地黃健憶丸治療老年癡呆癥的藥效學(xué)研究

張德志

（哈爾濱凱程制藥有限公司·150025）

目前我國已經(jīng)進入老齡化高峰期，老年癡呆的患病率也越來越高。老年癡呆給患者本人、家庭和社會造成沉重的負擔，是老齡化社會必須要面對的一個重要衛(wèi)生問題[1]，開發(fā)治療老年癡呆的中藥新藥是目前業(yè)內(nèi)關(guān)注的重點。地黃健憶丸是在地黃飲子的基礎(chǔ)上加減而成，本實驗在前期藥學(xué)研究的基礎(chǔ)上根據(jù)功能主治，通過該藥對模型動物空間記憶能力、被動回避條件反射記憶的影響觀察其改善癡呆后記憶作用，及對模型動物腦組織SOD、MDA影響的藥效研究驗證其防治癡呆的作用。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

小鼠，清潔級，體重18～22g，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK(京 )2012-0001。

1.2 實驗藥物

地黃健憶丸，自制具有補腎益精、健腦益智的功效，用于腎虛型癡呆病的健忘失認等?？诜?，一日3次，一次4～6g。飯后服用，或遵醫(yī)囑。批號131105

復(fù)方活腦舒膠囊：吉林省輝南長龍生化藥業(yè)股份有限公司。功能主治：補氣養(yǎng)血，健腦益智，用于健忘氣血虧虛證，記憶減退，倦怠乏力，頭暈心悸，以及老年性癡呆以上癥狀的改善。用法用量：口服，一次3粒（重癥5粒），一日2次，飯后服；12～15天為一療程。規(guī)格：每粒裝0.25g。批號130706。

1.3 實驗試劑

Aβ25-35由美國Singma公司提供，貨號：A4559、生理鹽水、多聚甲醛、水合氯醛等常規(guī)試劑均為市售。

1.4 實驗儀器

腦立體定位儀，型號：ST51600美國；程控水迷宮，型號：SMG-2中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所制；程控避暗箱，型號：SBA-2中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所制；半自動生化儀，型號：70VB0370法國。

2 實驗方法

2.1地黃健憶丸對AD模型小鼠水迷宮潛伏期的影響

2.1.1 AD小鼠模型制備[2]小鼠均用戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉后固定在腦立體定位儀上，剪開頭頂部皮膚，酒精棉擦拭，暴露出前囟，采用右側(cè)腦室定位，自前囟向后1.8mm，矢狀縫旁開1.5 mm，顱骨表面向下2.5mm處注射3μLAβ25-35 (2μg/μL，無菌生理鹽水配制)，假手術(shù)組用同樣方法注射等體積的無菌生理鹽水。留針2min后拔針，縫合頭皮。上述操作均在無菌條件下進行。

2.1.2 動物分組和給藥方法 取模型制備成功的小鼠50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后隨機均分為5組：AD模型組、地黃健憶丸低、中、高劑量組(1.17g/kg、2.34g/kg、4.68g/kg)、復(fù)方活腦舒膠囊陽性對照組（0.195g/kg）。另取10只同樣方法操作但注射生理鹽水的小鼠作為假手術(shù)組。假手術(shù)組及模型組均給予等體積生理鹽水。各組均給藥20天。

2.1.3 小鼠水迷宮潛伏期測定 給藥第10天，開始手術(shù)造模。術(shù)后第3天進行小鼠學(xué)習(xí)訓(xùn)練（訓(xùn)練方法：小鼠由固定位置入水后，觀察其在300s內(nèi)找到出口到達平臺的時間即潛伏期，若小鼠不能在300s內(nèi)到達平臺，則由實驗人員引領(lǐng)其到達。實驗學(xué)習(xí)及測試過程保持室內(nèi)安靜，周圍實驗人員及物體位置固定不變），每天1次，每次300s，連續(xù)2天。術(shù)后第6天測定小鼠學(xué)習(xí)情況，記錄每只鼠的潛伏期，作為小鼠記憶學(xué)習(xí)成績。

2.2 地黃健憶丸對AD模型小鼠避暗箱潛伏期的影響

模型制備、動物分組及給藥方法同上。給藥第10天，開始手術(shù)造模。術(shù)后第7天進行小鼠避暗箱測試訓(xùn)練。每日1次，連續(xù)2天，每次180s。訓(xùn)練及測試過程保持室內(nèi)安靜，周圍實驗人員及物體位置固定不變。術(shù)后第9天測定小鼠學(xué)習(xí)情況，記錄每只鼠第一次進入暗箱時間即潛伏期及180s內(nèi)的錯誤次數(shù)，作為學(xué)習(xí)記憶成績。

2.3 地黃健憶丸對AD模型小鼠腦組織SOD、MDA含量的影響

腦組織SOD含量測定：做完暗箱實驗和水迷宮各實驗組小鼠斷頭，冰盤上取腦，棄去嗅球和小腦，稱量左側(cè)皮質(zhì)腦組織100 mg左右，用預(yù)冷的生理鹽水制成1%勻漿，3 000 r/min，離心10 min，取上清液，測定方法按照試劑盒說明書。

腦組織MDA含量測定：取材同上，制成10%勻漿，3 000 r/min，離心10 min，取上清液，測定方法按照試劑盒說明書。

2.4統(tǒng)計分析

3 實驗結(jié)果

3.1 地黃健憶丸對AD模型小鼠水迷宮潛伏期、避暗箱潛伏期的影響

結(jié)果見表1。

表1 地黃健憶丸對AD模型小鼠水迷宮潛伏期、避暗箱潛伏期及錯誤次數(shù)的影響（）

表1 地黃健憶丸對AD模型小鼠水迷宮潛伏期、避暗箱潛伏期及錯誤次數(shù)的影響（）

與模型組比較，*p＜0.05,**p＜0.01 與假手術(shù)組比較，▲p＜0.05, ▲▲p＜0.01

水迷宮潛伏期（s） 避暗箱錯誤次數(shù) 潛伏期（s）假手術(shù)組 10 等體積 86±43.13 2.0±2.79 184.8±99.42模型組 10 等體積 146.3±39.4▲▲ 6.0±2.85▲ 85.3±31.13▲▲高劑量組 10 4.68 85.3±39.51** 3.5±2.38* 133.0±64.06*中劑量組 10 2.34 90±47.99** 4.3±4.52 138.6±65.72*低劑量組 10 1.17 104.3±48.7 4.0±3.21 125.1±55.08陽對組 10 0.195 81.1±37.94** 2.8±2.99* 142.1±73.89*組別 只數(shù)(n)劑量(g/kg)

由上表可見，與假手術(shù)組比較，模型組避暗箱錯誤次數(shù)及潛伏期及水迷宮潛伏期均明顯增高，差異具有顯著性意義（P＜0.05），說明AD模型制備成功；與模型組比較，各給藥組避暗箱錯誤次數(shù)均有所降低，高劑量組、陽對組與模型組比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組避暗箱潛伏期均有所增加，高、中劑量組、陽對組與模型組比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組水迷宮潛伏期均有所降低，高、中劑量組、陽對組與模型組比較差異具有極顯著性意義（P＜0.01）。說明地黃健憶丸對AD模型小鼠被動回避條件反射記憶功能及空間記憶功能具有一定改善作用。

3.2 地黃健憶丸對AD模型小鼠腦組織SOD活性的影響

結(jié)果見表2

表2地黃健憶丸對AD模型小鼠腦組織MDA 、SOD活性的影響（ ±S）

由上表可見，與假手術(shù)組比較，模型組SOD顯著降低、MDA顯著增高，差異具有顯著性意義（P＜0.05），說明AD模型制備成功；與模型組比較，各給藥組SOD含量均有所升高、MDA含量均有所降低，但高劑量組、陽對組SOD含量與模型組比較差異有極顯著性意義（P＜0.01），中、低劑量組與模型組比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。MDA含量高、中、低劑量組、陽對組與模型組比較差異有極顯著性意義（P＜0.01）。

4 討論

老年癡呆是一種以高級認知功能障礙為特征的神經(jīng)退行性病變，主要病理基礎(chǔ)為廣泛的神經(jīng)元丟失、腦內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFT) 和老年斑(SP) 的出現(xiàn)。[3]以淀粉樣蛋白(Aβ) 為核心聚集和沉積而形成 SP 是其重要的發(fā)病機制，已有的證據(jù)充分表明Aβ在老年癡呆的發(fā)病過程中起到至關(guān)重要的起始及樞紐作用[4],因此本實驗采用小鼠腦內(nèi)注射Aβ25-35方法制備制備老年癡呆模型。

老年癡呆主要表現(xiàn)為記憶障礙或失語、失用、失認、執(zhí)行功能障礙等其中，記憶功能障礙嚴重影響患者的日常生活、職業(yè)活動和社交功能。[5]對老年癡呆記憶功能的改善將有利于改善此類患者的生活質(zhì)量。老年癡呆屬于中醫(yī)“癡呆”范疇。癡呆作為一種疾病，早在先秦時期就有類似記載。老年癡呆的發(fā)生雖然與五臟相關(guān)，但與腎的關(guān)系最為密切，腎精虧虛是老年癡呆發(fā)病的根本。[6]地黃健憶丸是在地黃飲子的基礎(chǔ)上加減而成具有補腎益精、健腦益智的功效,地黃健憶丸具有縮短水迷宮潛伏期、延長避暗箱潛伏期及減少錯誤次數(shù)的作用；給予該藥后模型動物腦組織SOD活力增高、MDA含量降低，本研究證明了地黃健憶丸具有改善癡呆模型腦組織損傷改善其記憶功能的療效。

綜上，在老年癡呆的發(fā)病機制中Aβ毒性在其發(fā)病中占有重要作用，為此本研究以此發(fā)病機制的老年癡呆模型為基礎(chǔ)，經(jīng)過研究確證了地黃健憶丸改善模型動物的學(xué)習(xí)記憶能力，且該作用與藥物自身抗氧化作用有相關(guān)性。然而地黃健憶丸為中藥制劑成分復(fù)雜性，其防治老年癡呆的機制有待進一步研究。

[1] 雷婷.馬亞娜.探討老年癡呆疾病經(jīng)濟負擔的評價方法,現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué) [J].2010（38）18：3491-3493.

[2] 王紅梅，宋彩梅，劉新民等.六味地黃丸對腎虛型老年癡呆動物模型的改善作用,中國實驗方劑學(xué)雜志[J].2012（18）5：112-116.

[3] 吳建明，馬娜，張鴻程等.舒肝解郁膠囊對老年癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用.中國實驗方劑學(xué)雜志[J].2015（21）1：126-129.

[4] 肖增平,吉愛國. 老年癡呆的發(fā)病機制及治療的研究進展,中國老年學(xué)雜志[J], 2008（28）1：95-97.

[5] 盛樹力.老年性癡呆的治療和護理[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻出版社，2000：17.

[6] 胡永年,周嵐.老年癡呆基本病機的理論探討.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志 [J], 2005（11）11：805-807.