• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    肝臟活檢標本纖維化評估方法的研究進展

    2015-11-19 08:19:17趙川陳虹
    肝臟 2015年4期
    關(guān)鍵詞:胞外基質(zhì)膠原纖維化

    趙川 陳虹

    ·綜 述·

    肝臟活檢標本纖維化評估方法的研究進展

    趙川 陳虹

    肝纖維化(hepatic fibrosis)是肝臟對抗各種慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng),其實質(zhì)是肝組織中細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)過度沉積。長期慢性刺激使纖維化持續(xù)發(fā)展,最終可發(fā)展至肝硬化甚至肝癌,大大增加患者死亡率。病理診斷目前仍然是診斷肝纖維化的金標準,對肝纖維化進行確切地評估不僅有助于掌握疾病嚴重程度,而且對判斷疾病預(yù)后、評價治療效果都有不可替代的作用。目前臨床常用的肝纖維化分期的評估系統(tǒng)各具優(yōu)缺點,隨著非線性光學(xué)顯微技術(shù)發(fā)展,新的肝纖維化定量分析方法逐漸成熟。本篇文章概述了肝臟活檢標本纖維化評估方法研究的新進展。

    一、肝纖維化機制

    肝纖維化是肝臟各種慢性損傷因素導(dǎo)致的一種共同的病理結(jié)局,這些慢性損傷因素包括病毒、肝內(nèi)膽汁淤積、代謝異常、自身免疫失調(diào)、藥物及毒物等。肝纖維化實質(zhì)是細胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積,使正常的肝臟結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂,進而造成肝臟功能障礙及肝臟血流動力學(xué)異常。

    (一)細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生

    關(guān)于肝纖維化過程中ECM的細胞來源爭論已久,最近的研究表明慢性肝損傷中過度積累的ECM來源于多種細胞群,并認為肝臟纖維化細胞(肌成纖維細胞)在這一過程中起關(guān)鍵作用[1]。肌成纖維細胞(myofibroblasts,MFs)來源于肝星狀細胞(HSCs)、骨髓來源的肌成纖維細胞、匯管區(qū)成纖維細胞、膽管上皮細胞及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial mesenchymal transitions,EMT)[2,3]。不同病因所致纖維化具有不同的發(fā)病機制,因而參與纖維化的主要細胞也不盡相同。盡管有多種細胞成分可分化為MFs,但起核心作用的細胞仍然是HSCs[4]。

    研究發(fā)現(xiàn)HSCs起源于中胚層來源的多能間充質(zhì)干細胞(MMPC)[5]。正常情況下HSCs處于靜止狀態(tài),細胞中含有大量的維生素A和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。當肝臟受到慢性損傷因素刺激時,凋亡的肝細胞、庫普弗細胞、肝竇內(nèi)皮細胞、浸潤的炎細胞、淋巴細胞等分別通過不同機制激活HSCs[1]?;罨腍SCs釋放出維生素A及GFAP,同時具有了促纖維化、促炎性反應(yīng)、收縮性、驅(qū)化性、增殖性等特點;另外在各種因子刺激下HSCs可以向肌成纖維細胞分化,進而合成并分泌大量ECM參與肝纖維化的形成。

    (二)肝纖維化中的細胞外基質(zhì)

    1.細胞外基質(zhì)對纖維化的正反饋調(diào)節(jié)

    肝纖維化過程中產(chǎn)生的ECM的主要成分是纖維狀膠原蛋白,這些膠原蛋白使ECM成為基底膜樣而取代了正常的低密度基質(zhì)[6]。ECM還包括透明質(zhì)酸、纖連蛋白、蛋白多糖、彈性蛋白等成分。ECM成分能夠直接或間接與肝臟細胞相互作用,正反饋調(diào)節(jié)肝纖維化過程,包括:HSCs的激活、肝細胞微絨毛缺失、肝竇內(nèi)皮細胞窗孔消失、釋放細胞因子等,使肝臟在慢性損傷持續(xù)刺激下發(fā)生進行性纖維化[7]。

    正常情況下異常的細胞外基質(zhì)可被逐漸降解,這一過程依賴于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)之間的平衡。MMPs能促進ECM的降解,相反,TIMPs不僅抑制MMP對ECM的降解作用,并且抑制HSCs凋亡,促進ECM不斷積累[8]。當刺激因素持續(xù)存在時,ECM大量積累并且重塑異常,破壞肝臟內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,使MMPs活性降低而TIMPs活性增加,結(jié)果ECM降解減少,大量沉積于肝組織內(nèi)。

    2.細胞外基質(zhì)對肝臟結(jié)構(gòu)的影響

    在正常的肝組織中,細胞外基質(zhì)存在于肝竇內(nèi)皮下的Disse間隙中并形成基底膜樣結(jié)構(gòu),正常內(nèi)皮下基質(zhì)對維持肝臟內(nèi)各種細胞的不同功能至關(guān)重要。隨著肝纖維化的發(fā)展,ECM中膠原和非膠原成分可增加至正常的3~5倍,并由低密度型膠原轉(zhuǎn)變?yōu)楦呙芏刃湍z原,使肝竇毛細血管化、肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂、假小葉形成,造成肝臟內(nèi)血流動力紊亂和肝細胞物質(zhì)交換障礙[9]。

    二、組織病理學(xué)評估方法進展

    肝纖維化是慢性肝臟疾病的一個共同的病理改變。肝纖維化的程度是判斷慢性肝臟疾病進展程度和評價疾病治療效果最好的指標[10]。因此準確、客觀地分析肝臟纖維化程度無論對科學(xué)研究還是對臨床治療都至關(guān)重要[11]。雖然目前肝纖維化的非創(chuàng)傷性評估方法在臨床應(yīng)用增加,包括血清生化診斷、影像學(xué)診斷、非創(chuàng)傷性綜合指標的診斷模型等,但這些方法僅能定性評估是否存在肝纖維化,或區(qū)分輕度肝纖維化與重度肝纖維化,但不能準確的區(qū)別肝纖維化的各個階段。肝臟活檢仍然是監(jiān)測肝纖維化進展的金標準[12]。肝臟活檢組織纖維化評估方法經(jīng)過不斷改進,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床。隨著光學(xué)顯微技術(shù)的發(fā)展,新的顯微技術(shù)能夠?qū)Ω谓M織中膠原纖維精確測量,為纖維化評估提供了新的方法。

    (一)起始階段

    上世紀60年代末有學(xué)者開始對慢性肝病進展程度進行分期[13],1977年該分期方法進行了改進[14]。1968年首次發(fā)表的分期方法將慢性肝炎分為慢性持續(xù)性和慢性進展性兩種[13]。Popper and Schaffner肯定了肝臟活檢在慢性肝炎的診斷和預(yù)后判斷中的價值,并強調(diào)炎癥分布區(qū)域的描述,包括:慢性小葉、慢性匯管區(qū)和慢性匯管周圍炎癥等,但后者沒能體現(xiàn)出病因的重要性[16]。在這一階段并沒有形成系統(tǒng)性的肝纖維化評估方法。

    (二)發(fā)展階段

    隨著對慢性肝臟疾病的病因?qū)W、發(fā)病機制、病理變化、臨床表現(xiàn)等的全面認識,對疾病進展程度的分期更加合理,主要考慮到病因、肝組織的炎癥分級和纖維化分期三個因素。1981~1996年間,在原有病理評分方法的基礎(chǔ)上進行改進,先后提出了五個慢性肝臟疾病嚴重程度的病理評分系統(tǒng):HAI評分系統(tǒng)[17]、Scheuer評分系統(tǒng)[18]、Ishak評分系統(tǒng)[19]、Metavir評分系統(tǒng)[20]和Ishak改進的HAI系統(tǒng)[21]。目前廣泛應(yīng)用于臨床。

    以上評估方法雖然能夠較為系統(tǒng)、客觀的對纖維化程度作出半定量評估,但這些評分系統(tǒng)基本上都是以慢性病毒性肝炎為模型建立的,應(yīng)用于其他病因所致肝纖維化的評估時有不同程度的局限性[22]。此外,上述方法是基于對肝組織病理切片的免疫組化染色結(jié)果的閱讀,由病理專家給出評分。因此除了肝臟穿刺活檢固有的創(chuàng)傷性之外,傳統(tǒng)的纖維化評估方法還存在讀片者本身及讀片者之間的主觀性差異、染色劑濃度影響及光漂白等缺點,使客觀性、精確性、可重復(fù)性等受到影響。

    (三)新進展階段

    近年來有文獻報道應(yīng)用非線性光學(xué)顯微技術(shù)——二次諧波產(chǎn)生(SHG)和雙光子激發(fā)熒光(TPEF),結(jié)合計算機分析系統(tǒng)對肝活檢標本進行全自動纖維化評估的方法[23]。這種方法基于肝組織自身熒光的存在,不需染料染色,克服了傳統(tǒng)評估方法的很多缺點,能夠更加準確、客觀、定量、快速地對纖維化做出評估。

    1.SHG/TPEF光學(xué)原理簡介

    外部可調(diào)節(jié)的鎖模藍色激光共聚焦圖像系統(tǒng)是SHG/ TPEF的技術(shù)基礎(chǔ),如圖1所示。激光首先通過脈沖壓縮器(PC)和聲光調(diào)節(jié)器(AOM),分別用來減少激光的全速分散和能量衰變。然后激光經(jīng)分色鏡(DM),被折射的部分激光通過物鏡到達非染色組織切片。組織中產(chǎn)生的TPEF位置指示信號被該物鏡收集,并通過一個分色鏡和一個500~550 nm波長的帶通濾波片后被光電倍增管(PMT)記錄。SHG信號被一個聚光器收集,并在被PTM檢測前經(jīng)450nm波長的電通濾波片濾過。由于這種非線性光學(xué)過程內(nèi)在的光學(xué)選擇特性,不需使用共聚焦顯微鏡的針孔作用[24]。

    2.組織標本圖像的采集、處理優(yōu)勢

    利用膠原的內(nèi)在特性,SHG顯微技術(shù)可以更加敏感地獲取非染色肝組織中膠原的定量信息。其優(yōu)點是能夠檢測到膠原結(jié)構(gòu)及其在纖維化早期的重塑過程[25]。另有研究發(fā)現(xiàn),抗纖維化治療后肝組織在傳統(tǒng)組織評分中未能發(fā)現(xiàn)明顯變化而SHG顯微技術(shù)則能檢測到膠原減少[26]。不僅如此,SHG顯微成像能夠描述組織切片中膠原的三維空間分布,可以精確描述膠原蛋白在不同區(qū)域的增加強度[27]。將SHG顯微技術(shù)與計算機系統(tǒng)相結(jié)合,可將組織圖像轉(zhuǎn)化為數(shù)字化信息,實現(xiàn)膠原的全自動定量分析。

    圖1

    在激光下肝細胞內(nèi)分子(NADPH、黃素等)產(chǎn)生的大量熒光可被TPEF記錄。肝損傷過程中由于肝細胞變性、壞死而使細胞核、胞漿、脂滴聚集區(qū)域缺乏熒光顆粒,在TPEF中顯示為暗區(qū),因而TPEF適用于肝細胞形態(tài)的觀察[28]。

    目前已有商品化的SHG/TPEF顯微儀器,可方便快速地采集組織信息并將組織圖像信息轉(zhuǎn)化成數(shù)字圖像與計算機相結(jié)合,直接分析組織切片中膠原和壞死性炎癥的情況[29],對肝纖維化程度進行評估。新的纖維化評估方法具有以下優(yōu)點:不需要組織染色和人工閱讀病理切片,避免了染色劑、觀察者的影響而具有更好的可重復(fù)性;可根據(jù)不同病因所致纖維化模型調(diào)整分析參數(shù)、建立模型,使評估更加標準化;可將成像系統(tǒng)與計算機相連結(jié)合,實現(xiàn)全自動定量評估;可以獲得膠原的三維空間結(jié)構(gòu)及分布信息,使評估更加精確、連續(xù)。

    三、小結(jié)與展望

    肝纖維化是不同病因所致慢性肝臟疾病的一個共同的病理過程,其實質(zhì)是肝組織中ECM的過度積累。為判斷疾病嚴重程度、評價治療效果、判斷預(yù)后,必須準確、客觀地評估肝臟纖維化情況。傳統(tǒng)的評估方法各具優(yōu)缺點,SHG/TPEF顯微技術(shù)不僅克服了傳統(tǒng)方法的部分缺點,而且具有更多優(yōu)勢。

    目前已有SHG/TPEF用于臨床慢性乙型肝炎肝纖維化的病理評估模型的報道,可用于乙肝肝纖維化評估,相信該技術(shù)會很快應(yīng)用于其他病因所致肝纖維化的評估中。另外由于SHG/TPEP的靈敏性、連續(xù)性等特點,不僅可用于疾病診斷、分期,還使治療效果的檢測更準確,并有助于新的抗纖維化藥物研發(fā)和優(yōu)化病人個體化治療方案。

    1 Gulsum Ozlem Elpek.Cellular and molecular mechanisms in the pathogenesis of liver fibrosis:An update.World J Gastroenterol,2014,20:7260-7276.

    2 Kisseleva T,Brenner DA.Hepatic stellate cells and the reversal of fibrosis.Gastroenterol Hepatol,2006,21:S84-S87.

    3 Yovchev MI,Zhang J,Neufeld DS,et al.Thymus cell antigen-1-expressing cells in the oval cell compartment.Hepatology,2009,50:601-611.

    4 Kisseleva T,Brenner DA.Anti-fibrogenic strategies and the regression of fibrosis.Best Pract Res Clin Gastroenterol,2011,25:305-317.

    5 Vishnubalaji R,Al-Nbaheen M,Kadalmani B,et al.Skin-derived multipotent stromal cells-an archrival for mesenchymal stem cells. Cell Tissue Res,2012,350:1-12.

    6 Hernandez-Gea V,F(xiàn)riedman SL.Pathogenesis of liver fibrosis. Annu Rev Patho,2011,6:425-456.

    7 Schuppan D,Ruehl M,Somasundaram R,et al.Matrix as a modulator of hepatic fibrogenesis.Semin Liver Dis,2001,21:351-372.

    8 Das SK,Vasudevan DM.Genesis of hepatic fibrosis and its biochemical markers.Scand J Clin Lab Invest,2008,68:260-269.

    9 Henderson NC,Iredale JP.Liver fibrosis:cellular mechanisms of progression and resolution.Clin Sci(Lond),2007,112:265-280.

    10 Bedossa P,Poynard T.An algorithm for the grading of activity in chronic hepatitis C:The METAVIR Cooperative Study Group. Hepatol,1996,24:289-293.

    11 Ishak K,Baptista A,Bianchi L,et al.Histological grading and staging of chronic hepatitis.Hepatol,1995,22:696-699.

    12 Bedossa P,Dargere D,Paradis V.Evaluation of sampling variability of liver fibrosis in hepatitis C using virtual biopsies. Hepatology,2003,38:368.

    13 De Grote J,Desmet VJ,Gedigk P,et al.A classification of chronic hepatitis.Lancet,1968,2:626-628.

    14 Acute and chronic hepatitis revisited.Review by an international group.Lancet,1977,2:914-919.

    15 Mackay IR,Taft LI,Crowling DC.Lupoid hepatitis.Lancet,1956,2:1323-1330.

    16 Popper H,Schaffner F.The vocablury of chronic hepatitis.N Engl J Med,1971,284:1154-1157.

    17 Knodell RG,Ishak KG,Black WC,et al.Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis.Hepatology,1981,1:431-55.

    18 Scheuer PJ.Classification of chronic viral hepatitis:a need for reassessment.Hepatol,1991,13:372-374.

    19 Ishak KG.Chronic hepatitis:morphology and nomenclature.Mod Pathol,1994,7:690-713.

    20 Bedossa P,Poynard T.The French METAVIR Cooperative Study Group.An algorithm for grading activity in chronic hepatitis C. Hepatology,1996,24:289-293.

    21 Ishak K,Baptista A,Bianchi L,et al.Histological grading and staging of chronic hepatitis.Hepatol,1995,22:696-699.

    22 Mannan R,Misra V,MISRA SP,et al.A Comparative Evaluation of Scoring Systems for Assessing Necro-Inflammatory Activity and Fibrosis in Liver Biopsies of Patients with Chronic Viral Hepatitis.Clinical and Diagnostic Research,2014,8:8-12.

    23 Xu S,Wang Y,Tai DC,et al.q Fibrosis:A fully-quantitative innovative method incorporating histological features to facilitate accurate fibrosis scoring in animal model and chronic hepatitis B patients.Hepatology,2014,61:L 260.

    24 Tai DC,Tan N,Xu S,et al.Fibro-C-Index:comprehensive,morphology-based quantification of liver fibrosis using second harmonic generation and two-photon microscopy.J Biomedical Opt,2009,14:044013.

    25 Sun W,Chang S,Tai DC,et al.Nonlinear optical microscopy:use of second harmonic generation and two-photon microscopy for automated quantitative liver fibrosis studies.J Biomed Opt,2008,13:0640101-7.

    26 Manabe N,Chevallier M,Chossegros P,et al.Interferon-α2b therapy reduces liver fibrosis in chronic non-A,non-B hepatitis:A quantitative histological evaluation.Hepatol,1993,18:1344-1349.

    27 Strupler M,Pena AM,Hernest M,et al.Second harmonic imaging and scoring of collagen in fibrotic tissues.Opt Express,2007,15:4054-4065.

    28 Zipfel WR,Williams RM,Christie R,et al.Live tissue intrinsic emission microscopy using multiphoton-excited native fluorescence and second harmonic generation.Proc Natl Acad Sci USA,2003,100:7075-7080.

    29 Friedenberg MA,Miller L,Chung CY,et al.Simplified method of hepatic fibrosis quantification:design of a new morphometric analysis application.Liver Int,2005,25:1156-1161.

    2014-12-19)

    (本文編輯:魏清)

    100039 武警總醫(yī)院移植研究所

    趙川,Email:791285871@qq.com

    猜你喜歡
    胞外基質(zhì)膠原纖維化
    肝纖維化無創(chuàng)診斷研究進展
    傳染病信息(2022年3期)2022-07-15 08:24:28
    脫細胞外基質(zhì)制備與應(yīng)用的研究現(xiàn)狀
    肝纖維化的中醫(yī)藥治療
    肝博士(2021年1期)2021-03-29 02:32:16
    關(guān)于經(jīng)絡(luò)是一種細胞外基質(zhì)通道的假說
    膠原無紡布在止血方面的應(yīng)用
    腎纖維化的研究進展
    紅藍光聯(lián)合膠原貼治療面部尋常痤瘡療效觀察
    水螅細胞外基質(zhì)及其在發(fā)生和再生中的作用
    中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎肝纖維化66例
    鐮形棘豆總黃酮對TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細胞分泌細胞外基質(zhì)成分的影響
    亚洲国产欧洲综合997久久,| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲国产看品久久| 日本黄大片高清| 在线a可以看的网站| 老司机福利观看| 舔av片在线| 国产精品,欧美在线| 国产真人三级小视频在线观看| 在线观看66精品国产| 99热这里只有精品一区 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 九九热线精品视视频播放| 免费av毛片视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产成人a区在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 99热网站在线观看| 午夜a级毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲丝袜综合中文字幕| 麻豆av噜噜一区二区三区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产精品精品国产色婷婷| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩成人伦理影院| 亚洲,欧美,日韩| 久久亚洲国产成人精品v| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日韩国内少妇激情av| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久人人爽人人片av| 国产精品电影一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 一夜夜www| 久久草成人影院| 精品一区二区三区人妻视频| 色哟哟·www| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 99久国产av精品国产电影| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久久九九精品影院| 亚洲人成网站在线播| 免费人成在线观看视频色| 成年版毛片免费区| 免费av毛片视频| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品蜜桃在线观看 | 国产精品一及| 欧美成人a在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 国产老妇女一区| 在线观看一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人| 人妻系列 视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 美女大奶头视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久国产成人免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲不卡免费看| 久久亚洲国产成人精品v| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲无线在线观看| 国产视频内射| 尾随美女入室| 久久99蜜桃精品久久| 丰满乱子伦码专区| 美女 人体艺术 gogo| 啦啦啦韩国在线观看视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 高清毛片免费观看视频网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久中文看片网| 亚洲真实伦在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲自拍偷在线| 亚洲欧美精品综合久久99| www.色视频.com| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精品色激情综合| 国产成人freesex在线| 在现免费观看毛片| 国产成人精品一,二区 | 成人二区视频| 少妇高潮的动态图| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产高清有码在线观看视频| av黄色大香蕉| 国产午夜福利久久久久久| 99热只有精品国产| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 美女cb高潮喷水在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 我要看日韩黄色一级片| 麻豆av噜噜一区二区三区| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美+亚洲+日韩+国产| 变态另类丝袜制服| 久久99热6这里只有精品| 国产精品人妻久久久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本av手机在线免费观看| 国产单亲对白刺激| 亚洲经典国产精华液单| 我的女老师完整版在线观看| 在线免费十八禁| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日韩人妻高清精品专区| 丝袜美腿在线中文| 午夜精品一区二区三区免费看| 三级国产精品欧美在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 秋霞在线观看毛片| 免费无遮挡裸体视频| 99热网站在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 亚洲最大成人中文| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产亚洲欧美98| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 青春草亚洲视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 免费看光身美女| 亚洲美女视频黄频| 能在线免费观看的黄片| 亚洲最大成人中文| 国产精品,欧美在线| 禁无遮挡网站| 久久久久久久久久成人| 高清日韩中文字幕在线| 国产视频内射| 成人特级黄色片久久久久久久| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 精品日产1卡2卡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 婷婷六月久久综合丁香| av女优亚洲男人天堂| 国产亚洲精品av在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 午夜免费激情av| 99精品在免费线老司机午夜| 精华霜和精华液先用哪个| 毛片一级片免费看久久久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 最新中文字幕久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 日韩一区二区视频免费看| 国产av在哪里看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 日本免费a在线| 午夜福利成人在线免费观看| 两个人的视频大全免费| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产久久久一区二区三区| 午夜精品一区二区三区免费看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本免费a在线| 69人妻影院| 性插视频无遮挡在线免费观看| 精品久久国产蜜桃| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人二区视频| 在线国产一区二区在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本五十路高清| 热99在线观看视频| 亚洲国产欧美人成| 午夜老司机福利剧场| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品久久电影中文字幕| 久久这里有精品视频免费| 亚洲经典国产精华液单| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久久久大av| 丰满乱子伦码专区| 天天躁日日操中文字幕| 午夜激情欧美在线| 国产色爽女视频免费观看| 午夜视频国产福利| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品国产三级普通话版| a级毛片免费高清观看在线播放| 毛片一级片免费看久久久久| 一级av片app| 国产在视频线在精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲av成人av| 午夜免费激情av| 女人被狂操c到高潮| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 久久精品久久久久久久性| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产黄片美女视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久精品国产自在天天线| 国产一区二区三区av在线 | 一个人观看的视频www高清免费观看| 禁无遮挡网站| 中文字幕免费在线视频6| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 在线观看av片永久免费下载| 国产真实伦视频高清在线观看| 草草在线视频免费看| 亚洲自偷自拍三级| 国产一区亚洲一区在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 禁无遮挡网站| 国产单亲对白刺激| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美性猛交黑人性爽| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲国产精品成人综合色| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品国产三级普通话版| 女人被狂操c到高潮| 国产一级毛片七仙女欲春2| а√天堂www在线а√下载| 国产成人精品一,二区 | 精品国内亚洲2022精品成人| 日日撸夜夜添| 晚上一个人看的免费电影| 国产高潮美女av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 我的女老师完整版在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产三级在线视频| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 在线免费观看的www视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品久久视频播放| 一个人看视频在线观看www免费| 99热只有精品国产| 级片在线观看| 亚洲电影在线观看av| 国产黄片视频在线免费观看| 国产精品不卡视频一区二区| 国产成人福利小说| 一个人免费在线观看电影| 可以在线观看毛片的网站| 国产高清激情床上av| 国产日本99.免费观看| av.在线天堂| 午夜亚洲福利在线播放| 免费人成在线观看视频色| 日产精品乱码卡一卡2卡三| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产日本99.免费观看| 欧美日本视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 精品久久久噜噜| 久久热精品热| 一级毛片电影观看 | 国产一区二区三区av在线 | 国产精品永久免费网站| 黄色日韩在线| 91av网一区二区| 国产黄色小视频在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 免费av观看视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久草成人影院| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 熟女人妻精品中文字幕| 寂寞人妻少妇视频99o| 日日干狠狠操夜夜爽| 97超碰精品成人国产| 99在线人妻在线中文字幕| 在线播放国产精品三级| 国产一区二区在线观看日韩| 久久精品国产亚洲网站| 欧美又色又爽又黄视频| 国产真实乱freesex| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品久久久久久av不卡| 国产成人freesex在线| 中文字幕熟女人妻在线| 午夜视频国产福利| 天堂√8在线中文| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 青春草国产在线视频 | 观看美女的网站| 在线国产一区二区在线| 亚洲最大成人av| 高清在线视频一区二区三区 | 欧美bdsm另类| 欧美另类亚洲清纯唯美| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产视频内射| 2022亚洲国产成人精品| 午夜激情欧美在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 乱系列少妇在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久6这里有精品| 久久亚洲国产成人精品v| 九色成人免费人妻av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲图色成人| 99久久精品热视频| 国产精品永久免费网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 在线播放无遮挡| 久久中文看片网| 亚洲人成网站在线播| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久精品久久久久久久性| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久色成人| 黄色一级大片看看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜精品一区二区三区免费看| 美女国产视频在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲美女视频黄频| 天堂影院成人在线观看| 丰满的人妻完整版| 十八禁国产超污无遮挡网站| 日韩三级伦理在线观看| 99热精品在线国产| 亚洲精品色激情综合| 精品人妻一区二区三区麻豆| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 又爽又黄无遮挡网站| 国产三级中文精品| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久热精品热| 能在线免费观看的黄片| 欧美又色又爽又黄视频| 青春草国产在线视频 | 成人性生交大片免费视频hd| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 在线免费十八禁| 一区二区三区高清视频在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美三级亚洲精品| 插阴视频在线观看视频| 免费观看在线日韩| 久久久久网色| 悠悠久久av| 在现免费观看毛片| 欧美精品一区二区大全| 能在线免费观看的黄片| 亚洲av中文av极速乱| 麻豆成人午夜福利视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产人妻一区二区三区在| 久久久久久九九精品二区国产| 精品人妻熟女av久视频| 日本五十路高清| 国产69精品久久久久777片| 2022亚洲国产成人精品| 嘟嘟电影网在线观看| av免费观看日本| 免费看av在线观看网站| 日韩欧美精品v在线| a级毛色黄片| 免费看a级黄色片| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品日韩av片在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 男人狂女人下面高潮的视频| 日韩中字成人| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日日撸夜夜添| 精品国内亚洲2022精品成人| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 在线国产一区二区在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 网址你懂的国产日韩在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 九九热线精品视视频播放| 精品久久久久久久久久免费视频| 黄片wwwwww| 久久人人爽人人片av| 欧美又色又爽又黄视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 高清午夜精品一区二区三区 | 在线观看66精品国产| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美三级亚洲精品| 三级毛片av免费| 国产乱人视频| 久久精品久久久久久久性| 欧美日韩精品成人综合77777| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 婷婷六月久久综合丁香| 国产成人精品一,二区 | 国产精品一区二区在线观看99 | 天堂√8在线中文| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品精品国产色婷婷| 色5月婷婷丁香| 一个人免费在线观看电影| av视频在线观看入口| 亚洲国产精品合色在线| 一本久久中文字幕| 悠悠久久av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产亚洲5aaaaa淫片| 极品教师在线视频| 国产高清激情床上av| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久精品国产清高在天天线| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久午夜欧美精品| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 精品午夜福利在线看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美精品v在线| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 午夜福利在线在线| 两个人视频免费观看高清| 亚洲无线观看免费| 有码 亚洲区| 老女人水多毛片| eeuss影院久久| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 免费看光身美女| av视频在线观看入口| 九九在线视频观看精品| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 日本av手机在线免费观看| 看十八女毛片水多多多| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | АⅤ资源中文在线天堂| 97超碰精品成人国产| av在线播放精品| 熟女电影av网| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 免费观看a级毛片全部| 日本三级黄在线观看| 亚洲av免费在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 婷婷精品国产亚洲av| 99久久精品国产国产毛片| 国产成人精品久久久久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| eeuss影院久久| 日本一本二区三区精品| 乱人视频在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久网色| 91av网一区二区| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲内射少妇av| 搞女人的毛片| 能在线免费看毛片的网站| 在线观看av片永久免费下载| 国产v大片淫在线免费观看| 免费电影在线观看免费观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲七黄色美女视频| 美女高潮的动态| 欧美又色又爽又黄视频| av女优亚洲男人天堂| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品久久久久久久末码| 尾随美女入室| 成年女人永久免费观看视频| 联通29元200g的流量卡| 亚洲18禁久久av| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲综合色惰| 国产大屁股一区二区在线视频| 26uuu在线亚洲综合色| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产乱人视频| 日本一二三区视频观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 联通29元200g的流量卡| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲精品成人久久久久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产 一区精品| 91精品国产九色| 精华霜和精华液先用哪个| 91精品国产九色| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲人成网站在线播| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲第一电影网av| 国产一区二区在线观看日韩| 中文字幕制服av| 欧美bdsm另类| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 在线播放国产精品三级| 国产精品一及| 国产日韩欧美在线精品| 国产男人的电影天堂91| 国产色婷婷99| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久欧美国产精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费看光身美女| 最近中文字幕高清免费大全6| 日本-黄色视频高清免费观看| 成年免费大片在线观看| 亚洲精品色激情综合| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 啦啦啦啦在线视频资源| 99热只有精品国产| 不卡视频在线观看欧美| 国内精品宾馆在线| 国产一区二区在线观看日韩| 久久这里有精品视频免费| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲av中文av极速乱| 天堂影院成人在线观看| 我要搜黄色片| 国产极品精品免费视频能看的| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品国产高清国产av| 亚洲成人久久爱视频| 午夜a级毛片| 久久久欧美国产精品| 性色avwww在线观看| 亚洲自拍偷在线| 日韩大尺度精品在线看网址| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 又爽又黄a免费视频| 一级毛片久久久久久久久女| 精品一区二区三区人妻视频| 中文字幕免费在线视频6| 欧美性猛交黑人性爽| 人体艺术视频欧美日本| 成年免费大片在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 三级国产精品欧美在线观看| 99久国产av精品| 九色成人免费人妻av| 亚洲色图av天堂| 美女 人体艺术 gogo| 美女黄网站色视频| 搞女人的毛片| 精品人妻熟女av久视频| 日日撸夜夜添| 天天一区二区日本电影三级| 国产美女午夜福利| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆成人av视频| 亚洲国产精品成人久久小说 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久韩国三级中文字幕| 午夜福利在线在线| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精品自拍成人| 亚洲av成人精品一区久久| 丝袜美腿在线中文| 国产亚洲5aaaaa淫片| 免费黄网站久久成人精品| 麻豆国产97在线/欧美| 精品不卡国产一区二区三区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 九九在线视频观看精品| 晚上一个人看的免费电影| a级毛片a级免费在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲人成网站在线播| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 在线天堂最新版资源| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久精品综合一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 中文字幕制服av| 国产精品精品国产色婷婷| 日本黄色视频三级网站网址| 日本黄色片子视频| 亚洲国产欧美人成| 在线观看免费视频日本深夜| 老司机福利观看| 一级二级三级毛片免费看|