血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1水平與肺結(jié)核活動(dòng)性的關(guān)系

姜君

（宜昌市第三人民醫(yī)院，湖北 宜昌 443000）

結(jié)核病主要免疫保護(hù)機(jī)制是細(xì)胞免疫，在結(jié)核病中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF－β1）能夠抑制T 細(xì)胞的反應(yīng)，也能使巨噬細(xì)胞失活，可能是結(jié)核病免疫發(fā)病中的一個(gè)關(guān)鍵因素［1］。為此，我們對(duì)726例患者TGF－β1濃度水平進(jìn)行測(cè)定，探討其濃度水平與肺結(jié)核活動(dòng)性的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年5月至2014年3月在我院門(mén)診或住院診療的患者共726例，分為活動(dòng)性肺結(jié)核組（活動(dòng)組）、非活動(dòng)性肺結(jié)核組（非活動(dòng)組）、肺炎組及健康志愿者組，以健康志愿者為對(duì)照組。其中男379例，女347例，年齡18～77歲，平均45.5歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 活動(dòng)性肺結(jié)核組235例，按照肺部病灶范圍分為≥4 個(gè)肺野組92例，＜4 個(gè)肺野組143例，均符合活動(dòng)性結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)以中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》為依據(jù)。非活動(dòng)肺結(jié)核組為175例，入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）X 線檢查肺部?jī)H有鈣化、纖維化條索影或硬結(jié)灶，痰結(jié)核菌檢查陰性；（2）痰結(jié)核細(xì)菌學(xué)陽(yáng)性患者完成規(guī)定的療程后連續(xù)3次涂片結(jié)果陰性，其中2次在完成治療時(shí)；（3）痰結(jié)核菌檢查陰性患者抗結(jié)核治療＞6個(gè)月，終端治療＞2個(gè)月后，X 線檢查肺部結(jié)核病灶病變較上次無(wú)增多。肺炎組153例，均符合肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。健康志愿者163例為對(duì)照組。所有病例均履行了告知義務(wù)，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署了知情同意書(shū)。

1.3 方法（1）標(biāo)本采集：入選病例1周內(nèi)抽取外周靜脈血做細(xì)胞因子測(cè)定。外周血2mL 收集在非抗凝無(wú)菌試管，以每分鐘3 000 轉(zhuǎn)離心10 min后，留取血清儲(chǔ)存在－30 ℃冰箱，等待測(cè)定。（2）細(xì)胞因子檢測(cè)：γ－干擾素（IFN－γ）及腫瘤壞死因子－α（TNF－α）檢測(cè)試劑盒均由上海西唐生物科技有限公司提供，采用ELISA 試劑盒測(cè)定，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行。TGF－β1檢測(cè)試劑盒采用美國(guó)RD Biosciences公司生產(chǎn)的試劑盒，測(cè)定血清標(biāo)本中人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1濃度水平。用純化的人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1，再與HRP標(biāo)記的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體結(jié)合，形成抗體－抗原－酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)算ROC曲線下面積（AUC），采用SPSS 16.0軟件處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組間血清細(xì)胞因子濃度水平比較 活動(dòng)組血清中TGF－β1濃度水平顯著高于非活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；顒?dòng)組IFN－γ 和TNF－α濃度水平分別低于非活動(dòng)組（P＜0.01）。活動(dòng)組血清中TGF－β1濃度水平與肺炎組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），IFN－γ和TNF－α濃度水平分別低于肺炎組（P＜0.01）?；顒?dòng)組血清中TGF－β1濃度水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），IFN－γ組和TNF－α組濃組度組水組平組分組別組低組于組肺組炎組（P＜0.01）。對(duì)照組、肺炎組及非活動(dòng)組血清TGFβ1、IFN－γ及TNF－α濃度水平組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

表1 各組血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，＊均P＜0.01；與肺炎組比較，＃均P＜0.05；與非活動(dòng)組比較，▲P＜0.01。

2.2 活動(dòng)組內(nèi)細(xì)胞因子濃度水平比較 病灶范圍≥4個(gè)肺野組TGF－β1水平明顯高于病灶＜4個(gè)肺野組（P＜0.05）；病灶范圍≥4個(gè)肺野組TNF－α和IFN－γ水平與病灶＜4個(gè)肺野組分別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 活動(dòng)組中不同病灶范圍TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

表2 活動(dòng)組中不同病灶范圍TGF－β1、IFN－γ及TNF－α濃度水平比較（±s）

2.3 活動(dòng)組與非活動(dòng)組細(xì)胞因子的相關(guān)性 活動(dòng)組中TGF－β1與TNF－α、IFN－γ水平有顯著負(fù)相關(guān)（r值分別為－0.815和－0.823，均P＜0.05）。非活動(dòng)組血清中TGF－β1 與TNF－α和IFN－γ水平有顯著負(fù)相關(guān)（r值分別為－0.762和－0.889，均P＜0.05）。兩組中TNF－α與IFN－γ水平比較無(wú)明顯相關(guān)性（r值分別為0.229和0.102，均P＞0.05）。

2.4 TGF－β1 濃度水平與肺結(jié)核活動(dòng)性關(guān)系分析采用ROC 計(jì)算AUC 0.873，篩選血清TGF－β1濃度判定肺結(jié)核活動(dòng)性的敏感度及特異度交點(diǎn)最大值（Q 值）為0.86，結(jié)果組顯組示TGF－β1組濃組度組值34.21ng／mL組作為最佳截值，敏感性及特異性分別為85.4%和91.2%，TGF－β1濃度水平與活動(dòng)性的判定呈高度相關(guān)一致性。

3 討論

肺結(jié)核病由于其痰菌陽(yáng)性率低、臨床癥狀及X影像學(xué)缺乏特異性等特點(diǎn)，肺結(jié)核活動(dòng)性的判定常是困擾臨床的一個(gè)難題。結(jié)核病主要是由T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，TGF－β1 作為一種免疫抑制因子具有抑制T 淋巴細(xì)胞的增殖及其功能，TGFβ1可能通過(guò)Fas／FasL系統(tǒng)增強(qiáng)結(jié)核病T 細(xì)胞的凋亡，并調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的凋亡［3］，TGF－β1可以促進(jìn)結(jié)核分支桿菌的胞內(nèi)生長(zhǎng)，因此認(rèn)為T(mén)GF－β1 可影響著結(jié)核病的活動(dòng)性變化。與之相反，IFN－γ和TNF－α能夠適度增加人單核巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分支桿菌活性，這些細(xì)胞因子在結(jié)核患者體內(nèi)能成功地抑制結(jié)核分支桿菌復(fù)制。本文通過(guò)對(duì)4組血清TGF－β1、TNF－α和IFN－γ濃度水平分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示血清TGF－β1水平活動(dòng)組明顯高于非活動(dòng)組、肺炎組及對(duì)照組，而活動(dòng)組的TNF－α和IFN－γ水平低于其他組，可能與活動(dòng)性肺結(jié)核患者體內(nèi)過(guò)量表達(dá)的TGF－β1 抑制T 細(xì)胞免疫應(yīng)答有關(guān)，與TGF－β1下調(diào)了IFN－γ、TNF－α的產(chǎn)量和活性有關(guān)。國(guó)外也有研究［4－5］報(bào)道其在結(jié)核病患者血清中表達(dá)升高，升高的TGF－β1 與結(jié)核病活動(dòng)有密切關(guān)系。本文還發(fā)現(xiàn)肺部病灶范圍≥4 個(gè)肺野組的血清TGF－β1水平明顯高于肺部病灶＜4個(gè)肺野組，分析可能為過(guò)量的TGF－β1不僅可以引起結(jié)核分支桿菌感染的慢性過(guò)程，而且可以導(dǎo)致廣泛組織破壞、空洞形成和纖維化的結(jié)核病病變特征，TGF－β1 作為結(jié)核病免疫功能損害的指標(biāo)，其水平越高，免疫損害越重。本組結(jié)果還顯示肺結(jié)核活動(dòng)性與TGF－β1濃度水平間存在正相關(guān)，可能與結(jié)核分支桿菌及其有效成分可以刺激單核巨噬細(xì)胞過(guò)量表達(dá)TGF－β1 有關(guān)，血清TGF－β1濃度水平與活動(dòng)性的判定呈高度相關(guān)一致性，對(duì)肺結(jié)核活動(dòng)性的分析判斷有一定的價(jià)值，且實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

［1］劉萍，張麗，龐楠楠，等.血清IEN－γ、TGF－β1、IL－10檢測(cè)對(duì)兒童潛伏性結(jié)核感染的診斷價(jià)值［J］.中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2011，6（9）：650－651.

［2］中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì).社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2006，29（10）：478－450.

［3］孫志平，劉建輝，呂翠環(huán)，等.糖尿病合并肺結(jié)核患者的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)組因組子β1組與Fas／FasL組系組統(tǒng)組檢組測(cè)［J］.河組北組醫(yī)藥，2010，32（6）：649－651.

［4］Taype CA，Shamsuzzaman S，Accinelli RA，et al.Genetic susceptibility to different clinical forms of tuberculosis in the Peruvian population［J］.J Infect Genet Evl，2010，10（4）：495－504.

［5］Ross－Taraco AG，Higgins DM，Sdnchez－Campillo J，et al.I.ocal pulmonary immunotherapy with siRNA targeting TGF 171enhances antimicrobial capacity in Mvcobacterium tuberulosis infectedmice［J］.Tuberclosis（Edinb），2011，91（1）：98－106.