乙型肝炎病毒DNA與血清標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果分析

武曉敏

(濮陽(yáng)市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科 河南 濮陽(yáng) 457000)

慢性乙型病毒性肝炎臨床表現(xiàn)為乏力、惡心、腹脹、肝區(qū)疼痛、畏食等癥狀。病情呈進(jìn)展性，若未取得及時(shí)準(zhǔn)確治療，極易誘發(fā)全身各個(gè)系統(tǒng)疾病，如肝源性糖尿病、脂肪肝、肝硬化等。乙肝屬于傳染性強(qiáng)的慢性疾病，HBV DNA 陽(yáng)性是HBV 感染、復(fù)制和傳染最為直接有力的參考依據(jù)［1］。目前常用ELISA 檢測(cè)HBV 血清中HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBc 等。近年來(lái)，醫(yī)院在臨床診斷時(shí)不再局限于一種方法，常聯(lián)合FQ－PCR檢測(cè)HBV DNA，靈敏度高，檢出率高?，F(xiàn)筆者以340份乙肝病毒血清作為研究對(duì)象，分析其關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究材料 340 份乙肝病毒血清來(lái)源于2012年4月至2014年7月于濮陽(yáng)市人民醫(yī)院就診的乙肝患者，均符合病毒性肝炎相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);其中男性217例，女性123例;年齡20～60 歲，平均年齡(45.6±3.7)歲，病程2～11 a，平均病程(7.8±3.1)a。其中300例為慢性乙型肝炎患者，40例為乙型肝炎肝硬化患者;所有患者接受FQ－PCR 檢測(cè)及ELISA 檢測(cè)前均未服用任何抗病毒藥物治療。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 未合并嚴(yán)重肝臟疾病，無(wú)肝臟惡性腫瘤;精神正常，依從性良好，無(wú)人格障礙;無(wú)腎功能異常、心、腦等器質(zhì)性疾病;排除妊娠期、哺乳期患者。均并簽署了研究知情同意書。

1.3 研究方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量－聚合酶鏈反應(yīng)(FQ－ PCR)檢測(cè)HBV DNA，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)HBV 血清標(biāo)志物(HBVM)，并根據(jù)HBVM 測(cè)定分為A、B、C、D 5 組，A 組44例，HBsAg、HBeAg 均(+);B 組75例，HBsAg、HBeAg、HBcAb 均(+);C 組68例，HBsAg、HBcAb 均(+);D 組115例，HBsAg、HBeAb、HBcAb 均(+);E 組38例，全陰或HBsAb 單項(xiàng)(+)。ELISA 檢測(cè)試劑盒以及配套試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，酶標(biāo)儀為博賽1210 酶標(biāo)儀，F(xiàn)Q－ PCR定量檢測(cè)儀器為美國(guó)ABI7000，由深圳匹基生物工程股份有限公司提供試劑。HBV DNA 和HNVM 檢測(cè)均按照儀器和試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。HBV DNA 通過(guò)電腦計(jì)算出初始拷貝數(shù)定量結(jié)果判定，陽(yáng)性:≥1 ×103拷貝/ml;陰性:＜1 ×103拷貝/ml［2］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，定性資料的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBVM 間HBV DNA 陽(yáng)性率對(duì)比 A、B、C組檢測(cè)HBV DNA 陽(yáng)性率分別為97.7%、88.0%、51.5%顯著高于D 組的39.1%(P ＜0.05)，A、B 組檢測(cè)陽(yáng)性率分別為97.7%、88.0%高于C 組的51.5%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，A 組陽(yáng)性率為97.7%稍高于B 組的88.0%，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，E 組未檢測(cè)到HBV DNA 陽(yáng)性。見(jiàn)表1。

表1 不同HBVM 間HBV DNA 陽(yáng)性率對(duì)比(n，%)

2.2 HBV DNA 陽(yáng)性和陰性血清中HBsAg 檢出率189 份HBV DNA 陽(yáng)性中，HBsAg 陽(yáng)性率100.0%(189/189);151 份HBV DNA 陰性標(biāo)本中HBsAg 陽(yáng)性率87.4%(132/151)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.3 HBV DNA 與HBVM 相關(guān)性研究 HBV DNA與HBsAg 相關(guān)系數(shù)r =0.221，P ＞0.05，無(wú)明顯相關(guān)性;HBV DNA 與HBeAg 相關(guān)系數(shù)為r = 0.59，P ＜0.05，HBV DNA 與HBeAg 呈正相關(guān);與抗HBs、抗HBC、抗HBe 無(wú)相關(guān)性。

3 討論

對(duì)乙肝患者HBV 血清標(biāo)志物(HBVM)實(shí)施ELISA 檢測(cè)，該檢測(cè)方式可將人體對(duì)HBV 的免疫反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行體現(xiàn)，并能夠提供HBV 存在的間接證據(jù)［3］。另外HBV DNA 陽(yáng)性是HBV 感染、復(fù)制及傳染性最為直接和可靠的證據(jù)，通過(guò)對(duì)血清HBV DNA 實(shí)施FQ－PCR 檢測(cè)，可反映出HBV 感染后活動(dòng)復(fù)制的情況。

此次研究中對(duì)收集的340例乙肝病毒患者的血清標(biāo)本分別進(jìn)行ELISA 檢測(cè)與FQ－PCR 檢測(cè)兩種方式的測(cè)定，結(jié)果顯示A 組對(duì)HBV DNA 檢出陽(yáng)性率明顯高于其他4 組(P ＜0.05)，而且在189 份HBV DNA 陽(yáng)性中標(biāo)本中HBsAg 的陽(yáng)性率是100.0%，而其余為HBsAb 樣本或?yàn)榘肴帢?biāo)本中，HHBV DNA 均為陰性，由此可見(jiàn)，在HBVM 檢測(cè)中，HBsAg 是HBV 感染靈敏的血清標(biāo)志物，若HBsAg 為陰性，基本可以判斷HBV 未感染。當(dāng)HBV 感染后，HBsAg 標(biāo)本中HBc 陽(yáng)性率較高，則說(shuō)明抗HBc 是HBV 感染敏感物，但無(wú)法區(qū)分是目前感染或是既往感染。

HBV DNA 是HBV 感染的分子生物學(xué)標(biāo)記，可反映出機(jī)體病毒復(fù)制，是HBV 活動(dòng)性感染特異性標(biāo)志。而此次研究中，C 組和D 組HBV DNA 陽(yáng)性率檢出率較低，或許是與HBV 低水平復(fù)制相關(guān)，同時(shí)也說(shuō)明HBV DNA 無(wú)法反映病程進(jìn)展和感染情況。在此次研究中，HBV DNA 與HBsAg、HBeAg 相關(guān)性明顯，與抗HBs、抗HBC、抗HBe 無(wú)相關(guān)性。血清標(biāo)志物能夠反映病毒表達(dá)水平，也可以間接反映病毒復(fù)制情況，在判斷乙肝病因、病情進(jìn)展及預(yù)后上起到無(wú)法替代的作用。但血清標(biāo)志物無(wú)法判斷機(jī)體是否現(xiàn)在存在傳染性病毒顆粒，而對(duì)HBV DNA 的檢測(cè)即可反應(yīng)出病毒傳染性的強(qiáng)弱［4］?？偟膩?lái)說(shuō)，HBV DNA 可以反映HBV 復(fù)制狀況和傳染性，但不同患者、不同發(fā)病時(shí)間及不同類型表現(xiàn)也不相同;血清學(xué)指標(biāo)在判斷和分析乙肝病因、進(jìn)展及預(yù)后方面起到的顯著作用明顯優(yōu)于HBV DNA［5］。然而無(wú)法確定是否存在傳染性病毒顆粒，而HBV DNA在此方面的作用則是血清學(xué)指標(biāo)無(wú)法比擬的。因此，HBVM 檢測(cè)是臨床診斷HBV 不可或缺的檢測(cè)方法，HBV DNA 有完整病毒顆粒復(fù)制，具有傳染性，通過(guò)聯(lián)合HBV DNA 和HBVM 檢測(cè)，可明顯提高其檢出率。

在HBV DNA 及HBVM 檢測(cè)中臨床采用FQ－PCR 定量技術(shù)檢測(cè)，即融合熒光技術(shù)、探針雜交技術(shù)，通過(guò)閉管檢測(cè)方法和檢測(cè)熒光信號(hào)［6］，對(duì)HBV DNA定量檢測(cè)，可避免常規(guī)PCR 法產(chǎn)生的交叉污染及無(wú)法定量的缺點(diǎn)。通常以FQ－PCR 定量技術(shù)檢測(cè)作為補(bǔ)充血清學(xué)檢測(cè)的方法，可早期診斷乙型肝炎，并有效判斷疾病傳染性。

綜上所述，HBsAg 對(duì)HBV 感染的靈敏度較高;采用FQ－PCR 定量方式進(jìn)行HBV DNA 檢測(cè)可作為血清學(xué)方法的補(bǔ)充，對(duì)乙肝診斷有重要價(jià)值;可判斷和分析乙肝病因、進(jìn)展及預(yù)后，檢測(cè)患者機(jī)體內(nèi)是否存在傳染性病毒顆粒，臨床應(yīng)用價(jià)值高。

［1］ 郭輝，閔娟，葉健忠.乙型肝炎病毒DNA 與血清免疫標(biāo)志物的關(guān)系分析［J］.華中醫(yī)學(xué)雜志，2007，31(3):207－209.

［2］ 王智華，張樂(lè)之，吳淑梅，等.HBV DNA 與HBV 血清學(xué)指標(biāo)及pre－S1 抗原相關(guān)性［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2005，23(5):386.

［3］ 唐芳玫.乙型肝炎病毒DNA 與血清標(biāo)志物的關(guān)系［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(1):28－29.

［4］ 梅小平，李健，曾躍，等.乙型肝炎病毒HBV DNA 與臨床分析［J］.中華肝病雜志，2004，22(5):313.

［5］ 何萍，胡如華，楊莉瓊，等.乙型肝炎網(wǎng)對(duì)模式與乙型肝炎核酸檢測(cè)結(jié)的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)醫(yī)療前沿，2008，3(12):45.

［6］ 羅德生.熒光定量PCR 技術(shù)及其臨床應(yīng)用［J］.中國(guó)誤診學(xué)雜志，2004，4(3):365.