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    低氧條件下鐵調(diào)節(jié)蛋白1在維持SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)中的作用

    2015-11-21 02:03:50郁敏燕
    關(guān)鍵詞:總鐵鐵蛋白低氧

    郁敏燕,王 丹,朱 俐

    (1.南通大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,江蘇南通226001;2.南通大學(xué)航海醫(yī)學(xué)研究所,江蘇南通226001)

    低氧條件下鐵調(diào)節(jié)蛋白1在維持SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)中的作用

    郁敏燕1,2,王 丹2,朱 俐2

    (1.南通大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,江蘇南通226001;2.南通大學(xué)航海醫(yī)學(xué)研究所,江蘇南通226001)

    目的:研究低氧條件下鐵調(diào)節(jié)蛋白1(iron regu1atory protein 1,IRP1)對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響。方法:1%O2處理SH-SY5Y細(xì)胞0,1,2,4,6 h,蛋白質(zhì)印跡法檢測鐵蛋白輕鏈(ferritin 1ight chain,F(xiàn)t-L)以及膜鐵輸出蛋白(ferroportin,F(xiàn)pn)的表達(dá);Ca1cein-AM法檢測SH-SY5Y細(xì)胞對Fe2+的吸收以及細(xì)胞可變鐵池(1abi1e iron poo1,LIP);采用硫氰酸鹽分光光度法測定細(xì)胞總含鐵量;特異性siRNA下調(diào)IRP1后檢測SH-SY5Y細(xì)胞低氧2 h鐵穩(wěn)態(tài)的變化。結(jié)果:低氧0~6 h,SH-SY5Y細(xì)胞Ft-L和Fpn表達(dá)增加,F(xiàn)e2+攝入和LIP增加,但細(xì)胞總鐵水平不變。siRNA下調(diào)IRP1表達(dá)后再低氧2 h,F(xiàn)t-L蛋白表達(dá)和LIP明顯增加,F(xiàn)pn表達(dá)和Fe2+攝入沒有明顯變化,細(xì)胞總鐵水平增加。結(jié)論:低氧條件下,IRP1是SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)者。

    低氧;鐵調(diào)節(jié)蛋白1;鐵穩(wěn)態(tài);SH-SY5Y細(xì)胞;細(xì)胞可變鐵池

    鐵為生命活動(dòng)所必需,其缺乏會(huì)引起細(xì)胞生長停止和死亡,超載可誘發(fā)大量自由基的產(chǎn)生,引起神經(jīng)退行性病變和多種與老年相關(guān)的疾病。游離鐵通過Haber-Weiss或Fenton反應(yīng)與過氧化氫或脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)促進(jìn)活性氧簇的產(chǎn)生,導(dǎo)致脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的損傷[1]。細(xì)胞通過鐵調(diào)節(jié)蛋白(iron regu1atory proteins,IRPs,包括IRP1和IRP2)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機(jī)制,即與多種編碼鐵存儲(chǔ)、攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)和輸出的蛋白mRNA非翻譯區(qū)(untrans1ated regions,UTRs)的鐵反應(yīng)元件(iron responsive e1ements,IREs)結(jié)合,調(diào)節(jié)細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)[2-4]。

    在原核生物和真核生物中,鐵蛋白(ferritin,F(xiàn)t)是細(xì)胞內(nèi)主要的鐵存儲(chǔ)蛋白[5]。鐵蛋白通常由重鏈(Ft-H)和輕鏈(Ft-L)的24個(gè)亞基組成,F(xiàn)t-L促進(jìn)Fe2+沉積并穩(wěn)定鐵蛋白結(jié)構(gòu)[6]。IRPs通過與鐵蛋白mRNA 5′-UTRs的IREs結(jié)合抑制鐵蛋白翻譯,下調(diào)其表達(dá),增加細(xì)胞可變鐵池(1abi1e iron poo1,LIP)的Fe2+以供細(xì)胞代謝[7]。膜鐵輸出蛋白(ferroportin,F(xiàn)pn)是目前已知的唯一的細(xì)胞膜鐵輸出蛋白,在細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞和胎盤細(xì)胞)表面具有很強(qiáng)的鐵輸出能力,呈高表達(dá)[8]。Fpn的表達(dá)和功能可通過低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducib1e factor,HIF)受低氧調(diào)控,也可能受IRPs調(diào)控。

    機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)的維持除了需要多種蛋白的協(xié)調(diào)作用外,還有賴于適當(dāng)?shù)难豕┙o。研究表明,低氧應(yīng)激會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生一系列基因表達(dá)的變化,以適應(yīng)一定程度的低氧[9-10],減少其危害。HIF-1是低氧誘導(dǎo)基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子,對低氧適應(yīng)起關(guān)鍵性作用[11]。HIF-1是一個(gè)異源二聚體,包含兩個(gè)螺旋-環(huán)-螺旋蛋白,HIF-1a為調(diào)節(jié)亞基,是氧敏感元件;HIF-1β是已知的芳烴受體核轉(zhuǎn)位分子,呈組成型表達(dá)。常氧下,HIF-1通過泛素蛋白酶途徑降解。低氧時(shí),HIF-1a亞基在胞質(zhì)中集聚,通過核孔進(jìn)入胞核與HIF-1β亞基組裝成HIF-1,與靶基因的低氧反應(yīng)元件(hypoxia responsive e1ement,HRE)結(jié)合。我們前期研究發(fā)現(xiàn),在人肝癌HepG2細(xì)胞中,低氧通過HIF/HRE系統(tǒng)下調(diào)IRP1表達(dá),證明IRP1存在HRE[12],但低氧下IRP1自身的調(diào)控作用尚不清楚。

    研究顯示,阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病的基底神經(jīng)節(jié)等多個(gè)腦區(qū)鐵含量和鐵代謝相關(guān)蛋白明顯提高,提示神經(jīng)細(xì)胞的鐵含量增高和鐵沉積與神經(jīng)退行性疾病高度相關(guān)[13-14],腦鐵調(diào)節(jié)的失衡很可能是神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病原因之一[15-16]。但是對鐵代謝相關(guān)蛋白在神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá)調(diào)控了解不多,尤其對神經(jīng)細(xì)胞應(yīng)對低氧缺血的表達(dá)調(diào)控知之甚少。為此,本研究擬通過人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SHSY5Y細(xì)胞探討低氧對神經(jīng)細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響以及該過程中IRP1的作用,以了解低氧應(yīng)激對神經(jīng)細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響以及神經(jīng)細(xì)胞在適應(yīng)內(nèi)環(huán)境低氧時(shí)對自身鐵穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)過程。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞培養(yǎng)和低氧誘導(dǎo)

    人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞(購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫)用含10%胎牛血清的DMEM(Gibco公司),在37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)。低氧處理之前把含10%胎牛血清的DMEM換成無血清的培養(yǎng)基,置于InvivO2200低氧工作站(英國Ruskinn Techno1ogies公司),在37℃,5%CO2,1%O2條件下培養(yǎng)。

    1.2 蛋白質(zhì)印跡法檢測

    提取常氧組(低氧0 h)和低氧不同時(shí)間(1,2,4,6 h)組SH-SY5Y細(xì)胞總蛋白,BCA試劑盒(Pierce公司)行蛋白定量,上樣30 μg,行10%SDS-PAGE,轉(zhuǎn)至PVDF膜(Mi11ipore公司)。用含5%脫脂奶粉的TBST室溫封閉2 h,一抗HIF-1(1∶250,Novus Bio1ogica1s公司)、IRP1(1∶250,Santa Cruz公司)、Ft-L(1∶1 000,Abcam公司)、Fpn(1∶300,A1pha Diagnostic公司)、β-肌動(dòng)蛋白(1∶10 000,Sigma公司)孵育,4℃過夜,TBST洗3遍,然后二抗(1∶10 000,Jackson公司)室溫孵育2 h,TBST洗3遍。ECL(Pierce公司)化學(xué)發(fā)光顯色,X光片顯影、定影。膠片拍照,攝取圖像(美國UVP公司EC3 Imaging System),Quantity One分析軟件(Bio-Rad公司)對條帶行定量分析。

    1.3 siRNA干擾實(shí)驗(yàn)

    消化收集SH-SY5Y細(xì)胞,重懸浮于電轉(zhuǎn)液中,密度為2.5×107個(gè)/mL。將人IRP1 4個(gè)特異性siRNA序列加到200 μL電轉(zhuǎn)液中,含5×106個(gè)細(xì)胞,電穿孔轉(zhuǎn)染干擾片段。室溫靜置5 min,將電轉(zhuǎn)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含10%胎牛血清的DMEM中繼續(xù)培養(yǎng)48 h,檢測低氧2 h未干擾組(對照組)與干擾IRP1組(siIRP1組)Ft-L和Fpn,IRP1蛋白表達(dá)。

    siRNA序列如下。siRNA 1正義鏈:5′-UUUCACAACAUGCGGAUUAdtdt-3′,反義鏈:5′-UAAUCCGCAUGUUGUGAAAdtdt-3′;siRNA 2正義鏈:5′-AAAGAUAUCUGGCCGACUAdtdt-3′,反義鏈:5′-UAGUCGGCCAGAUAUCUUUdtdt-3′;siRNA 3正義鏈:5′-GGGCAAAUUUGUCGAGUUCdtdt-3′,反義鏈:5′-GAACUCGACAAAUUUGCCCdtdt-3′;siRNA 4正義鏈:5′-GGCCUAACUCCAUGAGAAUdtdt-3′,反義鏈:5′-AUUCUCGUGGAGUUAGGCCdtdt-3′。

    1.4 Fe2+吸收以及細(xì)胞LIP的測定

    常氧(低氧0 h)與低氧處理不同時(shí)間(2,4,6 h)以及低氧2 h條件下未干擾IRP1(對照組)與干擾IRP1(siIRP1組)的細(xì)胞分別用PBS洗3遍,收集(1~3)×106個(gè)細(xì)胞,懸于1 mL HBSS。將熒光劑Ca1cein-AM(終濃度為0.125 μmo1/L)與細(xì)胞懸液于37℃共孵育10 min。用PBS洗去胞外探針,用2 mL不含Ca1cein-AM的HBSS重懸細(xì)胞,輕輕吹勻,細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入帶有微型磁力攪拌子的比色皿中,用熒光分光光度計(jì)(Shimadzu公司)檢測Ca1cein-AM的熒光(激發(fā)波長:488 nm,發(fā)射波長:518 nm),記錄熒光基線值[17]。測定細(xì)胞對Fe2+的吸收時(shí),當(dāng)基線走平后,加入終濃度為40 μmo1/L硫酸亞鐵銨,淬滅熒光,每隔5 min檢測1個(gè)熒光值并記錄,共30 min。測細(xì)胞LIP量時(shí),當(dāng)基線走平后,加入終濃度為500 μmo1/L去鐵酮,連續(xù)記錄熒光值1 000 s[18]。

    1.5 硫氰酸鹽分光光度法測定細(xì)胞總鐵含量

    消化、計(jì)數(shù)、收集常氧(低氧0 h)與低氧處理不同時(shí)間(2,4,6 h)以及低氧2 h條件下未干擾IRP1(對照組)與干擾IRP1(siIRP1組)的細(xì)胞,60℃烘干。加200 μL濃鹽酸60℃消化2 h,再加800 μL H2O2于60℃消化2 h。然后取75 μL樣品消化液至96孔板中,每孔加入75 μL染色液(0.08%K2S2O8,8%KSCN和3.6%HC1),室溫反應(yīng)10~15 min,于490 nm波長下測定D值[19]。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    應(yīng)用Sigma Stata 2.0統(tǒng)計(jì)軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,每組取3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)。采用單因素方差分析對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 短時(shí)程低氧條件下鐵穩(wěn)態(tài)的維持

    蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示,與常氧(低氧0 h)相比,低氧處理1,2,4,6 h后,F(xiàn)t-L和Fpn表達(dá)均呈時(shí)間依賴性增加(圖1)。

    *:P<0.05,與常氧組(低氧0 h)相比圖1 低氧對SH-SY5Y細(xì)胞Ft-L和Fpn蛋白表達(dá)的影響

    SH-SY5Y細(xì)胞低氧不同時(shí)間(2,4,6 h)后,細(xì)胞Fe2+攝入均較常氧增加,低氧2 h Fe2+攝入即達(dá)峰值,隨后逐漸減少(圖2A);與常氧(即低氧0 h)相比,低氧2 h LIP增加達(dá)最高峰,而后逐漸減少(圖2B);然而SH-SY5Y細(xì)胞總鐵水平基本不受短時(shí)程低氧的影響(圖3)。

    *:P<0.05,與常氧比較圖2 低氧對SH-SY5Y細(xì)胞Fe2+攝入和LIP的影響

    2.2 低氧條件下HIF-1和IRP1表達(dá)成相反趨勢

    結(jié)果如圖4顯示,不同低氧時(shí)間處理(1,2,4,6 h)后,SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)HIF-1蛋白表達(dá)量均明顯高于常氧組(低氧0 h),低氧2 h HIF-1表達(dá)達(dá)最高峰,約比常氧組高50%。

    IRP1蛋白表達(dá)先降后升,低氧2 h表達(dá)最低,約降低30%,隨著低氧時(shí)間的延長(4 h和6 h),IRP1蛋白表達(dá)逐漸上升。低氧6 h以內(nèi),HIF-1蛋白表達(dá)和IRP1蛋白表達(dá)呈相反趨勢,尤其低氧2 h,HIF-1蛋白表達(dá)最高而IRP1蛋白表達(dá)最低;由此表明,低氧2 h可能是細(xì)胞內(nèi)部分蛋白表達(dá)改變的一個(gè)重要拐點(diǎn)。

    2.3 下調(diào)IRP1表達(dá)影響低氧條件下細(xì)胞的鐵平衡RNA干擾組IRP1的蛋白表達(dá)較對照組降低約55%,表明siRNA能夠下調(diào)IRP1的表達(dá)。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)在低氧2 h的條件下,SH-SY5Y細(xì)胞干擾IRP1蛋白表達(dá)后,F(xiàn)t-L蛋白表達(dá)明顯增加了20%(P<0.05),而Fpn表達(dá)沒有明顯變化(P>0.05)。見圖5。

    圖3 低氧對SH-SY5Y細(xì)胞總鐵水平的影響

    *:P<0.05,與常氧組(低氧0 h)相比圖4 低氧下SH-SY5Y細(xì)胞HIF-1和IRP1的蛋白表達(dá)

    *:P<0.05,與對照組相比圖5 低氧2 h干擾IRP1對SH-SY5Y細(xì)胞Ft-L和Fpn蛋白表達(dá)的影響

    此外,下調(diào)IRP1表達(dá),低氧2 h對SH-SY5Y細(xì)胞Fe2+的攝入沒有影響,LIP明顯減少50%左右,見圖6;siIRP-1組細(xì)胞總鐵水平較對照組增加了20%(P<0.05,圖7)。

    3 討論

    研究證實(shí),在低氧6 h條件下,HepG2細(xì)胞總鐵和Fe2+水平較常氧條件下明顯增加[20]。本研究結(jié)果顯示,在低氧條件下,F(xiàn)t-L和Fpn水平呈時(shí)間依賴性增加。在組織缺氧和細(xì)胞低氧模型中,鐵蛋白的表達(dá)均會(huì)發(fā)生變化。進(jìn)行性低氧能誘導(dǎo)新生大鼠和人少突膠質(zhì)細(xì)胞中鐵蛋白合成[21-23]。低氧能增加SH-SY5Y細(xì)胞Fe2+攝入和LIP,這與鐵的吸收是LIP的主要來源相一致[24]。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)SH-SY5Y細(xì)胞低氧2 h Fe2+攝入比低氧4 h和6 h多,可能是由于Fe2+攝入是一個(gè)持續(xù)的動(dòng)態(tài)過程,胞內(nèi)鐵的積聚也隨時(shí)間推移越來越多,因而反饋性抑制Fe2+攝入和LIP。此外,持續(xù)的Fe2+攝入可導(dǎo)致Ft-L隔離的鐵增多,故Ft-L蛋白表達(dá)隨低氧時(shí)間延長而增加。此外,本研究中細(xì)胞Fpn水平逐漸增加,表明細(xì)胞鐵輸出也呈時(shí)間依賴性增多,以維持細(xì)胞的總鐵水平。因而,短時(shí)程(6 h)低氧條件下,SH-SY5Y細(xì)胞的鐵穩(wěn)態(tài)能保持穩(wěn)定。研究報(bào)道低氧能增加人肺泡巨噬細(xì)胞和A549細(xì)胞鐵蛋白的表達(dá)但細(xì)胞鐵含量保持不變[25],本研究結(jié)果與其類似。

    哺乳動(dòng)物細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)受IRPs轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)[1],在人大腦中主要是IRP1起作用[26]。我們前期研究表明,IRP1受低氧調(diào)節(jié),HepG2細(xì)胞物理或化學(xué)低氧6 h IRP1表達(dá)下調(diào)[12]。研究表明IRP1對低氧和再氧合的反應(yīng)呈細(xì)胞特異性[27]。本研究結(jié)果顯示,SH-SY5Y細(xì)胞低氧處理2 h,F(xiàn)e2+攝入和LIP增加最多,HIF-1a蛋白表達(dá)達(dá)峰值,IRP1蛋白表達(dá)達(dá)最低,提示1%低氧2 h對SH-SY5Y細(xì)胞的影響最明顯。故我們以低氧2 h為關(guān)鍵點(diǎn),研究IRP1對SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響。

    圖6 低氧2h,干擾IRP1對SH-SY5Y細(xì)胞Fe2+攝入和LIP的影響

    *:P<0.05,與對照組相比圖7 低氧2h干擾IRP1對SH-SY5Y細(xì)胞總鐵水平的影響

    雖然短時(shí)程(<6 h)低氧對SH-SY5Y細(xì)胞的總鐵水平?jīng)]有明顯影響,但改變了鐵的攝入、輸出和存儲(chǔ),由此推測正是通過IRP1對這些鐵代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控,參與了短時(shí)程低氧下SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的維持。下調(diào)SH-SY5Y細(xì)胞中IRP1表達(dá)后,低氧2 h條件下,F(xiàn)t-L表達(dá)增加,LIP明顯減少,推測細(xì)胞LIP因被鐵蛋白隔離的鐵增多而減少;Fe2+攝入沒有明顯變化,F(xiàn)pn表達(dá)也沒有變化即鐵外流沒有變化,但持續(xù)的Fe2+攝入可增加細(xì)胞總鐵含量,故細(xì)胞總鐵水平有明顯增加。提示低氧條件下,如果沒有足夠IRP1蛋白的參與,細(xì)胞鐵攝入、輸出和存儲(chǔ)的方式均會(huì)發(fā)生改變,從而影響細(xì)胞的鐵穩(wěn)態(tài)。但我們只用siRNA的方法研究了低氧條件下IRP1在維持細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)過程中的作用,IRP1對細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響及機(jī)制仍需作深入研究。低氧條件下細(xì)胞Fe2+攝入的增多提示可能有鐵吸收蛋白表達(dá)的增加。二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體(DMT1)和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR1)是兩種重要的鐵吸收蛋白,二者在低氧條件下都受HIF-1的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)[20],對鐵濃度改變的反應(yīng)也均受IRP1轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)[28]。在低氧條件下如何通過HIF-1/HRE和IRP1/IRE體系協(xié)同調(diào)節(jié)DMT1/ TfR1來影響鐵的吸收有待進(jìn)一步研究。

    細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)受IRP1和IRP2轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。當(dāng)氧含量豐富時(shí),IRP1與鐵代謝相關(guān)蛋白mRNAs的UTRs的IREs結(jié)合,調(diào)節(jié)鐵穩(wěn)態(tài),而IRP2經(jīng)蛋白酶體途徑被快速降解[29]。而低氧時(shí),IRP2是與IREs結(jié)合的主要蛋白,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定[30]。低氧條件下,IRP1表達(dá)下調(diào)對SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的影響可能是由于IRP2的代償性作用。由于IRP2也是主要的鐵調(diào)節(jié)蛋白,低氧條件下IRP2在維持細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)過程中的作用值得進(jìn)一步研究。

    綜上所述,短時(shí)程低氧(<6 h,1%O2)條件下,SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)保持穩(wěn)定。低氧2 h,當(dāng)IRP1下調(diào)后,由于細(xì)胞總鐵含量增加,SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變。故低氧條件下,IRP1在SH-SY5Y細(xì)胞鐵穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)過程中起重要作用。

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    Involvement of iron regulatory protein 1 in iron homeostasis under hypoxia in human neuroblastoma(SH-SY5Y)cells

    YU Min-yan1,2,WANG Dan2,ZHU Li2
    (1.Center for Reproductive Medicine,Affi1iated Hospita1 of Nantong University,Nantong Jiangsu 226001;2.Institute of Nautica1 Medicine,Nantong University,Nantong Jiangsu 226001,China)

    Objective:To investigate the effects of iron regu1atory protein 1(IRP1)on iron homeostasis in human neurob1astoma SH-SY5Y ce11s under hypoxia.Methods:The SH-SY5Y ce11s were exposed to hypoxia for 0,1,2,4,6 h(1%O2),and then the tota1 proteins were extracted to detect the expression of ferritin 1ight chain(Ft-L)and ferroportin(Fpn)by Western b1otting.Ca1cein-AM was used to measure ferrous iron uptake and 1abi1e iron poo1(LIP)in SH-SY5Y ce11s.Spectrophotometry was used to determine the tota1 ce11u1ar iron 1eve1 with thiocyanate.The effects of IRP1 siRNA on iron homeostasis in SH-SY5Y ce11s under hypoxia were detected.Results:Iron homeostasis remained unchanged when ce11s were exposed to 1%hypoxia for 0-6 h a1though the expression of Ft-L and Fpn increased,and the 1eve1 of ferrous iron uptake and LIP e1evated.When IRP1 was knocked down using IRP1-specific siRNA,the expression of Ft-L and LIP increased,whi1e Fpn and ferrous iron uptake did not a1tered obvious1y.The iron homeostasis in SH-SY5Y ce11s a1tered under 2 h hypoxia in terms of the ce11u1ar tota1 iron content increased.Conclusion:IRP1 regu1ated iron homeostasis in SH-SY5Y ce11s under hypoxia.

    hypoxia;iron regu1atory protein 1;iron homeostasis;SH-SY5Y ce11s;1abi1e iron poo1

    R392.2

    A

    1671-7783(2015)06-0466-06

    10.13312/j.issn.1671-7783.y150154

    2015-07-08 [編輯] 劉星星

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30971197,31171143,31471141)

    郁敏燕(1988—),女,研究實(shí)習(xí)員,碩士;朱俐(通訊作者),教授,博士生導(dǎo)師,E-mai1:zhu1i1i65@126.com

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