肉豆蔻及炮制品醇提取物的抗氧化作用

袁子民，劉 歡，賈天柱，王 靜

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600）

肉豆蔻及炮制品醇提取物的抗氧化作用

袁子民，劉 歡，賈天柱，王 靜*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600）

目的 研究肉豆蔻及炮制品（麩煨、面煨）醇提物的體外抗氧化作用。方法 采用肉豆蔻及炮制品90%乙醇的提取液，測定對羥自由基（?OH）的清除率，對超氧陰離子（O2-?）的清除率。結(jié)果 肉豆蔻及其炮制品醇提液對?OH、O2-?清除能力不同，其清除能力均為肉豆蔻＞面煨肉豆蔻＞麩煨肉豆蔻。結(jié)論 肉豆蔻及其炮制品的醇提物均具有抗氧化能力，但炮制后抗氧化作用降低。

肉豆蔻；炮制品；抗氧化作用

肉豆蔻收載于《中國藥典》2010年版，為肉豆蔻科植物肉豆蔻 myristica fragrans houtt.的干燥成熟種仁，具有溫中行氣，澀腸止瀉功效。其炮制后具有減毒增效作用［1］。主要含有揮發(fā)油、脂肪油、木脂素和苯丙素等化學(xué)成分［2］，以往對肉豆蔻的抗氧化作用研究主要以揮發(fā)油為研究對象，本實驗主要以肉豆蔻及炮制品的乙醇提取物為研究對象，對其炮制前后抗氧化作用進(jìn)行研究，為肉豆蔻的藥理作用、炮制機(jī)制及相關(guān)的提取工藝的研究提供科學(xué)依據(jù)［3-4］。

1 儀器與試藥

U-3010紫外可見分光光度計（日本日立公司），SG3300H超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司），AR2140型電子分析天平（上海奧豪斯公司），肉豆蔻（大連權(quán)健中藥飲片有限公司提供，產(chǎn)地廣東，批號140915）；麩煨肉豆蔻（按2010藥典一部方法炮制），面煨肉豆蔻（按2005版藥典一部方法炮制），乙醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）、硫酸亞鐵（沈陽試劑一廠）、水楊酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、H2O2（天津市津北精細(xì)化工有限公司）、鄰苯三酚（上海源葉生物科技有限公司）、鹽酸（丹東市勝利化工廠）、三（羥甲基）氨基甲烷Tris（中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司）、乙二胺四乙酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 肉豆蔻及其炮制品醇提液的制備 取肉豆蔻、麩煨肉豆蔻、面煨肉豆蔻粉末（過20目篩）1.0 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80 mL 90%乙醇，稱定重量，超聲（功率250 W，頻率30 KHz）處理30 min，放冷，再稱定重量，用90%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得肉豆蔻生品、麩煨品、面煨品提取液［5-6］。

2.2 抗氧化作用研究［7-14］

2.2.1 對羥自由基（?OH）清除率的測定 取2.1項下肉豆蔻及其炮制品醇提液 ，分別精密吸取50、100、150、200、250、300 μL，至5 mL量瓶中，加80%乙醇定容至刻度，即得相當(dāng)于含生藥0.125、0.25、0.375、0.5、0.625、0.8 mg／mL的系列樣品溶液。實驗采用Fenton法，依次向試管中加入蒸餾水1.0 mL，F(xiàn)eSO4（0.18 mmol／mL）溶液1.0 mL，水楊酸-乙醇（0.18 mmol／mL）溶液1.0 mL，H2O2（0.03%）溶液0.1 mL，震蕩混合，在510 nm下，測定吸光度A0；以1 mL樣品溶液代替1 mL蒸餾水，測得樣品的吸光度值A(chǔ)S；以0.1 mL蒸餾水代替0.1 mL H2O2，測得吸光度值A(chǔ)I；計算清除率，結(jié)果見表1。根據(jù)量效曲線計算IC50值。

表1 肉豆蔻及其炮制品醇提液對羥自由基的清除作用

由表1可知，肉豆蔻及其炮制品醇提液對羥基自由基有一定的清除作用，且抑制率隨濃度的增大而升高（P＜0.05）。肉豆蔻及其炮制品的半數(shù)抑制率（IC50）從小到大依次為肉豆蔻（0.37 mg／mL）、面煨肉豆蔻（0.47 mg／mL）、麩煨肉豆蔻（0.44 mg／mL）。結(jié)果表明肉豆蔻及其炮制品醇提液對羥基自由基清除能力不同，其順序為肉豆蔻＞面煨肉豆蔻＞麩煨肉豆蔻。

2.2.2 對超氧陰離子（O2-?）清除率的測定 取2.1項下肉豆蔻及其炮制品醇提液，分別精密吸取50、100、150、200、250、300 μL，至5 mL量瓶中，加80%乙醇定容至刻度 ，即得相當(dāng)于含生藥 0.125、0.25、0.375、0.5、0.625、0.8 mg／mL的系列樣品溶液。采用鄰苯三酚自氧化方法，依次向試管中加入Tris-HCl（0.1 mol／L）緩沖液4.5 mL，4.2 mL蒸餾水，混勻后在25℃的恒溫水浴鍋中保溫20 min后，立即加入在25℃的恒溫水浴鍋中保溫的鄰苯三酚（3 mmol／L）溶液0.3 mL，在325 nm下每隔0.5 min測定吸光度值A(chǔ)0，測定3 min。以1 mL樣品溶液代替1 mL蒸餾水，測得樣品的吸光度值A(chǔ)S，計算吸光度的平均增值，記為Ai。計算清除率 ，結(jié)果見表2。根據(jù)量效曲線計算IC50值。

表2 肉豆蔻及其炮制品醇提液對氧自由基的清除作用

由表2可知，肉豆蔻及其炮制品醇提液對氧基自由基有一定的清除作用，且抑制率隨濃度的增大而升高（P＜0.05）。肉豆蔻及其炮制品的半數(shù)抑制率（IC50）從小到大依次為肉豆蔻（0.63 mg／mL）、面煨肉豆蔻（0.78 mg／mL）、麩煨肉豆蔻（0.72 mg／mL），結(jié)果表明肉豆蔻及其炮制品醇提液對氧基自由基清除能力不同，其順序為肉豆蔻＞面煨肉豆蔻＞麩煨肉豆蔻。

3 結(jié)語

肉豆蔻及炮制品通過對羥自由基和氧自由基清除作用的研究表明，其乙醇提取物均具有抗氧化作用，可有效地清除和抑制自由基，但經(jīng)炮制后的面煨炮制品、麩煨炮制品抗氧化作用減弱，可能與炮制后揮發(fā)油、木脂素類成分含量降低有關(guān)［15］，麩煨肉豆蔻與面煨肉豆蔻間無統(tǒng)計學(xué)意義。

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Antioxidation of ethanol extract of Nutmeg and processed products

YUAN Zimin，LIU Huan，JIA Tianzhu，WANG Jing*
（Liaoning University of TCM，Dalian 116600，Liaoning Province，China）

Objective To study antioxidant activities in vitro of ethanol extracts of Nutmeg and its processed products（roasted with flour，roasted with bran）．Methods The clearance rates of superoxide anion（O2-?）and hydroxyl radical（?OH）were determined in the 90%ethanol extracts of Nutmeg and the processed ones．Results Their scavenging abilities of?OH and O2-?were different，The scavenging ability followed as：Nutmeg＞Nutmeg roasted with wheat flour＞Nutmeg roasted with wheat bran．Conclusion The ethanol extracts of Nutmeg and the processed ones had antioxidant ability，but Nutmeg after processing reduced the antioxidant effect．

Nutmeg；processed products；antioxidation

R284.2

A

2095-6258（2015）05-0930-03

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．05．017

2015-05-05）

國家自然科學(xué)基金項目（81274084）。

袁子民（1975-），男，博士，副教授，主要從事中藥炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

*通信作者：王 靜，電話-（0411）85890139，電子信箱-wjyuanmeng＠163．com