丙肝抗體、丙肝病毒RNA、白蛋白及谷丙轉(zhuǎn)氨酶在丙肝診斷中的應(yīng)用

曾珠，張衛(wèi)云，魏麗娟

廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510010

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起的一種危害人類健康的傳染性疾病[5]，全球丙肝感染率約為3%，約1.8億人感染了HCV，且每年以3.5萬(wàn)人的速度增長(zhǎng)[7]，我國(guó)估計(jì)有3800萬(wàn)感染者。丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化[1],感染丙肝未及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療，20～30 年有10%～20%的患者可發(fā)展為肝硬化[6]，到失代償期，則生存率下降，1%～5%的患者可能發(fā)生肝細(xì)胞癌而死亡[2]。所以，早期發(fā)現(xiàn)和診斷對(duì)丙肝患者非常重要。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2014年4月至2015年3月在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院和門診病人94 例，其中男性67 例，女性27例；年齡5～87歲，平均年齡51.4±5.2歲。

1.2 標(biāo)本采集

用干燥管采集患者外周靜脈血3～5 mL，用于HCV-RNA 定量、丙肝抗體、白蛋白（albumin，ALB）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）檢測(cè)。

1.3 丙肝抗體的檢測(cè)

采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)丙肝抗體，試劑由北京萬(wàn)泰生物有限公司提供，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.4 HCV-RNA的檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)HCV-RNA 含量，儀器為羅氏480PCR 儀，試劑由上海科華生物工程股份有限公司提供，操作按試劑說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行。HCV-RNA含量＜500拷貝/mL時(shí)判斷為陰性。

1.5 ALB和ALT的檢測(cè)

采用日立7170 型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)ALB和ALT 水平，試劑由中生北控生物科技股份有限公司提供，操作按試劑說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行。ALB 參考范圍為40～55 g/L，ALT參考范圍為＜50 U/L。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，對(duì)ALB 采用相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV-RNA與丙肝抗體檢測(cè)結(jié)果

77 例患者中，丙肝抗體陽(yáng)性56 例，陰性21 例；HCV-RNA 陽(yáng)性71 例，陰性6 例；2 種檢測(cè)方法結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.519，P＜0.05）。

2.2 不同HCV-RNA 拷貝數(shù)組別與ALB 濃度的變化情況

將45例HCV-RNA陽(yáng)性的標(biāo)本按拷貝數(shù)不同分成6 組，檢測(cè)各組ALB 的變化。前4 組隨著HCVRNA拷貝數(shù)的增加，ALB含量依次降低（表1）。

表1 不同HCV-RNA拷貝數(shù)組別與ALB濃度的變化（）

表1 不同HCV-RNA拷貝數(shù)組別與ALB濃度的變化（）

2.3 HCV-RNA含量陽(yáng)性與ALT的關(guān)系

從表2 可以看出，在57 例HCV-RNA 陽(yáng)性的標(biāo)本中，有22例ALT水平異常，并且隨著HCV-RNA拷貝數(shù)的增加，ALT 的異常率及平均值也在上升。經(jīng)相關(guān)性分析，ALT 平均值與HCV-RNA 拷貝數(shù)呈正相關(guān)（r=0.999，P=0.032）。

表2 陽(yáng)性標(biāo)本血清HCV-RNA拷貝數(shù)與ALT的關(guān)系

3 討論

丙型肝炎病毒是單鏈正股RNA病毒，通過(guò)血液進(jìn)行傳播[4]。丙肝發(fā)病過(guò)程中肝炎病毒感染使機(jī)體免疫系統(tǒng)活化，這些活化的細(xì)胞可與因肝炎病毒感染而改變的肝細(xì)胞膜成分發(fā)生免疫應(yīng)答，從而造成肝功能的改變和肝細(xì)胞的壞死。

丙肝感染初期一般都是急性丙肝期，這個(gè)時(shí)期是治療丙肝的最佳時(shí)期，但是不會(huì)有明顯的臨床癥狀；之后會(huì)發(fā)展為慢性丙肝，慢性丙肝危害大，容易發(fā)展為肝硬化、肝癌[3]。目前檢測(cè)HCV 主要依賴對(duì)HCV抗體的檢測(cè)，感染HCV后，丙肝抗體出現(xiàn)較慢，一般情況下，抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換可以延遲到暴露后幾個(gè)月才發(fā)生，此時(shí)可發(fā)生丙肝抗體的假陰性，即窗口期。丙肝的窗口期一般為3～6 個(gè)月，因此第一次丙肝抗體檢查為陰性時(shí)，并不能說(shuō)明沒(méi)有感染HCV，這就為丙肝的早期診斷造成了困難。HCVRNA 是HCV 的核心組成成分，是HCV 復(fù)制最直接可靠的指標(biāo)，可以反映HCV的復(fù)制活躍程度。感染HCV 后1～2 周，血清中即可檢測(cè)到HCV-RNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)準(zhǔn)確率高，可真實(shí)地反映HCV 的復(fù)制情況，可以完善因窗口期而漏診的丙肝抗體檢測(cè)。該技術(shù)大大縮短了檢測(cè)丙肝的“窗口期”，有助于早期確診疾病。

從2.1結(jié)果可以看出2種檢測(cè)方法有差異，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法的敏感性遠(yuǎn)高于ELISA 法，從而可以防止在感染早期發(fā)生漏診。研究發(fā)現(xiàn)有些病例有抗HCV 陽(yáng)性而HCV-RNA 陰性的情況，可能是由于經(jīng)過(guò)治療使病毒復(fù)制減慢或停止，血清中的HCVRNA 拷貝數(shù)低于最低檢出值，而丙肝抗體在體內(nèi)存在時(shí)間長(zhǎng)，故可出現(xiàn)丙肝抗體陽(yáng)性而HCV-RNA 陰性的情況；也有可能是因HCV-RNA十分脆弱，易被血細(xì)胞含有的RNA 酶降解，并且HCV-RNA 易受進(jìn)食的影響，易與迅速增多的血中脂肪及脂蛋白結(jié)合，從而降低檢出率，出現(xiàn)假陰性。

ALB屬于球蛋白，主要存在于人體血漿中，主要由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成。ALB降低常見(jiàn)于肝硬化合并腹水及其他肝功能嚴(yán)重?fù)p害，如急性肝壞死、中毒性肝炎等[8]。肝損傷時(shí)ALB 合成、運(yùn)輸和釋放發(fā)生障礙，引起血清ALB 減少。從表1 數(shù)據(jù)可看出不同HCVRNA 拷貝數(shù)組別與ALB 濃度的變化有相關(guān)性，前4組ALB濃度隨著HCV-RNA拷貝數(shù)的增高而逐步下降，而后2 組ALB 濃度隨著HCV-RNA 拷貝數(shù)的增高反而上升,這也與近年來(lái)一些研究相符合，部分患者血清HCV-RNA 含量高，但肝臟組織僅呈輕度或中度損傷，即HCV-RNA陽(yáng)性而ALB水平正常。

ALT 主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，ALT 明顯升高見(jiàn)于急性病毒性肝炎、肝炎病變發(fā)展為肝硬化與肝癌并處于活動(dòng)期時(shí)[9-12]，被世界衛(wèi)生組織推薦為肝臟功能損傷最敏感的檢測(cè)指標(biāo)。在本研究中，我們對(duì)HCV-RNA 陽(yáng)性病例的ALT 水平進(jìn)行了比較，57 例HCV-RNA 陽(yáng)性病例中有22 例ALT 異常，異常率為38.6%。ALT異常率越高，說(shuō)明肝臟受到的破壞越嚴(yán)重。表2 結(jié)果顯示HCV-RNA 拷貝數(shù)與ALT 水平呈正相關(guān)，說(shuō)明HCV-RNA是在肝細(xì)胞中復(fù)制，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生直接或間接的損害。同時(shí)，HCV-RNA 的含量越高，ALT水平越高，說(shuō)明肝臟受到損傷的程度可能越嚴(yán)重，必須盡快進(jìn)行抗HCV治療。

綜上所述，HCV-RNA檢測(cè)是反映HCV感染、活動(dòng)和復(fù)制程度的可靠指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)丙肝抗體、ALB和ALT，有利于早期診斷，可以更好地為臨床服務(wù)。

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[2]錢明,袁君君,傅劍釗,等.HCV-RNA 抗-HCV 和ALT 聯(lián)合檢測(cè)在丙肝中診斷的應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2011,06(14):5-6.

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