銀杏葉提取物對(duì)熱應(yīng)激小鼠Hsp70 表達(dá)的影響

黃詩(shī)敏

（江蘇省海門市悅來鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)服務(wù)站226131）

銀杏葉提取物對(duì)熱應(yīng)激小鼠Hsp70 表達(dá)的影響

黃詩(shī)敏

（江蘇省海門市悅來鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)服務(wù)站226131）

銀杏葉提取物的主要成分是銀杏黃酮和萜類內(nèi)酯，研究表明銀杏葉提取物具有很好的抗應(yīng)激的作用。熱應(yīng)激是指機(jī)體由于外界環(huán)境的高溫刺激所做的非特異性的生理應(yīng)答反應(yīng)的總和。其中熱休克蛋白70是熱休克蛋白家族中最保守、最重要的一族，它能夠使機(jī)體迅速適應(yīng)環(huán)境變化，在熱應(yīng)激下發(fā)揮保護(hù)作用。就EGB761的抗熱應(yīng)激能力開展實(shí)驗(yàn)，證明GB761能提高HSP70的表達(dá)水平，從而起到保護(hù)心臟、肝臟和抗熱應(yīng)激的作用。

銀杏葉提取物；熱應(yīng)激；熱休克蛋白70

銀杏葉作為一種古老的藥材已被廣泛運(yùn)用，明代李時(shí)珍所著的《本草綱目》中提到“入肺經(jīng)，益肺氣，定喘咳，縮小便”就是對(duì)銀杏作用的概括[1]。而銀杏葉提取物（Ginkgo biloba extract，EGB761）在20世紀(jì)50年代開始被研究，因含有黃酮類、內(nèi)酯類、酚類等多種活性成分而具有非常重要的藥用價(jià)值。

在畜牧業(yè)生產(chǎn)過程中，由高溫等因素造成的熱應(yīng)激會(huì)對(duì)其機(jī)體的造成顯著的影響，可導(dǎo)致畜群采食量下降、生長(zhǎng)速度緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率降低，甚至造成死亡，對(duì)畜牧經(jīng)濟(jì)有很大的影響。

熱休克蛋白（Heat Shock Protein，HSP）是經(jīng)環(huán)境的刺激誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì)，指機(jī)體由于外界環(huán)境的高溫刺激所做的非特異性的生理應(yīng)答反應(yīng)的總和。HSP有 HSP100，HSP90，HSP70，HSP60以及小分子熱休克蛋白（sHSP）這5類，當(dāng)機(jī)體暴露于高溫的時(shí)候有助于保護(hù)機(jī)體自身[2]，其中熱休克蛋白70（HSP70）在細(xì)胞應(yīng)激后反應(yīng)最明顯。

在正常情況下，HSP70在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平較低，而在熱應(yīng)激或其他應(yīng)激作用下迅速增加HSP70合成，以提高抗應(yīng)激能力。正常情況下HSP70位于細(xì)胞漿，當(dāng)細(xì)胞遭受應(yīng)激作用時(shí)，HSP70迅速移入細(xì)胞核內(nèi)并包圍核仁，胞漿內(nèi)只有少量表達(dá)，而應(yīng)激消除后細(xì)胞處于恢復(fù)階段時(shí)，細(xì)胞核內(nèi)的HSP70又返回胞漿，在細(xì)胞漿內(nèi)呈低水平表達(dá)，再次應(yīng)激又重新返回細(xì)胞核。通過以上HSP70的特性，我們就可以借助HSP70的表達(dá)看出小鼠的抗熱應(yīng)激的能力。

針對(duì)銀杏葉提取物已被證實(shí)對(duì)記憶丟失[3]，心肌缺血，慢性腎功能衰竭[4]，冠心病[5]，青光眼[6]，腫瘤[7]等都有顯著的效果，又至今為止尚未出現(xiàn)過不良反應(yīng)，故作為一種藥材很有推廣的潛力。

本文旨在研究檢測(cè)小鼠的心臟、肝臟中熱休克蛋白如HSP70的表達(dá)變化。在飼喂不同濃度銀杏葉提取物溶液后，檢測(cè)HSP70的變化并對(duì)比熱應(yīng)激前后HSP70的含量的變化，旨在研究熱應(yīng)激后銀杏葉提取物通過HSP70的變化表現(xiàn)出的對(duì)應(yīng)激的保護(hù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 實(shí)驗(yàn)過程

選用100只健康小鼠，公母各半分為5組飼養(yǎng)（C、C1、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），C、C1組灌胃生理鹽水，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別灌胃濃度為0.23g/100ml、0.46g/100ml、 0.69g/100ml的 EGB761， 每天每只小鼠灌胃0.2ml，連續(xù)灌胃30天后采血、收集臟器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 熱應(yīng)激的環(huán)境制作

將恒溫箱設(shè)置到38±1℃，作為熱應(yīng)激的模擬環(huán)境，等溫度基本穩(wěn)定時(shí)將熱應(yīng)激部分的小鼠放入，觀察小鼠狀態(tài)，熱應(yīng)激狀態(tài)2小時(shí)后取出小鼠，采樣。

1.3 心臟、肝臟的采集

為應(yīng)激過后的小鼠進(jìn)行眼球采血，收集血樣1～2ml，待放血完全后，剖開小鼠腹部取其心臟和肝臟部分，分別用冷凍管保存，并標(biāo)示對(duì)應(yīng)編號(hào)。采的血放入離心管，隨即放入離心機(jī)以3000rmp離心10min，用移液槍取上層血清，放入血清管標(biāo)號(hào)并冷凍保存，待檢驗(yàn)。

2 檢測(cè)結(jié)果

（1）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±S.E）表示；

（2）采用單因子方差（One-Way ANOVA）分析；

（3）所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件（以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)）；

（4）利用Excel作圖。

通過比較3個(gè)不同濃度銀杏葉提取物組的HSP70表達(dá)，不難發(fā)現(xiàn)，HSP70表達(dá)與銀杏葉提取物濃度的變化有關(guān)，一定濃度的銀杏葉提取物對(duì)HSP70的表達(dá)有影響，在實(shí)驗(yàn)的3個(gè)銀杏提取物的濃度下，濃度越大，HSP70表達(dá)的值就有越大的趨勢(shì)，表明小鼠抗熱應(yīng)激能力也不斷提高。但小鼠心臟HSP70的表達(dá)在銀杏葉提取物濃度為0.46g/100ml時(shí)達(dá)到頂峰，故不能說明當(dāng)銀杏葉提取物濃度不斷升高時(shí)HSP70的表達(dá)也不斷上升。就此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，銀杏葉提取物對(duì)小鼠熱應(yīng)激的效果明顯。

3 討論

此次實(shí)驗(yàn)證實(shí)銀杏葉提取物能有效的提高HSP70的表達(dá)，能很好的起到抗應(yīng)激的作用，它作為一種新型的藥材，毒副作用小，具有很大的發(fā)展空間。

附表 各組熱應(yīng)激后小鼠心、肝臟器的HSP70的表達(dá)

[1]高華榮.銀杏葉提取物的藥理作用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2010,5（16）,168-169.

[2]Zulkifli,A.Al-Aqil,A.R.Omar,A.Q.Sazili,and M.A.Rajion Crating and heat stress influence blood parameters and heat shock protein 70 expression in broiler chickens showing short or long tonic immobility reactions[C].2009 Poultry Science Association Inc.Received July 16,2008.

[3]Anna Walesiuk,Emil Trofimiuk,Jan J.Braszko.Ginkgo biloba normalizes stressand corticosterone-induced impairment of recall in rats[J].Pharmacological Research 53（2006）123–128.

[4]張剛,許麗麗,王海芳.銀杏葉提取物治療早期糖尿病腎病療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,18（20）:2400-2401.

[5]裴德新,周金彩,楊春英.復(fù)方銀杏口服液治療冠心病168例療效觀察[J].中國(guó)基層醫(yī)藥,2007,14（3）:465.

[6]馬科,徐亮.銀杏葉提取物與青光眼視神經(jīng)保護(hù)[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)眼科分冊(cè),2005,29（3）:181-183.

[7]趙剛,和水祥.銀杏葉提取物的抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè),2005,27（5）:276-278.