部分規(guī)模化豬場種豬豬瘟抗體監(jiān)測及免疫效果分析

顧冬花（青海省大通縣樺林畜牧獸醫(yī)站810100）

部分規(guī)?；i場種豬豬瘟抗體監(jiān)測及免疫效果分析

顧冬花（青海省大通縣樺林畜牧獸醫(yī)站810100）

為了解規(guī)模豬場種豬群豬瘟免疫抗體情況，評價豬瘟疫苗加強(qiáng)免疫的效果，對6個規(guī)模豬場的種豬群進(jìn)行了豬瘟抗體檢測、補(bǔ)苗、再檢測。結(jié)果表明種豬群通過科學(xué)的增加豬瘟疫苗接種能明顯提升豬瘟抗體水平。但6個豬場的種豬群中均有少數(shù)種豬通過加免接種疫苗仍不能產(chǎn)生較好的豬瘟抗體，不具備對豬瘟病毒的抵抗能力，規(guī)模豬場應(yīng)該對這些種豬進(jìn)行淘汰，減少豬瘟病毒在豬場傳播的可能性。

豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬一種急性、烈性、接觸性傳染病，主要通過呼吸道和消化道傳染，臨床上以稽留高熱、皮膚和黏膜出現(xiàn)大量出血點為主要特征。豬瘟被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的動物疫病，我國列為一類動物疫病，也是目前危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。多年來，我國一直采取預(yù)防為主的方針，大大降低了豬瘟的感染率和發(fā)病率。但隨著集約化程度的提高和養(yǎng)豬規(guī)模的擴(kuò)大，在疫苗接種范圍越來越大、防疫密度越來越高、接種劑量越來越大的情況下，該病出現(xiàn)了隱性感染、胎盤感染、新生仔豬先天性感染等形式。研究發(fā)現(xiàn)，豬場帶毒豬持續(xù)排毒，是豬瘟在豬場持續(xù)發(fā)生的根源[1～4]。另外，免疫抑制性因素，如豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒(PCV-2)及日糧中霉菌毒素等，也會嚴(yán)重?fù)p害豬的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫失敗[5]。研究表明，受PRRSV感染的無特定病原(SPF)的豬接種豬瘟疫苗，豬瘟抗體水平明顯低于無感染PRRSV的對照豬[6,7]。為了解規(guī)模豬場種豬群豬瘟抗體情況，確保豬瘟疫苗免疫效果，選取6個不同規(guī)模豬場的種豬，逐頭采血，分離血清，由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的豬瘟正向間接血凝試驗抗體檢測試劑盒測定抗體水平，對豬瘟抗體不合格的種豬加強(qiáng)接種1次豬瘟疫苗，3周后再檢測豬瘟抗體，對第2次豬瘟抗體檢測不合格的種豬進(jìn)行淘汰，實行豬場豬瘟凈化計劃。

1　材料與方法

1.1血清來源與數(shù)量采集6個不同規(guī)模豬場(編號1-6)種豬血樣共158份，按常規(guī)方法分離血清并置-20℃冰箱保存，待測。

1.2檢測試劑與儀器豬瘟正向間接血凝診斷抗原，陽性、陰性血清，稀釋液，均在有效期內(nèi)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。單多道移液器、生化培養(yǎng)箱、離心機(jī)、振蕩器。

1.3操作步驟與判定標(biāo)準(zhǔn)檢測方法采用正向間接血凝試驗，根據(jù)《豬瘟診斷技術(shù)規(guī)程》(NY/SY156-2000)操作。待檢血清放在59℃水浴鍋中滅能30min；豬瘟抗體檢測試劑盒恢復(fù)到室溫，在96孔血凝板(110V型)中每孔加入50μl稀釋液；取50μl滅能待檢血清、陽性血清、陰性血清分別加入第1孔作1:1稀釋后，混勻3～4次，吸出50μl加入第2孔再混勻3～4次，依次倍比稀釋至11孔，然后吸出50μl棄去。稀釋液對照孔不加樣；然后各孔均加25μl血凝抗原，振蕩混勻，蓋上玻板，室溫或37℃下靜置1.5～2.0h后觀察結(jié)果。

1.4結(jié)果判定在對照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，記錄各孔凝集情況，用“-、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”表示。以呈現(xiàn)＋＋血凝反應(yīng)的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價。當(dāng)陽性血清抗體效價≥1:256、陰性血清抗體效價≤1:16、稀釋液對照孔無自凝現(xiàn)象時，試驗成立。接種口蹄疫O型疫苗的豬免疫抗體效價≥1：128為免疫合格。

1.5加強(qiáng)免疫試驗對豬瘟抗體檢測不合格的所有種豬，避免所有人為因素的情況下，加強(qiáng)注射1次豬瘟疫苗，3周后采血，按常規(guī)方法分離血清，用同樣的方法再次檢測豬瘟抗體。

2　結(jié)果與分析

2.1不同規(guī)模豬場種豬群豬瘟抗體結(jié)果見表1。

表1　不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表1結(jié)果顯示，6個規(guī)?；i場種豬的豬瘟抗體合格率各不相同，但均高于70% 。其中1場的種豬豬瘟抗體合格率最高(85.42%)，5場的最低(72.22%)，158份檢測樣本中，免疫抗體合格124份，不合格34份，抗體平均合格率為78.48% ，抗體平均不合格率為21.51%，1、2、3、4場的種豬豬瘟抗體合格率均高于78.48%，5、6場的種豬豬瘟抗體合格率低于平均合格率。這表明，不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體的整齊度存在差異。對豬瘟抗體不合格種豬加強(qiáng)免疫后再次進(jìn)行抗體檢測，檢測結(jié)果見表2。

2.2豬瘟抗體不合格種豬加強(qiáng)免疫后豬瘟抗體

表2　豬瘟抗體不合格種豬加強(qiáng)免疫后豬瘟抗體檢測結(jié)果

表2結(jié)果顯示，豬瘟抗體不合格種豬加強(qiáng)免疫后各場種豬豬瘟抗體合格率均有不同程度的上升，1～6場的合格率分別上升了6.25個百分點、6.67個百分點、12個百分點、4.55個百分點、11.11個百分點、6.67個百分點。加強(qiáng)免疫后，免疫抗體合格140份，不合格18份，平均合格率為88.60%，平均不合格率為11.39%，平均合格率上升了10.12個百分點，平均不合格率下降了10.12個百分點。其中以3場抗體合格率上升幅度最大，上升了12個百分點。結(jié)果說明，規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體合格率不高存在多方面的原因，通過加強(qiáng)免疫可以適當(dāng)提高規(guī)?；B(yǎng)殖場豬瘟抗體的合格率，為科學(xué)合理的制定豬場種豬淘汰計劃奠定了基礎(chǔ)。

3　討論

（1）到目前為止，加強(qiáng)免疫接種仍是對豬瘟預(yù)防與控制最有效的措施，而通過對免疫豬群進(jìn)行抗體水平監(jiān)測，及時掌握豬群免疫抗體水平，了解免疫狀況，對控制疫病起著至關(guān)重要的作用。此次調(diào)查采用正向間接血凝試驗，檢測規(guī)模豬場種豬豬瘟免疫后能否產(chǎn)生抗體或抗體滴度能否達(dá)到免疫保護(hù)，以及加強(qiáng)免疫后豬瘟抗體的變化情況，從檢測結(jié)果可以看出，不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體合格率均存在差異，說明規(guī)?；i場的豬瘟抗體相對不太穩(wěn)定，抗體滴度高低不齊，經(jīng)加強(qiáng)免疫可以適當(dāng)提高規(guī)?；i場豬瘟抗體的合格率。（2）規(guī)?；i場的穩(wěn)定生產(chǎn)與持續(xù)發(fā)展是以種豬的健康穩(wěn)定為前提，豬場種豬豬瘟控制的好壞直接關(guān)系到整個豬群的健康狀況。種豬群攜帶豬瘟病毒或機(jī)體免疫受到抑制，豬瘟抗體水平低下，會造成仔豬先天性感染豬瘟或新生仔豬得不到母源抗體的充分保護(hù)，很容易感染包括豬瘟在內(nèi)的各種病原，成為豬場的隱患[1]。免疫注射操作方法不規(guī)范、劑量不足等，也會直接影響豬瘟疫苗的免疫效果。因此，在臨床上，通過嚴(yán)格檢測每一頭種豬的豬瘟抗體水平，評估其豬瘟免疫保護(hù)力。淘汰加強(qiáng)免疫后豬瘟抗體水平不合格的種豬，從源頭上降低豬瘟感染風(fēng)險，是預(yù)防、控制、消滅、凈化豬瘟最有效的手段之一。（3）免疫抗體檢測是科學(xué)掌握疫苗免疫接種后抗體產(chǎn)生和消長變化的有效方法之一[9]。通過此次檢測、補(bǔ)苗、再檢測的過程分析豬場種豬豬瘟抗體不合格的原因可能有：①疫苗免疫操作不當(dāng)存在打“飛針”現(xiàn)象，造成抗原量不足以誘導(dǎo)豬體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)[6]；②疫苗質(zhì)量和冷鏈存在問題，疫苗保存、運輸不當(dāng)造成疫苗質(zhì)量受到影響，抗原性能降低[8]；③某些豬體本身免疫功能差，存在免疫抑制性疾病(如混合感染PRRSV、PRV、PCV或飼喂發(fā)霉飼料等)或豬在免疫接種前后曾使用黃胺類等免疫抑制藥物[4]，造成豬體免疫功能受損而失去對疫苗的免疫應(yīng)答能力[7]；④疫苗免疫沒有根據(jù)豬只大小選擇合適的針頭，大豬使用短針頭將疫苗注入脂肪疫苗未產(chǎn)生免疫應(yīng)答；⑤重視程度不夠，對疫病的危害程度認(rèn)識不夠深刻，思想上沒有引起足夠的重視。再加上防疫管理中的失誤，造成種豬漏防，成為免疫空白豬。為了排除人為和疫苗自身的因素，針對首次檢測豬瘟抗體不合格的所有種豬，加強(qiáng)接種1次豬瘟疫苗再檢測，結(jié)果顯示不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體合格率均有不同程度的提高，但每個豬場仍存在一定比例的豬瘟抗體不合格的種豬，認(rèn)為可能屬于種豬自身因素(豬瘟帶毒或免疫抑制)。由于免疫受抑制的種豬，本身沒有足夠的豬瘟抗體，母乳中的母源抗體不足以保護(hù)其后代，新生仔豬免疫保護(hù)不足而成為易感豬。所以應(yīng)淘汰豬瘟抗體不合格種豬，才能保證整個豬群的健康。

3　對策

在日常生產(chǎn)中經(jīng)常開展種豬豬瘟抗體檢測，摸清種豬群抗體水平狀況，分析原因，采取相應(yīng)措施：（1）加強(qiáng)免疫管理，適時免疫接種，防止種豬漏防，在防疫注射時注意種豬的保定，注射部位要準(zhǔn)確，確保免疫劑量。（2）強(qiáng)化疫苗的冷鏈運輸及保存，做好疫苗冷藏，稀釋后分不同氣溫不同要求在規(guī)定時間內(nèi)用完。（3）及時淘汰機(jī)體免疫功能有缺陷的種豬，特別是多次免疫仍達(dá)不到免疫要求的種豬，可借鑒湯薇等[10]對低抗體水平母豬的淘汰方法，以消滅傳染源。（4）強(qiáng)化消毒，凈化環(huán)境，做好引進(jìn)種豬的隔離、檢測和補(bǔ)防工作，防止外來疫源傳入。總之從源頭抓起，及時補(bǔ)免，將疫苗接種與免疫監(jiān)測有機(jī)結(jié)合起來，以免疫監(jiān)測制定合理的免疫程序[4]，達(dá)到最佳免疫效果，及時淘汰不合格種豬，確保整個豬群的健康。

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