陽(yáng)江地區(qū)地貧初篩（血常規(guī)法）陽(yáng)性家庭發(fā)生率與地貧基因檢測(cè)結(jié)果的調(diào)查研究

敖 東 李梅桂 唐元紅 李 婭

廣東省陽(yáng)江市婦幼保健院，廣東陽(yáng)江 529500

陽(yáng)江地區(qū)地貧初篩（血常規(guī)法）陽(yáng)性家庭發(fā)生率與地貧基因檢測(cè)結(jié)果的調(diào)查研究

敖 東 李梅桂 唐元紅 李 婭

廣東省陽(yáng)江市婦幼保健院，廣東陽(yáng)江 529500

目的 探討血常規(guī)法和基因檢測(cè)在地中海貧血中的臨床價(jià)值。 方法 收集陽(yáng)江地區(qū)600對(duì)國(guó)家免費(fèi)孕前優(yōu)生檢驗(yàn)標(biāo)本（疑似地貧），按照操作規(guī)程檢驗(yàn)上述對(duì)象的MCV、MCH，將初篩結(jié)果同地貧基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果 雙方夫妻MCV、MCH下降300對(duì)（600人），基因檢測(cè)確診519人，符合率86.5%；夫妻單方MCV、MCH下降300對(duì)（600人），基因確診244人，符合率81.33%，單方MCV、MCH正?；驍y帶率4.0%。 結(jié)論 地貧高發(fā)地區(qū)血常規(guī)和基因檢測(cè)配合應(yīng)用對(duì)地貧的檢出有重要的指導(dǎo)意義。

陽(yáng)江地區(qū)；地中海貧血；血常規(guī)；地貧基因

地中海貧血（簡(jiǎn)稱地貧），是全球最大的單基因遺傳病之一，該病在全球都有分布，也是我國(guó)目前最常見(jiàn)的遺傳血液病，而廣東省的發(fā)病率達(dá)11.66%，排在全國(guó)第2位[1-2]。地貧基因攜帶者和重型地貧患兒給家庭、社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和不可估量的精神負(fù)擔(dān)[3]。本研究對(duì)陽(yáng)江地區(qū)地貧初篩陽(yáng)性家庭發(fā)生率和地貧基因的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行調(diào)查研究，以期提高該病的檢出率，現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年6月～2014年8月陽(yáng)江地區(qū)600對(duì)（1200人）國(guó)家免費(fèi)孕前優(yōu)生檢驗(yàn)標(biāo)本（疑似地貧），男600人，女600人，均為夫妻關(guān)系，年齡21～36歲，平均（29.8±3.6）歲。

1.2 地貧初篩

采取血常規(guī)法檢查紅細(xì)胞平均體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）。檢測(cè)儀器：西門子血液自動(dòng)分析儀測(cè)定，MCV正常范圍80 ～ 90fL，低于80L提示陽(yáng)性，MCH正常范圍27 ～ 31pg，低于27pg提示陽(yáng)性。

1.3 地貧基因檢測(cè)

用EDTA-K2抗凝血2mL用全血DNA快速提取試劑從抗凝全血中抽提人基因組DNA，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行，所有初篩夫妻的基因檢測(cè)卡上填寫相關(guān)資料和MCV、MCH，檢測(cè)儀器：PCR擴(kuò)增儀（GeneAmp PCR System 9700），試劑盒（潮州凱普生物化學(xué)有限公司）主要成份：α-地貧PCR MIX、α-地貧DNA聚合酶、β-地貧PCR MIX、β-地貧DNA聚合酶、UNG酶、雜交液、WB1、封阻液、酶標(biāo)液、雜交膜、NBT/BCIP、陰性對(duì)照。檢驗(yàn)方法：DNA分離提取、配制PCR擴(kuò)增試劑（含α-地貧和β-地貧擴(kuò)增試劑）、加樣、地貧基因擴(kuò)增程序（α基因：50℃ 15min，95℃ 10min，然后95℃ 1min，68℃30s，72℃ 30s，共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min；β基因條件：50℃ 15min，95℃ 10min，然后94℃ 1min，55℃ 30s，72℃ 30s，共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min）、雜交實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備、PCR產(chǎn)物雜交過(guò)程顯色過(guò)程、結(jié)果的判定（將擴(kuò)增產(chǎn)物同地貧基因突變寡核苷酸探針進(jìn)行反向點(diǎn)雜交，確定基因突變類型）。將反饋回來(lái)的地貧基因結(jié)果與本中心的篩查結(jié)果比對(duì)統(tǒng)計(jì)。符合率=基因陽(yáng)性/初篩陽(yáng)性×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究使用Excel 2003軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料用對(duì)數(shù)、人數(shù)和百分比表示。

2 結(jié)果

雙方夫妻MCV、MCH下降300對(duì)（600人），基因檢測(cè)確診519人，符合率86.5%，MCV、MCH同時(shí)下降用基因檢測(cè)確診的夫妻中，α基因異常有311例（-SEA基因缺失253例占81.35%、-α3.7基因缺失37例占11.90%、-α4.2基因缺失9例占2.89%、ααQS/αα基因突變6例占1.93%、αα/ ααWS基因突變6例占1.93%）；β基因異常154例（-17/β基因突變11例占7.14%、-28/β基因突變56例占36.36%、14-15/β4基因突變4例占2.60%、41-42/β基因突變57例占37.01%、71-72/β基因突變9例占5.84%、654/β基因突變17例占11.04%）。αβ混合型地貧27例。519例基因異常中有228例是α同型地貧基因、有76例夫妻是β同型地貧，對(duì)子代的遺傳機(jī)率是： 1/4為正常胎兒，1/2為輕型地貧（同父母一樣），而1/4為重型地貧患者。其中重型α地貧患者（血紅蛋白Barts?。┨捍蠖嘣?0～40周時(shí)死于宮內(nèi)，或早產(chǎn)或流產(chǎn)，有的出生后數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。重型β地貧患者出生時(shí)接近正常，但6個(gè)月后逐漸出現(xiàn)臨床癥狀，而是心力衰竭和肝纖維化及肝功能衰竭，是導(dǎo)致患兒死亡的重要原因之一，多于5歲前死亡，見(jiàn)表1。

夫妻單方MCV、MCH下降300對(duì)（600人），基因確診244人，符合率81.33%，a基因異常有154例（--SEA基因缺失113例占73.38%、-α3.7基因缺失17例占11.04%、-α4.2基因缺失19例占12.34%、ααQS/αα基因突變3例占1.95%、αα/ααWS基因突變2例占1.298%）；β基因異常66例（-17/β基因突變5例占7.58%、-28/β基因突變24例占36.36%、41-42/β基因突變22例占33.33%、71-72/β基因突變4例占6.06%、654/ β基因突變11例占 16.67%），αβ混合型地貧12例。單方血常規(guī)正常300對(duì)（300人），基因攜帶率4.0%（12例）。

表1 雙方夫妻MCV、MCH下降300對(duì)（600人）

從上面的統(tǒng)計(jì)來(lái)看：陽(yáng)江地區(qū)孕前檢查地貧基因攜帶情況a基因異常以--SEA基因缺失-α3.7基因缺失和為主，非缺失型突變占少數(shù)。β基因突變以-28/β基因突變和41-42/β基因突變?yōu)橹鳎渌蛔円渤Ｒ?jiàn)。見(jiàn)表2。

表2 夫妻單方MCV、MCH下降300對(duì)（600人），基因確診244人

3 討論

相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)廣東平均每9個(gè)人就有地貧基因攜帶者，基因攜帶者可出現(xiàn)不同程度貧血，每800個(gè)新生兒就有1個(gè)可能成為重癥患兒[4-5]。由于重癥地貧患兒沒(méi)有特別有效的治療方法，有的只能靠輸血維持生命，有的未出生時(shí)或出生后不久便死亡，由此可見(jiàn)地貧給家庭、社會(huì)的危害性[6-7]。孕前對(duì)夫妻雙方進(jìn)行地貧篩查是降低新生兒出生缺陷避免重癥地貧兒的出生的關(guān)鍵。PCR基因檢測(cè)是判斷地貧的金標(biāo)準(zhǔn)，其原理是采用生物素標(biāo)記的引物分別對(duì)α-珠蛋白基因缺失及基因突變區(qū)域和β-珠蛋白基因突變區(qū)域進(jìn)行特異性擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物與標(biāo)記不同缺失或突變類型地中海貧血探針的尼龍膜在導(dǎo)流雜交儀上進(jìn)行導(dǎo)流雜交，然后通過(guò)化學(xué)顯色對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀[8]。但該技術(shù)要求條件相對(duì)較高，費(fèi)用大，欠發(fā)達(dá)地區(qū)推廣困難[9]，尋找簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確性好的初篩方法顯得尤為重要。本研究將600對(duì)孕前檢測(cè)夫妻中MCV、MCH同時(shí)或單方下降的視為可疑，然后將該結(jié)果同基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果提示總符合率78.02%，夫妻單方或雙方MCV、MCH下降的符合率與其相一致，和謝建渝等[10-11]報(bào)道結(jié)果相符，研究中夫妻單方MCV、MCH正常的基因攜帶率4.1%。由此可見(jiàn)MCV、MCH對(duì)地貧的篩查具有重要的指導(dǎo)意義，夫妻雙方若存在MCV、MCH下降就需要進(jìn)行基因檢測(cè)，明確診斷，以避免缺陷新生兒的出生[12]。

綜上所述，通過(guò)血常規(guī)初篩和基因檢測(cè)的配合應(yīng)用可排除或診斷雙方夫妻是否患有地貧基因，對(duì)地貧的檢測(cè)率大大提高，明顯降低新生兒出生缺陷，避免重癥地貧兒的出生。

[1] 李霞，楊林，楊承東，等.地中海貧血的篩查與產(chǎn)前診斷[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2008，16（2）：43.

[2] 黃瀅，郭柳薇，李穎莉，等.廣東廣西交界地區(qū)地中海貧血發(fā)生率及基因檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2008，16（9）：12-15.

[3] 龐義堅(jiān).梧州地區(qū)MCV、MCH下降的育齡人群地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2012，20（4）：20-21.

[4] 毛錦芳.MCV、MCH聯(lián)合Hb電泳在地中海貧血篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（14）：3649-3650.

[5] 袁明生，易旺云.紅細(xì)胞平均體積聯(lián)合葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測(cè)定在地中海貧血初篩中的價(jià)值研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2012，15（6B）：1948-1950.[6] 李亞，李忠，何曉明.兩種方法聯(lián)合檢測(cè)在婚前產(chǎn)前篩查地貧中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2011，13（1）：21-22.

[7] 劉丹，李雪丹.MCV、MCH、RBC計(jì)數(shù)和血紅蛋白電泳在地貧篩查中的診斷價(jià)值[J].中國(guó)婦幼保健，20102，8（13）：29-31.

[8] 杜偉，歐陽(yáng)小峰，甘承文，等.重慶地區(qū)8024例地中海貧血篩查結(jié)果及地貧基因型分析[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，39（5）：694-697.

[9] 劉玲，蔣瑋瑩，許世艷，等.廣東地區(qū)地中海貧血致病基因的基因型及β珠蛋白基因多態(tài)性研究[J].中華血液學(xué)雜志，2013，34（7）：595-599.

[10] 謝建渝，虞柯靜，羅文梅，等.423例孕婦地中海貧血篩查及基因檢測(cè)結(jié)果分析和臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（10）：1325-1330.

[11] 秦陸軍，陸鳳蓮，蒙燕.南寧市興寧區(qū)婚檢人群地中海貧血篩查及基因檢測(cè)情況分析[J].華夏醫(yī)學(xué)，2013，26（2）：246-248.

[12] 呂榮鈺，飛球，陳小文，等.常規(guī)基因檢測(cè)陰性的地中海貧血疑似病例再行進(jìn)一步基因檢測(cè)仍有7%的陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)[J].中國(guó)循證兒科雜志，2014，9（4）：274-277.

Investigation of thalassemia screening(blood france)incidence of positive family and thalassemia gene test results for Yangjiang

AO Dong LI Meigui TANG Yuanhong LI Ya
Yangjiang Maternal and Child Care Service Centre of Guangdong Province,Yangjiang 529500,China

Objective To investigate the clinical value of blood france and gene test for thalassemia. Methods 600 pairs of pregnancy eugenic test specimens(suspected thalassemia)were selected from Yangjiang area.The MCV and MCH of the specimen were all detected accordance with the rules.The screening results were then compared with gene test results. Results MCV and MCH of couples decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 519 people.The coincidence rate was 86.5%.MCV and MCH of couples unilateral decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 244 people.The coincidence rate was 81.33%.Gene carrying rate of couples unilateral with normal MCV and MCH was 4.0%. Conclusion Blood application with genetic testing has important guiding significance for thalassemia detection of high thalassemia prone areas.

Yangjiang area;Thalassemia;Blood france;Thalassemia gene

R556

A

2095-0616（2015）07-205-04

2014-11-17）