早期發(fā)育滸苔對(duì)2株常見(jiàn)赤潮藻的化感效應(yīng)＊

劉 青，顏 天，周名江，張清春，林佳寧

（1.中國(guó)科學(xué)院 海洋研究所海洋生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島266071；2.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049）

自2007年我國(guó)黃海海域連續(xù)8a發(fā)生了大規(guī)模的滸苔（Ulvaprolifera）綠潮災(zāi)害。滸苔綠潮形成后，暴發(fā)生物量大，覆蓋面積廣，持續(xù)時(shí)間久，生態(tài)環(huán)境效應(yīng)不容忽視。滸苔與微藻同處于海洋生態(tài)系統(tǒng)的初級(jí)生產(chǎn)者地位，生態(tài)位有一定的重疊，因此不可避免地產(chǎn)生相互競(jìng)爭(zhēng)。目前普遍認(rèn)為大型海藻對(duì)海域中微型浮游植物的影響是通過(guò)多種途徑進(jìn)行的。滸苔在風(fēng)浪的影響下脫離固著基，漂浮在海面上，通過(guò)遮蔽陽(yáng)光來(lái)影響微藻的生長(zhǎng)；它們還能夠快速地吸收營(yíng)養(yǎng)鹽，與微藻進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)［1－2］；同時(shí)它們還能向環(huán)境中分泌抑藻物質(zhì)，抑制微藻的生長(zhǎng)，甚至可以防止赤潮的暴發(fā)性增殖［3－4］。已有研究表明，形成綠潮的大型海藻可通過(guò)化感機(jī)制影響海域的生物種類(lèi)分布與生態(tài)格局，從而改變海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和演替順序［5－7］。

針對(duì)我國(guó)黃海海域連年暴發(fā)的滸苔綠潮災(zāi)害的研究工作均表明，滸苔成熟藻體能通過(guò)化感作用來(lái)抑制微藻的生長(zhǎng)，甚至致其死亡［8－11］。滸苔早期發(fā)育階段的微觀繁殖體是否具有同樣的影響效應(yīng)呢？微觀繁殖體作為大型綠藻的早期形成產(chǎn)物，包括孢子、配子、合子這些無(wú)細(xì)胞壁保護(hù)的裸露單細(xì)胞及固著萌發(fā)后細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單的萌發(fā)幼體。在適宜的附著基和環(huán)境條件下，微觀繁殖體會(huì)迅速萌發(fā)成藻絲體，這個(gè)萌發(fā)期是滸苔生長(zhǎng)發(fā)育必經(jīng)的重要階段［12－14］。Song等［15］和Li等［16］分別在綠潮發(fā)生的不同時(shí)期，對(duì)黃海綠潮形成前后不同時(shí)空的滸苔微觀繁殖體進(jìn)行定量分析，發(fā)現(xiàn)微觀繁殖體不僅是綠潮形成前的最初形式，也是綠潮規(guī)模擴(kuò)增的途徑之一。同時(shí)作為種子庫(kù)為來(lái)年滸苔綠潮暴發(fā)提供了一定的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此它們?cè)谡麄€(gè)綠潮發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到關(guān)鍵性的作用。然而關(guān)于這些微觀繁殖體對(duì)微藻的影響研究目前還未見(jiàn)報(bào)道。

自2000年我國(guó)赤潮的發(fā)生頻率和規(guī)模也呈現(xiàn)出急劇擴(kuò)大的態(tài)勢(shì)，并且有毒、有害的赤潮原因種也在不斷增加。塔瑪亞歷山大藻可分泌藻毒素，屬于一類(lèi)危害較嚴(yán)重的有毒甲藻。近年來(lái)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由其引發(fā)的赤潮在我國(guó)南北各大海域均有發(fā)生。東海原甲藻是我國(guó)海域近年來(lái)常見(jiàn)的藻華原因種，因其引發(fā)的赤潮暴發(fā)規(guī)模大，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)而引起了廣泛關(guān)注［17－18］。因此，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室控制條件下探索了滸苔早期發(fā)育階段（微觀繁殖體萌發(fā)階段）對(duì)這2株赤潮藻類(lèi)的化感作用，以期豐富滸苔綠潮對(duì)海洋浮游植物潛在影響效應(yīng)這一學(xué)科領(lǐng)域的理論研究，并對(duì)赤潮和綠潮有關(guān)方面的研究提供一定的理論資料。

1 材料和方法

1.1 微藻與滸苔的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)所用微藻均來(lái)自中國(guó)科學(xué)院海洋研究所海洋生態(tài)實(shí)驗(yàn)室。塔瑪亞歷山大藻（Alexandriumtamarense）ATHK藻株于1995年分離自中國(guó)南海香港海域，由暨南大學(xué)提供；東海原甲藻（Prorocentrumdonghaiens）PDDH藻株于2004年分離自東海長(zhǎng)江口海域，由國(guó)家海洋局第二海洋研究所提供。將上述微藻分別接種在500mL三角燒瓶中培養(yǎng)至指數(shù)生長(zhǎng)期待用，培養(yǎng)液采用f／2營(yíng)養(yǎng)鹽配方，培養(yǎng)溫度為（20±1）℃，光照4 000lx，光暗比為14∶10。實(shí)驗(yàn)海水取自青島太平角的表層海水，經(jīng)沙濾、沉淀，0.45μm混合纖維濾膜過(guò)濾后，再用高壓滅菌鍋滅菌（121℃，20min）。

滸苔（石莼屬綠藻）于2011－07采自青島匯泉灣。將采集的新鮮滸苔去除泥沙，再用滅菌海水漂洗3～4次，鏡檢確認(rèn)無(wú)雜藻后，暫養(yǎng)于f／2培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件和所用海水均與微藻相同。

1.2 滸苔微觀繁殖體的獲得

選取滸苔配子主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察（鞭毛數(shù)和個(gè)體大?。┘摆吂庑詸z測(cè)來(lái)判斷：配子大小約為6μm×3μm，呈長(zhǎng)橢圓形，前端透明，后端為綠色的色素體，細(xì)胞內(nèi)一般含有1個(gè)蛋白核，頂生2根鞭毛使其可以快速運(yùn)動(dòng)；在趨光性檢測(cè)中呈現(xiàn)明顯的正趨光。

利用切斷的方法誘導(dǎo)滸苔釋放配子。挑選單株滸苔配子體，將藻體切為1～2cm長(zhǎng)的片段置于盛有200mL f／2培養(yǎng)液的三角燒瓶中，誘導(dǎo)2～3d，觀察部分滸苔藻段變?yōu)辄S色后，單獨(dú)挑取黃色藻段放入培養(yǎng)皿中，直至滸苔釋放配子。待培養(yǎng)皿中藻體釋放完畢變?yōu)榘咨螅〕鲈宥?，?根鞭毛的配子收集。整個(gè)過(guò)程為防止配子固著，在盡量短的時(shí)間內(nèi)完成操作。將收集的配子液搖勻，顯微計(jì)數(shù)后，迅速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 滸苔配子在萌發(fā)階段對(duì)2株赤潮藻生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組為各赤潮藻單培養(yǎng)組，實(shí)驗(yàn)組分別為滸苔配子與各赤潮藻共培養(yǎng)組，在盛有40mL培養(yǎng)液的小燒杯中進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1天，將新鮮釋放的滸苔配子（2×104個(gè)／mL）接種到含f／2培養(yǎng)液的小燒杯中，避光培養(yǎng)以保證滸苔配子的隨機(jī)固著。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)恢復(fù)光照培養(yǎng)便于配子萌發(fā)，并加入微藻藻株，微藻的初始密度設(shè)置為0.1×104個(gè)／mL，每組包含3個(gè)重復(fù)。每日定時(shí)搖動(dòng)小燒杯，防止微藻貼壁生長(zhǎng)。每天取0.2mL培養(yǎng)液，用Lugol＇s試劑固定后，計(jì)數(shù)藻細(xì)胞密度，同時(shí)向小燒杯中加入0.2mL 10倍f／2培養(yǎng)液，以維持培養(yǎng)液體積恒定并避免營(yíng)養(yǎng)限制。實(shí)驗(yàn)維持10d，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算微藻的生長(zhǎng)抑制率I＝（1－N／N0）×100%（N為共培養(yǎng)組中藻細(xì)胞密度；N0為單培養(yǎng)組中藻細(xì)胞密度）。

1.3.2 不同處理的滸苔在萌發(fā)階段對(duì)2株赤潮藻生長(zhǎng)的影響

1）不同密度的滸苔配子添加組對(duì)塔瑪亞歷山大藻生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)同樣采用滸苔配子和微藻共培養(yǎng)系統(tǒng)。滸苔的起始密度分別設(shè)為2×104，1×104，0.1×104和0.01×104個(gè)／mL，塔瑪亞歷山大藻的初始密度設(shè)置為0.1×104個(gè)／mL。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1天，分別將不同接種密度的滸苔配子避光培養(yǎng)以保證其隨機(jī)固著。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)恢復(fù)正常光照培養(yǎng)條件，并加入塔瑪亞歷山大藻藻株，實(shí)驗(yàn)組為滸苔配子與塔瑪亞歷山大藻共培養(yǎng)組，對(duì)照組為塔瑪亞歷山大藻單培養(yǎng)組，每組包含3個(gè)重復(fù)。每隔1d取0.2mL培養(yǎng)液用于計(jì)數(shù)，同時(shí)加入0.2mL 10倍f／2培養(yǎng)液，以維持培養(yǎng)液體積恒定并避免營(yíng)養(yǎng)限制。實(shí)驗(yàn)維持20d，并分別在第10天和第20天計(jì)算微藻生長(zhǎng)抑制率。

2）滸苔配子一次性培養(yǎng)濾液對(duì)塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻生長(zhǎng)的影響

將初始接種密度為2×104個(gè)／mL的滸苔配子在小燒杯中培養(yǎng)10d，將培養(yǎng)液經(jīng)滅菌的0.45μm混合纖維濾膜過(guò)濾，并用10倍f／2營(yíng)養(yǎng)液加富，得到滸苔配子培養(yǎng)濾液。立即分別接種處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻，對(duì)照組為相同條件下培養(yǎng)于f／2加富海水中的塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻單培養(yǎng)組。微藻的初始密度都設(shè)置為0.1×104個(gè)／mL。實(shí)驗(yàn)維持20d，并分別在第10天和20天計(jì)算各微藻生長(zhǎng)抑制率。

3）滸苔半連續(xù)培養(yǎng)濾液對(duì)塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)組分別為滸苔配子培養(yǎng)過(guò)濾液與赤潮微藻共培養(yǎng)組，將塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻接種在滸苔的培養(yǎng)過(guò)濾液中，滸苔配子培養(yǎng)過(guò)濾液獲取同一次性培養(yǎng)濾液。每隔1d將小燒杯中的培養(yǎng)液移出4mL，然后添加4mL營(yíng)養(yǎng)加富的新鮮滸苔配子培養(yǎng)濾液以保持培養(yǎng)液體積的恒定。對(duì)照組添加4mL f／2加富的滅菌海水，培養(yǎng)條件、營(yíng)養(yǎng)水平、密度設(shè)置與共培養(yǎng)組一致。實(shí)驗(yàn)設(shè)置同一次性培養(yǎng)濾液。

4）高溫處理的滸苔配子培養(yǎng)過(guò)濾液對(duì)塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻生長(zhǎng)的影響

將培養(yǎng)滸苔配子的過(guò)濾液在高壓滅菌鍋中滅菌，冷卻后分別接種塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻。對(duì)照組為相同條件下培養(yǎng)于f／2加富消毒海水中的塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻單培養(yǎng)組。實(shí)驗(yàn)設(shè)置同滸苔配子一次性培養(yǎng)濾液。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示（n＝3）。采用Excel做圖，統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0進(jìn)行單因素方差分析（one－way ANOVA），并用Duncan進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)和差異顯著性分析，P＜0.05被認(rèn)為是差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 滸苔配子萌發(fā)階段對(duì)2株赤潮微藻生長(zhǎng)的影響

在與滸苔配子共培養(yǎng)情況下，2株赤潮微藻的生長(zhǎng)均受到了一定的影響（圖1）。實(shí)驗(yàn)組中微藻的生物量水平全部低于對(duì)照組的，即滸苔配子添加對(duì)2株微藻的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出抑制作用，在第10天對(duì)塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻的生長(zhǎng)抑制率分別達(dá)到了28%和39%，與對(duì)照組達(dá)到了顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 不同初始密度的滸苔配子對(duì)塔瑪亞歷山大藻生長(zhǎng)的影響

共培養(yǎng)條件下不同初始密度下的滸苔配子對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出一定的影響，并隨著滸苔接種密度的增大，其對(duì)塔瑪亞歷山大藻生長(zhǎng)的抑制作用越加明顯（圖2）。與對(duì)照組相比，其中2×104個(gè)／mL滸苔配子添加組，塔瑪亞歷山大藻藻細(xì)胞指數(shù)期增長(zhǎng)較為緩慢，然后迅速進(jìn)入衰亡期，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至第22天即完全死亡，所能達(dá)到的最高細(xì)胞密度僅為對(duì)照組的47%；1×104個(gè)／mL滸苔配子添加組，塔瑪亞歷山大藻的生命周期也短于對(duì)照組，所能達(dá)到的最高細(xì)胞密度僅為對(duì)照組的65%；0.1×104個(gè)／mL滸苔配子添加組的抑藻效果稍弱，但赤潮微藻的細(xì)胞生長(zhǎng)也較為緩慢，所達(dá)到的最大細(xì)胞密度為對(duì)照組的80%。較低密度（0.01×104個(gè)／mL）的滸苔配子添加組對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的抑制作用，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線較為相似。

圖1 滸苔配子在萌發(fā)階段對(duì)2株赤潮微藻生長(zhǎng)的影響Fig.1 Effects of U.proliferagametes at germination stage on the growth of two microalgal red tide strains

圖2 不同接種密度的滸苔配子對(duì)塔瑪亞歷山大藻生長(zhǎng)的影響Fig.2 Effects of different initial densities s of U.proliferagametes on the growth of A.tamarense

2.3 不同處理的滸苔配子在萌發(fā)階段對(duì)塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻生長(zhǎng)的影響

與對(duì)照組相比，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第10天和第20天，只有滸苔配子添加組和滸苔配子培養(yǎng)濾液連續(xù)添加組顯著抑制了塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)（P＜0.05），而滸苔配子培養(yǎng)濾液一次性添加組未對(duì)微藻的生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯的影響（圖3）。這說(shuō)明抑藻物質(zhì)不但存在于滸苔組織中，還可以分泌到培養(yǎng)液中起作用，但是需要連續(xù)的添加才能起到較好的抑藻效果。高溫處理過(guò)的滸苔配子培養(yǎng)濾液也對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)無(wú)顯著的抑制作用，表明該抑藻物質(zhì)不穩(wěn)定，易在高溫下降解。實(shí)驗(yàn)第10天時(shí)，滸苔配子添加組和滸苔配子培養(yǎng)濾液連續(xù)添加組對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)抑制率為28%和25%，在第20天，對(duì)其的生長(zhǎng)抑制率分別達(dá)到83%和63%。說(shuō)明隨著共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，這2個(gè)處理組對(duì)塔瑪亞歷山大藻的抑制作用不斷加強(qiáng)，而滸苔生長(zhǎng)所分泌克生物質(zhì)的不斷增加應(yīng)該是導(dǎo)致此現(xiàn)象的直接原因。

與對(duì)照組相比，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第10天和20天時(shí)，滸苔配子添加組和滸苔配子培養(yǎng)濾液連續(xù)添加組均對(duì)東海原甲藻的生長(zhǎng)產(chǎn)生了明顯的抑制作用（P＜0.05），而滸苔配子培養(yǎng)濾液一次性添加組和高溫處理過(guò)的滸苔配子培養(yǎng)濾液添加組均未表現(xiàn)出抑藻效果（圖4）。這也說(shuō)明該滸苔分泌的抑藻物質(zhì)容易隨著時(shí)間或在高溫下降解。比較發(fā)現(xiàn)，第10天2個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)微藻的生長(zhǎng)抑制率分別為39%和24%，滸苔配子添加組比滸苔配子培養(yǎng)濾液添加組對(duì)東海原甲藻生長(zhǎng)的抑制作用更明顯。第20天時(shí)，這2個(gè)不同的處理組對(duì)東海原甲藻生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到了40%和27%，稍高于第10天的。

圖3 不同處理組的滸苔配子在萌發(fā)階段對(duì)塔瑪亞歷山大藻生長(zhǎng)的影響Fig.3 Effects of U.proliferagametes at germination stage on the growth of A.tamarense

圖4 不同處理組的滸苔配子在萌發(fā)階段對(duì)東海原甲藻生長(zhǎng)的影響Fig.4 Effects of U.proliferagametes at germination stage on the growth of P.donghaiense

3 討論

藻類(lèi)的化感作用是普遍存在的現(xiàn)象，在浮游植物種間競(jìng)爭(zhēng)、群落演替甚至赤潮發(fā)生發(fā)展消亡過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用，已引起了研究人員的廣泛關(guān)注。石莼屬綠藻對(duì)海洋微藻的影響是由多種作用機(jī)制造成的，化感作用和營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)是其中2種最重要的機(jī)制?；凶饔?，是一種生物通過(guò)向環(huán)境釋放化學(xué)物質(zhì)而對(duì)其附近的另一些生物產(chǎn)生直接或間接的、有利或有害作用的現(xiàn)象［19］。近年來(lái)我國(guó)黃海海域大面積的滸苔綠潮與赤潮藻的化感作用研究表明，滸苔成熟藻體會(huì)通過(guò)分泌化感物質(zhì)來(lái)影響微藻的生長(zhǎng)［8－11］。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室控制條件下進(jìn)行的研究，首先排除了溫度、光照等環(huán)境因素的變化可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響，其次在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)添加充足的營(yíng)養(yǎng)鹽來(lái)避免營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)。因此，我們可以判定化感作用應(yīng)是引起這種影響效應(yīng)的根本原因。而且滸苔在早期微觀繁殖體萌發(fā)階段即可通過(guò)化感效應(yīng)抑制某些赤潮微藻的生長(zhǎng)，并不局限于成熟的藻體階段。

滸苔配子在萌發(fā)階段，就可以影響赤潮微藻塔瑪亞歷山大藻和東海原甲藻的生長(zhǎng)，并且隨著初始接種密度的升高，其對(duì)塔瑪亞歷山大藻的抑制作用逐漸加強(qiáng)。配子添加組和濾液連續(xù)添加組均對(duì)這2株赤潮藻的生長(zhǎng)產(chǎn)生了明顯的抑制作用。這說(shuō)明滸苔微觀繁殖體組織中確實(shí)存在著抑藻物質(zhì)，并且可以分泌到培養(yǎng)液中起作用，但是抑制效應(yīng)會(huì)隨著時(shí)間的進(jìn)行而減弱，需要連續(xù)的添加累積才能起到較好的抑藻效果。滸苔成體的抑藻效應(yīng)也有相同的報(bào)道，研究者認(rèn)為化感物質(zhì)具有一定的累積效應(yīng)，當(dāng)累積到一定的閾值時(shí)這種效應(yīng)才會(huì)顯現(xiàn)［9］。因此實(shí)驗(yàn)中化感物質(zhì)的連續(xù)分泌及添加是抑制微藻生長(zhǎng)的關(guān)鍵。高溫處理過(guò)的滸苔濾液對(duì)2種微藻的生長(zhǎng)均無(wú)顯著的抑制作用，表明該抑藻物質(zhì)不穩(wěn)定，易在高溫下降解?；粼拥龋?］也曾報(bào)道新鮮的滸苔藻體培養(yǎng)濾液在經(jīng)高溫后對(duì)某些微藻抑制作用消除的現(xiàn)象。

隨著對(duì)石莼屬綠藻化感作用研究的日益增多，關(guān)于其分泌的化感物質(zhì)也已經(jīng)形成了一些初步的看法。Alamsjah等［20］從孔石莼中分離出抑制赤潮異彎藻的活性物質(zhì)，主要成分為多不飽和脂肪酸；Jin和Dong［21］也認(rèn)為不飽和脂肪酸可能是孔石莼產(chǎn)生的克生物質(zhì)的重要組成成分之一。夏鈺妹［22］從腸滸苔的有機(jī)相提取物中分離純化出3個(gè)活性化合物，可能的抑藻成分被認(rèn)為是α－亞麻酸。韓秀榮等［10］認(rèn)為滸苔分泌的化感物質(zhì)具有相對(duì)較高的極性；孫穎穎等［23］對(duì)滸苔抑藻組分進(jìn)行進(jìn)一步分離，發(fā)現(xiàn)其含有內(nèi)酯和香豆素類(lèi)化合物。這都表明石莼屬不同藻種分泌的化感物質(zhì)是不同的，這種差異性可能與報(bào)道的化感物質(zhì)含有多種成分有關(guān)。Jensen［24］指出大型海藻的微觀繁殖體在早期的固著萌發(fā)階段，會(huì)通過(guò)釋放一定的代謝產(chǎn)物來(lái)影響周?chē)奈h(huán)境。Amsler和Searles的研究［25］更表明大型海藻一些特性的形成，是在其微觀繁殖體階段就建立的。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合這種效應(yīng)，說(shuō)明滸苔能夠分泌化感物質(zhì)的特性在早期發(fā)育階段就已經(jīng)形成，至于滸苔微觀繁殖體是否同成熟藻絲體分泌相同的抑藻物質(zhì)，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

對(duì)比滸苔微觀繁殖體與成熟藻體的抑藻試驗(yàn)結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)微觀繁殖體在萌發(fā)階段的第10天對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)抑制率為28%，而生物量為1.0g／L的滸苔成熟藻絲體在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第10天時(shí)對(duì)塔瑪亞歷山大藻的生長(zhǎng)抑制率大約為50%［8］。滸苔微觀繁殖體在本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第10天僅剛完成萌發(fā)過(guò)程，細(xì)胞結(jié)構(gòu)還較為簡(jiǎn)單，生物量顯著低于成熟藻體的1.0g／L。因此倘若換算成同等生物量，其對(duì)微藻產(chǎn)生的抑制作用并不低于滸苔藻絲體，所以滸苔微觀繁殖體的化感作用是不容忽視的。滸苔綠潮在其整個(gè)孕育、發(fā)生發(fā)展及消亡過(guò)程中，都有大量微觀繁殖體的形成。因此，要全面地評(píng)價(jià)滸苔綠潮的生態(tài)效應(yīng)，就不僅要從滸苔暴發(fā)后形成大量生物量遮蔽陽(yáng)光，快速吸收營(yíng)養(yǎng)鹽，消亡時(shí)腐爛分解的影響方面考慮，還要考慮大量滸苔微觀繁殖體孕育階段可能造成的影響。我們的研究結(jié)果豐富并證實(shí)了滸苔綠潮潛在的生態(tài)效應(yīng)。另外，滸苔對(duì)常見(jiàn)赤潮藻種生長(zhǎng)的影響效應(yīng)，可能會(huì)降低赤潮發(fā)生的幾率，因此在開(kāi)展赤潮的生物防治以及海域的生態(tài)修復(fù)等方面都有著積極的意義。

（References）：

［1］SFRISO A，PAVONI B.Macroalgae and phytoplankton competition in the central Venice lagoon［J］.Environmental Technology，1994，15（1）：1－14.

［2］BARCO J W，JAMES W F.Effects of submerged aquatic macrophytes on nutrient dynamics，sedimentation，and resuspension［C］∥JEPPESEN E，S?NDERGAARD M，CHRISTOFFERSEN K.The structuring role of submerged macrophytes in lakes.New York：Springer，1998：197－217.

［3］ANDERSON D M.Turning back the harmful red tide［J］.Nature，1997，388：513－514.

［4］JEONG J H，JIN H J，SOHN C H，et al.Algicidal activity of the seaweedCorallinapiluliferaagainst red tide microalgae［J］.Journal of Applied Phycology，2000，12（1）：37－43.

［5］JASSER I.The influence of macrophytes on a phytoplankton community in experimental conditions［J］.Hydrobiologia，1995，306（1）：21－32.

［6］FLETCHER R T.The occurrence of＇green tide＇［C］∥SCHRAMM W，NIENHUIS P H.Marine benthic vegetation－recent changes and the effects of eutrophication.Berlin：Springer，1996：7－43.

［7］KOMER S，NICKIISCH A.Allelopathic growth inhibition of selected phytoplankton species by submerged macrophytes［J］.Journal of Phycology，2002，38（5）：862－871.

［8］HUO Y Z，TIAN Q T，XU S N，et al.Allelopathic effects ofUlvaproliferaon growth ofKareniamikimotoi［J］.Marine Environmental Science，2010，29（4）：496－508.霍元子，田千桃，徐珊楠，等.滸苔對(duì)米氏凱倫藻生長(zhǎng)的克生作用［J］.海洋環(huán)境科學(xué)，2010，29（4）：496－499.

［9］JIA R，WU M，CAI C E，et al.Allelopathic effects ofUlvaproliferaonHeterosigmaakashiwo［J］.Journal of Fisheries of China，2012，36（4）：562－567.賈睿，吳敏，蔡春爾，等.滸苔對(duì)赤潮異灣藻的克生作用［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2012，36（4）：562－567.

［10］HAN X R，GAO S，HOU J N，et al.Allelopathic effects of extracts fromUlvaproliferapowders on the growth ofProrocentrum donghaienseandSkeletonemacostatum［J］.Acta Ecologica Sinica，2013，33（23）：7417－7429.韓秀榮，高嵩，侯俊妮，等.滸苔干粉末提取物對(duì)東海原甲藻和中肋骨條藻的克生作用［J］.生態(tài)學(xué)報(bào)，33（23）：7417－7429.

［11］WANG R J，WANG Y，ZHOU J，et al.Algicidal activity ofUlvapertusaandUlvaproliferaonProrocentrumdonghaienseunder laboratory conditions［J］.African Journal of Microbiology Research，2013，7（34）：4389－4396.

［12］CHAPMAN A R O.Population and community ecology of seaweeds［C］∥BLAXTER J H S，SOUTHWOOD A J.Advances in Marine Biology.London：Academic Press，1986：1－161.

［13］CLAYTON M N.Propagules of marine macroalgae：structure and development［J］.British Phycological Journal，1992，27（3）：219－232.

［14］SANTELICES B，AEDO D，HOFFMANN A.Banks of microscopic forms and survival to darkness of propagules and microscopic stages of macroalgae［J］.Revista Chilena de Historia Natural，2002，75：547－555.

［15］SONG W，LI Y，F(xiàn)ANG S，et al.Temporal and spatial distributions of green algae micro－propagules in the coastal waters of the Subei Shoal，China［J］.Estuarine，Coastal and Shelf Science，2014，doi：1016／j.cess.2014.08.006.

［16］LI Y，SONG W，XIAO J，et al.Tempo－spatial distribution and species diversity of green algae micro－propagules in the Yellow Sea during the large－scale green tide development［J］.Harmful Algae，2014，39：40－47.

［17］QI Y Z，WANG Y.What the Prorocentrum species should be［J］？Chinese Journal of Applied Ecology，2003，14（7）：1188－1190.齊雨藻，王艷.我國(guó)東海原甲藻赤潮應(yīng)屬哪種［J］？應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2003，14（7）：1188－1190.

［18］ZHOU M J，YAN T，ZOU J Z.Preliminary analysis of the characteristics of red tide areas in Changjiang River estuary and its adjacent sea［J］.Chinese Journal of Applied Ecology，2003，14（7）：1031－1038.周名江，顏天，鄒景忠.長(zhǎng)江口鄰近海域赤潮發(fā)生區(qū)基本特征初探［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2003，14（7）：1031－1038.

［19］RICE E L.Allelopathy［M］.Orlando，F(xiàn)lorida：Academic Press，1984.

［20］ALAMSJAH M A，HIRAO S，ISHIBASHII F，et al.Isolation and structure determination of algicidal compounds fromUlvafasciata［J］.Bioscience，Biotechnology，and Biochemistry，2005，69（11）：2186－2192.

［21］JIN Q，DONG S L.Comparative studies on the allelopathic effects of two different strains ofUlvapertusaonHeterosigmaakashiwoand Alexandrium tamarense［J］.Journal of Experimental Marine Biology and Ecology，2003，293（1）：41－55.

［22］XIA Y M.Inhibitory effects and the mechanism of the marine algaeEnteromorphaintestinalison the growth of the red tide microalgae［D］.Ningbo：Ningbo University，2012.夏鈺妹.大型綠藻滸苔對(duì)赤潮藻的抑制作用及其機(jī)理研究［D］.寧波：寧波大學(xué)，2012.

［23］SUN Y Y，DONG X K，LI G，et al.Isolation of antialgal substances fromEnteromorphaproliferaand its growth inhibition on the red tide microalgae［J］.Journal of Fisheries of China，2014，38（6）：813－819.孫穎穎，董曉柯，李光，等.滸苔抑藻物質(zhì)的分離及其對(duì)赤潮微藻的抑制作用［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2014，38（6）：813－819.

［24］JENSEN A.Chemical conditioning of seawater by algal growth and development［C］∥FAULKNER D J，F(xiàn)ENICAL W H.Marine Natural Products Chemistry，New York：Plenum Press，1977：329－344.

［25］AMSLER C D，SEARLES R B.Vertical distribution of seaweed spores in a water column offshore of North Carolina［J］.Journal of Phycology，1980，16（4）：617－619.