雞內(nèi)金不同提取方法的比較※

金伶佳 賈天柱

（遼寧省大連市衛(wèi)生計(jì)生培訓(xùn)中心，大連116021）

雞內(nèi)金不同提取方法的比較※

金伶佳 賈天柱*

（遼寧省大連市衛(wèi)生計(jì)生培訓(xùn)中心，大連116021）

目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)幾種常見(jiàn)的雞內(nèi)金提取方法進(jìn)行研究，從而篩選出最佳提取雞內(nèi)金中蛋白質(zhì)含量的方法。方法本實(shí)驗(yàn)通過(guò)2種常用方法的提取方法——熱浸法、超聲提取法對(duì)雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)含量結(jié)果進(jìn)行了分析比較。結(jié)果采用熱浸法提取雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)含量相對(duì)比較穩(wěn)定準(zhǔn)確。結(jié)論5 g生品雞內(nèi)金，在溫度85℃下，回流提取2 h，此法為生品雞內(nèi)金藥材最佳提取方法。

雞內(nèi)金；蛋白質(zhì)；提取方法；中藥化學(xué)

中藥雞內(nèi)金為雉科動(dòng)物雞Gallus gallus gomesticus Briss on的干燥砂囊。據(jù)有關(guān)報(bào)道，雞內(nèi)金是主要含蛋白質(zhì)及多種氨基酸，胃泌素、角蛋白及各種氨基酸，微量胃蛋白酶，淀粉酶，多種維生素。雞內(nèi)金其主要成分均為蛋白質(zhì)成分。大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機(jī)溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶［20］。水溶液提取法：稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑［1-2］，通常用量是原材料體積的1～5倍，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利于溶解，縮短提取時(shí)間。針對(duì)溫度有利于溶解，可采取熱浸，超聲等方法考察合適的雞內(nèi)金提取的方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器球形回流管，水浴鍋、40目篩，高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（Fw 80型）、電子天平（余姚市金諾天平儀器有限公司）、FA1004B型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、溫度計(jì)，圓底燒瓶，錐形瓶，玻璃棒。

1.2 藥材雞內(nèi)金購(gòu)于遼寧省大連市瓦房店連城食品有限公司，按05版藥典鑒定為雉科動(dòng)物家雞（Gallus gallus domesticus Brisson）的砂囊內(nèi)壁。

1.3 試劑水（純凈水），雞內(nèi)金對(duì)照品由遼寧師范大學(xué)分析中心所提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 熱浸法

2.1.1 樣品的制備按《中國(guó)藥典》［7］的基本方法，經(jīng)初步篩選，確定以下工藝。熱浸法生品雞內(nèi)金樣品1：精密稱取生品雞內(nèi)金5 g，粉碎，過(guò)60目篩，加到圓底燒瓶?jī)?nèi)，再加入100 ml蒸餾水，在溫度分別為70℃，85℃，100℃，回流，2 h后取出，放涼，用抽濾器過(guò)濾，后定容到100 ml容量瓶中，備用。熱浸法生品雞內(nèi)金樣品2：精密稱取生品雞內(nèi)金5 g，粉碎，過(guò)60目篩，加到圓底燒瓶?jī)?nèi)，再加入100 ml蒸餾水，在溫度為85℃，分別回流，1 h，2 h，3 h后取出，放涼，用抽濾器過(guò)濾，后定容到100 ml容量瓶中，備用。

2.1.2 指標(biāo)性成分含量測(cè)定①對(duì)照品溶液的制備：精密稱取蒸餾水1 ml，到10 ml具容試管中，再加入配好的考馬斯亮藍(lán)溶液9 ml，加入蒸餾水，定容到10 ml具容試管中，備用。②供試品溶液的制備：分別稱取各上述生品提取液0.3 ml，到10 ml具容試管中，再加入配好的考馬斯亮藍(lán)溶液9 ml，加入蒸餾水，定容到10 ml具容試管中，備用。紫外條件：檢測(cè)波長(zhǎng)：595 nm；定點(diǎn)檢測(cè)。測(cè)定法：分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液，用紫外分光光度分析儀測(cè)定，每份樣品測(cè)定3次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量［17-24］。

2.2 超聲提取法樣品的制備：按《中國(guó)藥典》的基本方法，經(jīng)初步篩選，確定以下工藝。

①超聲提取法生品雞內(nèi)金樣品1：精密稱取生品雞內(nèi)金1 g，粉碎，過(guò)60目篩，加到10 ml具容試管內(nèi)，再加入10 ml蒸餾水，在溫度為常溫下，分別超聲提取，20 min、40 min、60 min后取出，放涼，用抽濾器過(guò)濾，后定容到10 ml容量瓶中，備用。

②超聲法提取生品雞內(nèi)金樣品2：精密稱取生品雞內(nèi)金1 g，粉碎，過(guò)60目篩，加到10 ml具容試管內(nèi)，再加入10 ml蒸餾水，在溫度分別為70℃、50℃、30℃下，超聲提取，20 min后取出，放涼，用抽濾器過(guò)濾，后定容到10 ml容量瓶中，備用。

2.3 指標(biāo)性成分含量測(cè)定①對(duì)照品溶液的制備：精密稱取蒸餾水1 ml，到10 ml具容試管中，再加入配好的考馬斯亮藍(lán)溶液9 ml，加入蒸餾水，定容到10 ml具容試管中，備用。②供試品溶液的制備：分別稱取各上述生品提取液0.3 ml，到10 ml具容試管中，再加入配好的考馬斯亮藍(lán)溶液9 ml，加入蒸餾水，定容到10 ml具容試管中，備用。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 熱浸法紫外條件：檢測(cè)波長(zhǎng)：595 nm；定點(diǎn)檢測(cè)。測(cè)定法：分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液，用紫外分光光度分析儀測(cè)定，每份樣品測(cè)定3次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1，表2。

表1 生品5 g雞內(nèi)金在不同溫度下的蛋白質(zhì)含量（n＝3）

通過(guò)表1可以看出：雞內(nèi)金在85℃時(shí)蛋白質(zhì)含量最高。以此考察相同溫度下不同時(shí)間的蛋白質(zhì)含量。

表2 生品雞內(nèi)金5 g在相同溫度下不同時(shí)間的蛋白質(zhì)含量（n＝3）

通過(guò)表2可以看出：生品雞內(nèi)金在85℃時(shí)，加熱回流2 h時(shí)，生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)含量最高。通過(guò)以上表1，2可以看出，熱浸法可以提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)。而且熱浸法中，提取溫度和時(shí)間都對(duì)生品雞內(nèi)金的蛋白質(zhì)的含量起到影響作用。在熱浸法中，比較提取溫度和時(shí)間，可得在提取生品雞內(nèi)金中蛋白質(zhì)時(shí)，在溫度85℃下，回流2 h時(shí)，提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)含量較多。

3.2 超聲提取法紫外條件：檢測(cè)波長(zhǎng)：595 nm；定點(diǎn)檢測(cè)。測(cè)定法：分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液，用紫外分光光度分析儀測(cè)定，每份樣品測(cè)定3次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3，表4。

表3 1 g生品雞內(nèi)金在不同超聲提取時(shí)間下的蛋白質(zhì)含量（n＝3）

通過(guò)表3，可以看出：生品雞內(nèi)金在超聲振搖20 min后，測(cè)得生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)的含量最高。以此考察生品雞內(nèi)金在不同溫度下超聲提取的蛋白質(zhì)的含量。

表4 生品1 g雞內(nèi)金在不同溫度下超聲提取的蛋白質(zhì)含量（n＝3）

通過(guò)以上表3，4可以看出：超聲提取法可以提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)。而且超聲提取法中的溫度和時(shí)間對(duì)提取的蛋白質(zhì)含量有一定的影響作用。比較3，4表，比較提取溫度和時(shí)間，又可得在提取生品雞內(nèi)金中蛋白質(zhì)時(shí)，在溫度70℃下，超聲20 min時(shí)提取生品雞內(nèi)金的蛋白質(zhì)含量較多。

3.3 比較熱浸法和超聲提取法測(cè)定結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 生品雞內(nèi)金不同提取方法下的總蛋白質(zhì)含量的比較（n＝3）

通過(guò)表5可以看出：熱浸法和超聲提取法這兩方法都可以提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)。但是提取的總量有所差別。相比較而言。熱浸法提取的蛋白質(zhì)含量更多些。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用生品雞內(nèi)金中的總蛋白質(zhì)含量為指標(biāo)性成分，對(duì)熱浸法和超聲提取等不同提取方法進(jìn)行考察，找出最佳提取方法。由上述所有圖表可見(jiàn)，在提取雞內(nèi)金中蛋白質(zhì)含量方面，熱浸法和超聲提取法都可以在某種程度上提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)。熱浸法在提取生品雞內(nèi)金中的蛋白質(zhì)方面在一定程度上要遠(yuǎn)好于超聲提取法。在熱浸法中，比較回流提取溫度和時(shí)間，又可得在提取雞內(nèi)金中蛋白質(zhì)時(shí)，在溫度85℃下，加熱回流2 h時(shí)，提取生品雞內(nèi)金的蛋白質(zhì)含量較多。

5 結(jié)論

5 g生品雞內(nèi)金，在溫度85℃下，回流提取2 h，此法為生品雞內(nèi)金藥材最佳提取方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)雞內(nèi)金的提取方法的篩選，為其下一步的最佳炮制工藝的研究和藥理方面的探索提供幫助。

［l］李衛(wèi)先，李飛燕，李達(dá).雞內(nèi)金不同炮制方法水提液對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)比較的研究［J］.湖南中醫(yī)雜志，2008，3（2）：100．

［2］XH波欽諾克.植物生物化學(xué)分析方法［M］.北京：科學(xué)出版社，1981：1218．

［3］中山大學(xué)生物系生化微生物學(xué)教研室.生化技術(shù)導(dǎo)論［M］.北京：人民教育出版社，1978：153.

［4］張興國(guó)，喬立新.雞內(nèi)金炮制方法的改進(jìn)［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2003，14（9）：27-45．

［5］姜英，吳炳章.雞內(nèi)金宜土法炮制探討［J］.海峽藥學(xué)，1997，9（4）：133．

［6］余昭群.雞內(nèi)金炒制用輔料的改進(jìn)［J］.中成藥，1998，20（3）：49．

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：133．

［8］李金柱，劉鳳芹.雞內(nèi)金炮制經(jīng)驗(yàn)漫談［J］.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2001，7（8）：426．

［9］黃開(kāi)顏，曹麗冰.雞內(nèi)金砂燙與微波處理的比較［J］.中藥材，2002，25（7）：475-476．

［10］南云生，楊玉萍，朱序莉.雞內(nèi)金不同炮制品的質(zhì)量比較［J］.中藥材，1990，13（1）：25．

［11］孫毅.制備雞內(nèi)金3種炮制品的體會(huì)［J］.中國(guó)中藥雜志，2001，26（9）：642．

［12］趙漢然.砂炒雞內(nèi)金的方法探討［J］.新疆中醫(yī)藥，2002，20（3）：55-56．

［13］張永清，南云生.雞內(nèi)金炮制歷史沿革初探［J］.中成藥，1992，14（11）：22．

［14］李建成，牛云航.從雞內(nèi)金的炮制看分檔炒炙的重要性［J］.黑龍江醫(yī)藥，2005，18（2）：55．

［15］趙英永，崔秀明，戴云，等.中藥草烏重金屬含量［J］.中藥材，2005，28（7）：537-538．

［16］趙英永，崔秀明，戴云，等.中藥制草烏中六六六、滴滴涕含量分析［J］.中成藥，2005，27（10）：165-1168．

［17］王衛(wèi)國(guó)，吳強(qiáng)，胡保坤，等.幾種測(cè)定灰樹(shù)花多糖中蛋白質(zhì)含量方法的比較研究［J］.2003，22（1）：27-30．

［18］王愛(ài)軍，王鳳山，王友聯(lián)，等.低濃度蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法的比較［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2003，24（2）：78-80．

［19］劉紅梅.新型蛋白質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定食品中蛋白質(zhì)含量［J］.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2003，19（3）：275-275．

［20］許亞平，林俊岳.蛋白質(zhì)提純研究進(jìn)展［J］.天津化工，2006，20（4）:10-11.

［21］曲春香，沈頌東，王雪峰.用考馬斯亮藍(lán)測(cè)定植物粗提液中可溶性蛋白質(zhì)含量方法的研究［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，22（6）：82-85．

［22］郭敏亮，姜永明.考馬斯亮藍(lán)線色液組分對(duì)蛋白質(zhì)測(cè)定的影響［J］.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23（6）：558-561．

［23］趙英永，戴云，崔秀明，等.考馬斯亮藍(lán)G2250染色法測(cè)定草烏中可溶性蛋白質(zhì)含量［J］.云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，15（3）：235．

［24］汪良駒，姜衛(wèi)兵，祝海闊，等.銀杏葉片可溶性蛋白質(zhì)測(cè)定非直線性原因分析［J］.果樹(shù)學(xué)報(bào)，2002，19（1）：32．

Comparison of Different Extraction Methods of Chicken Gizzard Membrane

JINLingjia，JIATianzhu
（DalianHealthFamilyPlanningTrainingCenter，LiaoningProvince，Dalian116021，China）

Objective Through studying several common extraction method of chicken gizzard membrance to select the bestmethod of extraction of protein content in the chicken gizzard membrance.Methods Two commonly methods of extracting method were used，hot dipping method and ultrasonic extraction method.The results of protein content were compared.Results The protein content of hot dipping method was relatively stable.Conclusion 5g rawchicken's gizzard-membrane，under the temperature 85℃，reflux extraction 2 h，it was the best extraction method of medicinal materials of chicken gizzard membrane.

chicken gizzard membrane；protein；extraction method；chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.16.069

1672-2779（2015）-16-0141-03

：楊杰本文校對(duì)：賈天柱

2015-06-04）

國(guó)家“十一五”科技支撐課題（No：2010ZX09401-105A）

*通訊作者：jinlingjia19841003@126.com