 9.9 195.0 ±10.9 203.0 ±10.8205.0 ±11.0模型組 10 172.5 ±10.1 182.5 ±11.2 205.9 ±12.3# 220.1 ±11.5# 233.2 ±11.9#二甲雙胍組 10 171.4 ± 9.9 181.1 ±10.6 198.7 ±10.4* 201.9 ±13.5* 202.4 ± 9.8*艾塞那肽組 10 172.4 ±10.8 181.0 ±13.6 194.6 ±12.0* 202.0 ±10.9* 199.6 ±12.8*

艾塞那肽是基于腸促胰素效應開發(fā)的一類降糖藥物，能夠刺激葡萄糖依賴的胰島素合成和分泌，增加胰島β細胞的活性，同時可能具備降低胰高糖素分泌、促進飽食感、控制體質(zhì)量等作用，具有類似二甲雙胍樣作用。但目前國內(nèi)外對于艾塞那肽治療PCOS的研究較少。為此，我們進行了本研究。

IL-6是一種廣泛表達的前炎癥細胞因子。Vgontzas等［10］研究表明，PCOS伴肥胖者 IL-6水平明顯升高，與IR呈正相關(guān)，提示IL-6升高可能與PCOS的發(fā)病有關(guān)。visfatin是從人體內(nèi)臟脂肪組織中發(fā)現(xiàn)的一種新型細胞因子。楊學敏等［11］發(fā)現(xiàn)，PCOS患者血清visfatin水平升高，且與HMOA-IR呈正相關(guān)，提示visfatin可能參與了PCOS患者IR過程。PEDF最早在視網(wǎng)膜色素上皮細胞培養(yǎng)液中被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已確定人體多種組織均可分泌。近年研究發(fā)現(xiàn)，PEDF與肥胖相關(guān)的 IR及炎癥因子有關(guān)。Cheng等［12］報道，PCOS患者 PEDF水平升高，且與hs-CRP呈正相關(guān)，提示PEDF在PCOS的炎癥反應中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示，模型組IL-6、PEDF水平高于正常組，提示慢性炎癥因子可能參與了PCOS的發(fā)生、發(fā)展。但本研究未發(fā)現(xiàn)模型組與對照組visfatin水平的差異，考慮可能與本研究建模時間較短有關(guān)。

Pontikis等［13］發(fā)現(xiàn)，在 PCOS 患者中可能存在腸-胰島軸活性減弱，從而為胰升糖素樣肽1受體激動劑治療PCOS提供了可能。有研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍聯(lián)合艾塞那肽治療PCOS，患者月經(jīng)周期、代謝指標的改善顯著優(yōu)于二甲雙胍和艾塞那肽單藥治療［14］，但在該項研究中未能發(fā)現(xiàn)炎癥因子有顯著性變化。而Kahal等［15］研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過6個月的利拉魯肽治療，PCOS患者hs-CRP水平顯著降低且代謝指標明顯改善，提示利拉魯肽能改善PCOS患者體內(nèi)炎癥狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，艾塞那肽組炎癥因子水平較治療前明顯下降，并且多項代謝指標改善，提示艾塞那肽在改善PCOS代謝指標方面作用顯著。結(jié)果不一致的原因可能與入組條件、觀察指標等不同有關(guān)，也可能與利拉魯肽和艾塞那肽治療PCOS作用機制不一致有關(guān)。

在PCOS治療過程中，體質(zhì)量下降是重要的治療目標之一。既往研究表明，艾塞那肽和二甲雙胍均能顯著降低2型糖尿病患者體質(zhì)量，且艾塞那肽降低體質(zhì)量的效果較二甲雙胍更為顯著。本研究發(fā)現(xiàn)，艾塞那肽和二甲雙胍均能顯著降低PCOS大鼠體質(zhì)量，但艾塞那肽組出現(xiàn)體質(zhì)量下降比二甲雙胍組早，提示艾塞那肽與二甲雙胍降低體質(zhì)量的作用機制可能不同。但至本研究結(jié)束時，未能發(fā)現(xiàn)艾塞那肽組和二甲雙胍組體質(zhì)量有統(tǒng)計學差異，考慮與干預時間較短有關(guān)，未來將進行更長時間的縱向研究，以觀察二者對體質(zhì)量的影響。

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