糖尿病易感基因TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與女性乳腺癌發(fā)病的關(guān)系

劉桂紅，劉靜普，張松，張怡梅，周衛(wèi)華，張玉娜，劉月芹，朱鐵年

(1河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011;2白求恩國(guó)際和平醫(yī)院;3河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院)

目前認(rèn)為，乳腺癌的發(fā)病是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。2型糖尿病同乳腺癌一樣，具有很強(qiáng)的遺傳易感性。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯升高［1，2］。臨床研究也發(fā)現(xiàn)，乳腺癌與2型糖尿病不僅具有相同的病因，在臨床表現(xiàn)、群體遺傳學(xué)背景等方面也有很多相似性。因此，不少學(xué)者將2型糖尿病的易感基因作為乳腺癌發(fā)病的候選基因。本研究即探討了糖尿病易感基因核轉(zhuǎn)錄因子7類(lèi)似物2(TCF7L2)基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與女性乳腺癌發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年1月～2012年1月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院收治的女性乳腺癌患者564例(乳腺癌組)，年齡(49.1 ±9.6)歲，BMI(25.5 ±3.6)kg/m2，均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診。術(shù)后標(biāo)本參照中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2013版)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)、腫瘤分期及分子分型觀察;同時(shí)收集患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，癌組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)、p53、Ki-67表達(dá)及腫瘤直徑等資料。同期另選在白求恩國(guó)際和平醫(yī)院體檢健康者394例(對(duì)照組)，均為女性，年齡(47.8 ±9.6)歲，BMI(24.4±3.5)kg/m2。兩組年齡比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，BMI比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因分型檢測(cè)兩組清晨空腹抽取肘靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，-80℃冰箱保存。采用DNA提取試劑盒提取基因組DNA，-80℃保存?zhèn)溆?。采用LDRPCR技術(shù)檢測(cè)TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因分型。PCR擴(kuò)增引物:上游引物 5'-ATTGTCCCTTGAGGTGTACTG-3'，下游引物 5'-GGCAGCGGAGATGAGGCAGA-3'，PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度 195 bp。15 μL PCR反應(yīng)體系中含基因組 DNA 1 μL，10×PCR buffer 1.5 μL，MgCl21.5 μL，10 mmol/L dNTPs 0.3 μL，10 pmol/L 引物各0.25 μL，5 U/μL 熱啟動(dòng)Taq DNA 聚合酶0.2 μL，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增參數(shù):94℃2 min，94 ℃ 20 s，56 ℃ 20 s，72 ℃ 40 s，35 個(gè)循環(huán)后，72℃延伸3 min。TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)探針:通用探針:5'-P-ACCATATTCTGATAATTACTCAGG-FAM-3';分型探針 1:5'-CCCAGGAATATCCAGGCAAGAATG-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度48 bp;分型探針2:5'-TTTCCCAGGAATATCCAGGCAAGAATT-3'，產(chǎn) 物長(zhǎng)度51 bp。配制10 μL LDR體系:10×連接酶buffer 1 μL，2 μL PCR 產(chǎn)物，10 pmol/L 分型探針及通用探針各 0.01 μL，40 U/μL Taq DNA 連接酶0.125 μL。反應(yīng)程序:94 ℃ 30 s、56 ℃ 3 min，共30個(gè)循環(huán)。取1 μL連接產(chǎn)物，加10 μL上樣 loading buffer，95℃變性3 min，立即冰水浴，在ABI 3730XL測(cè)序儀上檢測(cè)基因型及頻率分布。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。兩組基因型頻率行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，基因型頻率比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸分析評(píng)估TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)不同基因型乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并以BMI進(jìn)行校正。單因素分析不同基因型與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因型頻率分布及其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 兩組TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡，說(shuō)明樣本具有群體代表性。兩組均未檢測(cè)出TT基因型，乳腺癌組GG、GT基因型頻率分別為98.2%(554/564)、1.8%(10/564)，對(duì)照組分別為 97.7%(385/394)、2.3%(9/394)，經(jīng) BMI校正后，GG 基因型患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)是GT基因型的1.586倍(OR=1.586，95%CI為0.615～4.086)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.2 TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因型與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。

3 討論

TCF7L2基因位于人類(lèi)10號(hào)染色體長(zhǎng)臂25區(qū)，長(zhǎng)度約為215.9 kb，其編碼產(chǎn)物是一種含有高遷移率組盒的轉(zhuǎn)錄因子［3］。TCF7L2基因表達(dá)產(chǎn)物能與細(xì)胞核內(nèi)β-catenin結(jié)合，啟動(dòng)細(xì)胞表面的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，在細(xì)胞增殖、正常胚胎形成及肌肉調(diào)節(jié)、脂肪組織形成等方面起關(guān)鍵作用［4］。多項(xiàng)研究表明，TCF7L2基因 rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病密切相關(guān)［5～7］。TCF7L2基因異常表達(dá)可改變Wnt信號(hào)，通過(guò)上調(diào)c-myc和cyclinD的表達(dá)間接發(fā)揮致癌作用［8］。TCF7L2基因在腸內(nèi)高表達(dá)，與結(jié)直腸癌的發(fā)病密切相關(guān)［9，10］。Burwinkel等［11］通過(guò)TaqMan探針技術(shù)檢測(cè)了TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性在家族性乳腺癌中的作用，結(jié)果顯示TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性能增加家族性乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)?；赥CF7L2基因與乳腺癌、糖尿病發(fā)病均有關(guān)，本研究探討了TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與國(guó)內(nèi)女性乳腺癌發(fā)病的關(guān)系。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)糖尿病易感基因TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與女性乳腺癌發(fā)病關(guān)系的研究結(jié)果并不一致。Goode等［12］研究發(fā)現(xiàn)，rs12255372基因多態(tài)性與ER、PR無(wú)關(guān)，但其未分析基因多態(tài)性與組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的關(guān)系;Wang等［13］進(jìn)行的Meta分析顯示，TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性可增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);Naidu等［14］研究發(fā)現(xiàn)，TCF7L2 基因 rs7903146 位點(diǎn)T變異可能增加乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有可能成為乳腺癌的候選易感基因，但rs12255372位點(diǎn)GT雜合子或TT純合子和攜帶T等位基因或T基因型均與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，且與臨床病理特征無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示，兩組TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)均未檢測(cè)出TT基因型，兩組該位點(diǎn)GG、GT基因型頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)BMI校正后，GG基因型的患病風(fēng)險(xiǎn)是GT基因型的1.586倍，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單因素分析顯示，TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與患者各臨床病理參數(shù)無(wú)關(guān)。說(shuō)明TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)多態(tài)性與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，但這一結(jié)論仍需進(jìn)一步加大樣本量來(lái)驗(yàn)證。

表1 TCF7L2基因rs12255372位點(diǎn)基因型與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系［例(%)］

［1］ Michels KB，Solomon CG，Hu FB，et al.Type 2 diabetes and subsequent incidence of breast cancer in the Nurses'Health Study［J］.Diabetes Care，2003，26(6):1752-1758.

［2］Wu AH，Yu MC，Tseng CC，et al.Diabetes and risk of breast cancer in Asian-American women［J］.Carcinogenesis，2007，28(7):1561-1566.

［3］Duval A，Busson-Leconiat M，Berger R，et al.Assignment of the TCF-4 gene(TCF7L2)to human chromosome band 10q25.3［J］.Cytogenet Cell Genet，2000，88(3-4):264-265.

［4］Etheridge SL，Spencer GJ，Heath DJ，et al.Expression profiling and functional analysis of wnt signaling mechanisms in mesenchymal stem cells［J］.Stem Cells，2004，22(5):849-860.

［5］Grant SF，Thorleifsson G，Reynisdottir I，et al.Variant of transcription factor 7-like 2(TCF7L2)gene confers risk of type 2 diabetes［J］.Nat Genet，2006，38(3):320-323.

［6］Scott LJ，Bonnycastle LL，Willer CJ，et al.Association of transcription factor 7-like 2(TCF7L2)variants with type 2 diabetes in a Finnish sample［J］.Diabetes，2006，55(9):2649-2653.

［7］Hayashi T，Iwamoto Y，Kaku K，et al.Replication study for the association of TCF7L2 with susceptibility to type 2 diabetes in a Japanese population［J］.Diabetologia，2007，50(5):980-984.

［8］Reya T，Clevers H.Wnt signalling in stem cells and cancer［J］.Nature，2005，434(7035):843-850.

［9］Chen J，Yuan T，Liu M，et al.Association between TCF7L2 gene polymorphism and cancer risk:a meta-analysis［J］.PLoS One，2013，8(8):e71730.

［10］Zhang B，Jia WH，Matsuda K，et al.Large-scale genetic study in East Asians identifies six new loci associated with colorectal cancer risk［J］.Nat Genet，2014，46(6):533-542.

［11］Burwinkel B，Shanmugam KS，Hemminki K，et al.Transcription factor 7-like 2(TCF7L2)variant is associated with familial breast cancer risk:a case-control study［J］.BMC Cancer，2006，(6):268.

［12］ Goode EL，Szabo C，Prokunina-Olsson L，et al.No association between a candidate TCF7L2 variant and risk of breast or ovarian cancer［J］.BMC Cancer，2009，(9):312.

［13］Wang Z，Zhang Q，Chen F，et al.TCF7L2 rs12255372(G＞T)polymorphism contributes to breast carcinogenesis:evidence from a meta-analysis［J］.Crit Rev Eukaryot Gene Expr，2013，23(4):309-316.

［14］Naidu R，Yip CH，Taib NA.Genetic variations in transcription factor 7-like2 (TCF7L2)gene:association ofTCF7L2 rs12255372(G/T)or rs7903146(C/T)with breast cancer risk and clinico-pathological parameters［J］.Med Oncol，2012，29(2):411-417.