組織多肽特異性抗原與血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌患者病理分級關(guān)系研究

陳道寶，楊紅健，陳波，俞星飛，封偉亮

(浙江省腫瘤醫(yī)院 乳腺外科，浙江 杭州 310022)

乳腺癌是因為乳腺上皮細胞遭到雌酮及雌二醇的刺激而出現(xiàn)乳腺小葉上皮高度增生或不典型增生的惡性疾病，為女性最常見的惡性腫瘤之一［1］，多發(fā)于中年女性，近年來男性乳腺癌的發(fā)病率逐漸升高，據(jù)調(diào)查統(tǒng)計［2］，我國乳腺癌患者占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，在一些大城市中乳腺癌的發(fā)病率已上升為第一位。目前臨床上采取手術(shù)為主、放化療為輔的綜合治療方法［3］。早期診斷治療對乳腺癌早期防治有非常重要的作用，目前常用的乳腺癌標志物如CA153、CEA、CA125等對乳腺癌的敏感性很低，即使乳腺癌Ⅲ期患者CA153、CEA、CA125的敏感性也只有50%以下［4］。研究發(fā)現(xiàn)［5］，組織多肽特異性抗原(TPS)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是腫瘤細胞增殖活性的特異性標志物，能夠特異性反應(yīng)細胞增殖和血管新生的程度。本研究通過觀察乳腺癌患者TPS、VEGF表達水平，來探究TPS、VEGF與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2014年4月收入浙江省腫瘤醫(yī)院診斷為乳腺癌的女性患者68例作為實驗組，診斷為乳腺纖維瘤的女性患者36例作為對照組，年齡在30～70歲，實驗組平均年齡(50.6±12.4)歲，其中35例病灶位于左側(cè)乳腺，33例病灶位于右側(cè)乳腺;浸潤性導管癌為57例，非浸潤導管癌11例;對照組平均年齡(51.2±11.7)歲，19例患者病灶位于左側(cè)乳腺，17例患者病灶位于右側(cè)。2組患者的年齡、文化程度、家庭背景等一般資料差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 診斷標準 根據(jù)乳腺腫瘤臨床治療指南確定乳腺癌診斷標準［6］:①患者患側(cè)乳頭不明原因的出現(xiàn)乳汁或者液體分泌;②患側(cè)乳頭及皮膚發(fā)現(xiàn)改變，如酒窩癥、橘皮樣改變、乳頭內(nèi)陷;③患側(cè)乳房能觸及不規(guī)則、活動度差的腫塊;④乳腺癌彩超示乳房內(nèi)腫塊邊界不清，回聲不均，有鈣化或液化灶，胸大肌和皮下脂肪與腫塊的邊界不清;⑤乳腺癌鉬靶X線示邊緣牛角狀或毛刺狀改變的腫塊影，腫塊周圍組織可見粗大的血管影;⑥病理活檢及術(shù)后病理是診斷乳腺癌的金標準。

1.3 納入標準 符合乳腺癌的診斷標準，患者年齡在30～70歲;術(shù)前檢查中未發(fā)現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)腫大的證據(jù);患者以及家屬對本研究具體情況了解知情并自愿參與和簽署知情同意書;本研究已獲得本醫(yī)院的倫理學相關(guān)機構(gòu)批準授權(quán)。

1.4 排除標準 ①精神、神志異常不能配合者;②患有嚴重心、肝、腎、肺、腦疾病者;③患有肺癌、肝癌、腎癌、腦癌等其他惡性腫瘤者;④患有艾滋病、梅毒、病毒性肝炎、結(jié)核等傳染病者;⑤患有再障、白血病等血液性疾病者;⑥近3個月服用抗腫瘤藥物或者接受過腫瘤治療的患者。

1.5 方法 實驗組和對照組于手術(shù)前、后抽取空腹肘靜脈血3mL加入含EDTA-K2抗凝劑的真空管中混勻，根據(jù)乳腺腫瘤臨床治療指南［6］，實驗組患者予以乳腺癌改良根治術(shù)，對照組患者予以乳腺纖維瘤切除術(shù)，實驗組患者在術(shù)后第5日清晨空腹抽取靜脈血3mL加入含EDTA-K2抗凝劑的真空管中混勻。所有靜脈血均分離血清，置于－20℃的冰箱里保存待測。采用ELISA檢測法檢測兩組患者血清中TPS和VEGF水平，TPS超過4.5 ng/mL時為陽性，VEGF超過125 ng/mL時為陽性。TPS試劑盒為美國BPB Biomedicals公司提供，VEGF試劑盒由美國R＆D公司提供。

1.6 統(tǒng)計學方法 使用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析，正態(tài)計量資料用“±s”表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料用以例數(shù)或者百分比或率表示，用χ2檢驗處理，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義 。

2 結(jié)果

2.1 2組患者血清中TPS、VEGF水平比較 實驗組患者血清中TPS、VEGF陽性率及水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 術(shù)前2組患者血清中TPS、VEGF水平比較情況(±s)Tab.1 Comparison of TPS、VEGF before operation(±s)

表1 術(shù)前2組患者血清中TPS、VEGF水平比較情況(±s)Tab.1 Comparison of TPS、VEGF before operation(±s)

*P＜0.01，與對照組比較，compared with control group

組別 例數(shù)TPS陽性例數(shù)［n(%)］濃度(ng/mL)VEGF陽性例數(shù)［n(%)］濃度(ng/mL)對照組36 3(8.33) 7.65±1.57 6(16.67)95.32±12.95實驗組68 47(69.12)* 28.31±4.49* 39(57.35)* 201.14±23.21*t/χ2 － 34.84 26.70 15.87 25.31 P － ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 術(shù)后實驗組血清中TPS、VEGF水平比較 術(shù)后治療后血清中TPS、VEGF水平均明顯低于術(shù)前水平，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 實驗組血清中TPS、VEGF水平比較情況(±s，ng/mL)Tab.2 Comparison of TPS，VEGF of experiment group(±s，ng/mL)

表2 實驗組血清中TPS、VEGF水平比較情況(±s，ng/mL)Tab.2 Comparison of TPS，VEGF of experiment group(±s，ng/mL)

△P＜0.01，與根治術(shù)后比較，compared with after operation

?

2.3 不同期別乳腺癌患者血清中TPS、VEGF水平比較TPS、VEGF水平0期與Ⅰ期比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，Ⅰ～Ⅲ期 TPS、VEGF水平隨著乳腺癌期別濃度升高，其余兩兩比較，TPS、VEGF水平具有明顯差異，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，如表3。

表3 不同時期乳腺癌患者血清中TPS、VEGF水平比較(±s，ng/mL)Tab.3 Comparison of TPS，VEGF at different times of breast cancer patients(±s，ng/mL)

表3 不同時期乳腺癌患者血清中TPS、VEGF水平比較(±s，ng/mL)Tab.3 Comparison of TPS，VEGF at different times of breast cancer patients(±s，ng/mL)

#P＜0.05，與0期比較，compared with grade 0;*P＜0.05，與Ⅰ期比較，compared with gradeⅠ;△P＜0.01，與Ⅱ期比較，compared with gradeⅡ

TNM分期 例數(shù)TPS VEGF 0 11 8.26±1.09 113.58±12.94Ⅰ19 13.94±2.18# 154.28±24.25#Ⅱ25 34.57±3.32#* 205.75±18.42#*Ⅲ13 51.95±4.15#＊△ 275.31±21.63#＊△

2.4 乳腺癌患者TPS、VEGF表達與臨床分期的相關(guān)性 乳腺癌患者TPS與臨床分期的相關(guān)性(r=0.876，P＜0.01)，乳腺癌患者VEGF表達與臨床分期的相關(guān)性(r=0.903，P＜0.01)。

2.5 乳腺癌患者血清中TPS、VEGF表達與臨床病理特征的關(guān)系比較 68例原發(fā)性乳腺癌患者，腫瘤直徑≤2 cm與腫瘤直徑＞2 cm比較，血清中TPS表達無統(tǒng)計學差異，VEGF表達水平在腫瘤直徑≤2 cm組明顯低于腫瘤直徑＞2 cm組，差異有統(tǒng)計學意義(t=29.33，P＜0.05);腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與腋下淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組患者血清中TPS和VEGF濃度差異有統(tǒng)計學意義，(t值分別為49.76，19.54，P＜0.05);TPS和VEGF濃度在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目≤3個和＞3之間沒有差異，TPS濃度水平在雌激素受體陰性、孕激素受體陰性中明顯高于雌激素和孕激素陽性組(t值分別為26.58，20.59，P＜0.05);VEGF濃度水平在雌激素受體、孕激素受體陰性組和陽性組中差異無統(tǒng)計學意義，見表4。

表4 乳腺癌患者血清中TPS、VEGF表達與臨床病理特征的關(guān)系比較(±s，ng/mL)Tab.4 Comparison of TPS，VEGF of clinicopathological characteristics(±s，ng/mL)

表4 乳腺癌患者血清中TPS、VEGF表達與臨床病理特征的關(guān)系比較(±s，ng/mL)Tab.4 Comparison of TPS，VEGF of clinicopathological characteristics(±s，ng/mL)

*P＜0.05，相同特征的兩兩比較，compared with the same features

特征 分組 例數(shù)TPS VEGF腫塊直徑(cm) ≤2 41 20.15±3.35 162.35±15.81＞2 27 19.31±2.34 267.38±24.94*腋下淋巴結(jié) － 28 18.32±3.23 158.26±18.64+ 40 44.31±2.85* 226.29±21.83*淋巴結(jié)數(shù)目(個) ≤3 39 38.65±4.38 201.64±25.62＞3 29 40.39±4.48 211.36±19.58雌激素受體 － 31 49.35±6.14 204.31±24.62+ 37 28.26±2.26* 199.49±16.64孕激素受體 － 42 43.27±6.38 201.54±24.53+ 26 23.69±4.56*198.43±15.12

3 討論

乳腺癌在女性惡性腫瘤的發(fā)病率為第一，嚴重威脅女性生命健康。乳腺作為多種內(nèi)分泌激素的靶器官，常因雌酮及雌二醇激素刺激而引起乳腺上皮細胞增生，再加上環(huán)境、飲食等因素延長或加強對乳腺上皮的刺激，使增生惡性改變，從而出現(xiàn)乳腺癌［7］。乳腺癌好發(fā)于中年婦女，年輕女性乳腺癌發(fā)病率較小，但近年來隨著人民飲食習慣、環(huán)境因素、工作壓力等原因，年輕女性乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。乳腺癌早期診斷是預(yù)防乳腺癌、治療及提高女性生活質(zhì)量的重要途徑，但目前臨床常用乳腺癌腫瘤標志物的敏感性較差，無法作為早期診斷和篩查乳腺癌的依據(jù)，研究表明［8］，TPS能夠特異性反映腫瘤細胞的增生程度，VEGF能夠反映新生血管的重要調(diào)節(jié)因子，通過檢測患者TPS、VEGF水平能夠反映機體腫瘤的發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，與手術(shù)前相比，乳腺癌進行根治術(shù)后患者血清中TPS、VEGF水平明顯降低(P＜0.05)，手術(shù)切除了病變的乳腺，阻止了乳腺上皮細胞的大量增殖惡變，從而減少了TPS的表達，釋放入血的TPS也隨之減少;惡性病灶的切除，患者機體內(nèi)沒有新生物的需要新生血管進行營養(yǎng)供應(yīng)，體內(nèi)的VEGF的分泌也隨之減少，因此，乳腺癌根治術(shù)后患者血清中TPS、VEGF表達水平明顯降低，甚至降至正常水平。

組織多肽特異性抗原(TPS)是位于細胞角蛋白18片段上的M3抗原決定簇，細胞角蛋白在上皮細胞及上皮源性惡性細胞中大量存在，而不存在其他組織細胞中，因此TPS能夠特異性反應(yīng)上皮來源惡性腫瘤增殖活躍程度［9］。當上皮源性惡性細胞大量增殖，TPS將大量表達并大量釋放入血，血清中TPS含量的高低反映上皮源性惡性細胞的增殖分裂程度，在上皮源性惡性腫瘤的診斷、評估和預(yù)后提供了重要的依據(jù)［10］。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是肝素結(jié)合活性的同源二聚體多肽，具有強大的血管滲透功能，在腫瘤細胞生長和新生血管建立過程中提供營養(yǎng)，并能促進內(nèi)皮細胞分裂和血管重建，加速腫瘤新生血管的形成，血清中VEGF水平增高為腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移提供重要的診斷依據(jù)［11］。本研究結(jié)果示，乳腺癌患者血清中TPS、VEGF水平高水平表達，提示TPS、VEGF可作為乳腺癌早期診斷的腫瘤標志物。乳腺癌為乳腺上皮細胞增生惡變，乳腺上皮細胞增殖時釋放大量的TPS入血，新生物需要營養(yǎng)供應(yīng)，刺激新生瘤體分泌VEGF生成新血管為新生物提供營養(yǎng)。

實驗研究結(jié)果顯示，隨著TNM分期的增加，患者血清中TPS和VEGF表達水平也隨之升高，說明血清中TPS和VEGF與乳腺癌的臨床分期關(guān)系密切。TNM分期越早，說明腫瘤越局限，TNM分期越晚則腫瘤的范圍越大，細胞分裂增殖越活躍，也需要大量的營養(yǎng)供應(yīng)，因此TPS和VEGF高水平表達，提示腫瘤分期越晚，同時也提示患者預(yù)后越差。

研究顯示［12］，血清中TPS水平與腫瘤大小無關(guān)，而VEGF表達水平與腫瘤大小關(guān)系密切。TPS水平的表達取決于腫瘤細胞生物學的活性，即使腫瘤負荷小，若腫瘤細胞分裂增殖活躍，TPS仍可處于一個高水平的表達;腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移需要新生血管的營養(yǎng)供應(yīng)，當腫瘤的直徑大于2 mm時就需要新生血管進行營養(yǎng)供應(yīng)，腫瘤直徑越大則需要更多的新生血管進行營養(yǎng)支持，VEGF能夠促進腫瘤新生血管的構(gòu)建，故VEGF表達水平能夠反映腫瘤負荷的敏感性指標［13］。淋巴轉(zhuǎn)移是乳腺癌主要的轉(zhuǎn)移方式，腋窩淋巴結(jié)是乳腺癌最常見轉(zhuǎn)移的淺表淋巴結(jié)，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是評價乳腺癌預(yù)后的重要指標之一［14］。研究結(jié)果顯示［15］，TPS和VEGF水平在有淋巴轉(zhuǎn)移組中明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示TPS和VEGF表達水平與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，同時乳腺癌患者血清中TPS和VEGF水平高表達，提示患者有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能，預(yù)后較差;本研究結(jié)果顯示，雌激素受體和孕激素受體陰性組TPS水平明顯高于陽性組，說明TPS水平與雌激素和孕激素關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)［16］，雌激素和孕激素受體陽性乳腺癌患者相對于激素受體陰性患者腫瘤分化較好，惡性度較低，轉(zhuǎn)移發(fā)生率較低，內(nèi)分泌治療敏感。高分化腫瘤細胞分離增殖活躍度較低，分泌釋放入血的TPS水平較低，故乳腺癌患者TPS水平可對乳腺癌治療進行評估具有一定的指導意義。

綜上所述，乳腺癌患者血清中TPS和VEGF水平呈現(xiàn)高表達，可用作乳腺癌早期診斷的腫瘤標志物;血清中TPS水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體陽性、孕激素受體陽性中呈高表達，提示TPS水平可作為乳腺癌評估和預(yù)后的重要指標;血清中VEGF水平在腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中呈現(xiàn)高表達，提示VEGF水平可作為腫瘤負荷和預(yù)后的評估指標。

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