奶牛環(huán)形泰勒蟲病的診斷

張文燕

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，河北保定070001）

奶牛環(huán)形泰勒蟲病的診斷

張文燕

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，河北保定070001）

1 前言

奶牛環(huán)形泰勒焦蟲病是由泰勒科泰勒屬的環(huán)形泰勒焦蟲引起的一種對牛危害嚴(yán)重的血液原蟲病。環(huán)形泰勒蟲病是一種地方性流行病，該病現(xiàn)在在南非和南歐非常流行，并通過中東、印度和俄羅斯南部傳到中國。在我國，該病主要流行于西北、華北和東北地區(qū)。在流行區(qū)，該病經(jīng)殘緣璃眼蜱傳播。該病有明顯的季節(jié)性，從5月份開始，6～7月份達(dá)到高峰，8月份逐漸減少；在年齡方面，以6月齡至2歲的牛最為易感，若從非疫區(qū)引進的牛，不論年齡、體質(zhì)，均可發(fā)病，且病情較為嚴(yán)重，死亡率亦極高?；疾〉挠着x免疫可達(dá)2.5～6年。該病病原體經(jīng)蜱傳給牛只后，在巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞內(nèi)寄生，常引起以高熱、貧血、消瘦和體表淋巴結(jié)腫脹為主要特征的臨床癥狀。

近年來，奶牛環(huán)形泰勒蟲病的發(fā)病率呈上升趨勢，尤其是對改良的新品種以及外地引進的牛的危害更為嚴(yán)重，這嚴(yán)重影響了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。所以，對這種病進行診治研究是非常具有現(xiàn)實意義的。為此，對該病的防治進行了多方面研究，并研制出了牛環(huán)形泰勒焦蟲裂殖體膠凍細(xì)胞苗，對牛環(huán)形泰勒蟲病起到了控制作用，降低了經(jīng)濟損失，但牛焦蟲細(xì)胞苗的保存期較短，難以推廣。

近年來，環(huán)形泰勒焦蟲病發(fā)病區(qū)未見縮小，反而隨著養(yǎng)牛場之間的引種呈擴大趨勢，該病對養(yǎng)牛業(yè)危害仍然很嚴(yán)重。若從根本上控制本病的發(fā)生和發(fā)展，應(yīng)該一方面研究更為有效的疫苗來預(yù)防該病，另一方面應(yīng)做好消滅傳播媒介（蜱）的工作。

本病診療工作，主要通過流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)合臨床癥狀和病理變化特征，初步疑似為本病，最后實驗室檢查確診為牛環(huán)形泰勒焦蟲病。合理、科學(xué)診斷該病，將有助于該病及時治療和控制，同時也為養(yǎng)牛業(yè)預(yù)防和控制該病提供有益經(jīng)驗。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 試劑

姬姆薩染液，配制方法如下：

取市售姬氏染色粉0.5克，中性甘油25.0毫升、無水中性甲醇25.0毫升先將姬氏染色粉置研缽中，加少量甘油充分研磨，再加再研磨，直到甘油全部加完為止。將其倒入60～100毫升容量的小口試劑瓶中，在研缽中加少量甲醇以沖洗甘油染液，沖洗液仍倒入上述瓶中，再加，再洗，再倒入，直至25.0毫升甲醇全部用完為止。塞緊瓶塞，充分搖勻，放置65℃溫箱24小時或室溫3～5天。并不斷搖動，此即為原液。染色時取原液2.0毫升至100毫升蒸餾水中，混勻即可用于染色。

2.1.2 培養(yǎng)基

鮮血瓊脂培養(yǎng)基，參照姚火春等方法，具體步驟如下：

稱取10克瓊脂，加到500毫升普通肉湯內(nèi)，加熱煮沸，待瓊脂完全融化后，將PH調(diào)至7.4，再加熱煮沸20分鐘。用蒸餾水濕潤夾有薄層脫脂棉的紗布過濾，高壓蒸汽滅菌。

將滅菌的普通瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，待冷卻至50℃左右，加入采自健康綿羊或家兔的脫纖無菌血液（每100毫升普通瓊脂加入鮮血5～6毫升），混勻后倒入滅菌平皿。待凝固后，置37℃培養(yǎng)24小時，無菌檢驗合格方可保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 發(fā)病情況

本次病例來自一家養(yǎng)牛場，經(jīng)場內(nèi)工作人員介紹，先前發(fā)病及病死牛均經(jīng)進行了血相檢測，發(fā)現(xiàn)無白細(xì)胞或白細(xì)胞明顯降低，紅細(xì)胞沉降系數(shù)正常。同時，該場按抗菌、解熱原則進行了治療，發(fā)病牛均用丁胺卡鈉和頭孢噻圬鈉等輸液治療，除一頭發(fā)病牛癥狀減輕外，其他牛病情無明顯改善，仍然精神沉郁，食欲廢絕，氣喘，最終以死亡為轉(zhuǎn)歸。

2.2 方法

2.2.1 流行病學(xué)調(diào)查

調(diào)查該場飼養(yǎng)規(guī)模，引種情況，發(fā)病及死亡情況，發(fā)病史等。

2.2.2 臨床癥狀觀察

觀察病牛精神，體溫，食欲，毛發(fā)，糞便，尿液狀況。

2.2.3 剖檢病變觀察

剖檢其中3頭病?；虿∷琅?，觀察其體表病變及內(nèi)部臟器病變情況。

2.2.4 病原學(xué)檢查

細(xì)菌分離：用一次性真空采血管對病牛進行無菌采血，另取病死牛的肺、肝、腎、淋巴結(jié)等器官，無菌保存，對無菌采集的血液以及剖檢的實質(zhì)性器官進行細(xì)菌分離，分別在血平板劃線和觸片，培養(yǎng)分離細(xì)菌。

血液原蟲檢查：取所采集的病牛血液及穿刺的淋巴液滴于載玻片上，用蓋玻片小心推片，制成涂片，干燥后滴加2～3滴甲醇到涂片上，使其固定后用姬姆薩氏液染色30分鐘左右，蒸餾水水洗，干燥后鏡檢。

淋巴內(nèi)容物檢查：穿刺牛體表淋巴將淋巴內(nèi)容物涂片，姬姆薩氏液染色后鏡檢。

3 結(jié)果

3.1 發(fā)病情況調(diào)查

該養(yǎng)殖場共飼養(yǎng)奶牛4000頭，其中有2000頭是由本場自繁自養(yǎng)的，其余2000頭是從外地牛場引進的，其中部分引進牛只來自東北地區(qū)。本次疫情中，發(fā)病牛均為本地牛，引進牛未見發(fā)病。發(fā)病10日左右共計死亡10頭。之前本場無該病的發(fā)病史。

3.2 臨床癥狀

病牛主要表現(xiàn)精神沉郁、食欲廢絕、被毛蓬亂、軀體消瘦，部分病牛神經(jīng)癥狀明顯，呼吸急促，全身無力，行走搖擺，結(jié)膜貧血、黃染，尿液發(fā)黃，糞便呈黑色，鼻孔流清白黏液，有些牛鼻孔可見泥土，部分牛胸前或覆下水腫。早期體溫升高，到后期體溫不升高。

3.3 病理變化

剖檢可見，病牛全身皮下、肌間、黏膜和漿膜上均有大量的出血點和出血斑。全身淋巴結(jié)腫大，切面多汁，有暗紅色和灰白色大小不一的結(jié)節(jié)。胸腔內(nèi)有大量的紅色滲出液，心肌有彌漫性出血點，心房有出血斑，心脂肪有出血點和出血斑，肺水腫和氣腫明顯且被膜有瘀血斑和出血斑肺門淋巴結(jié)腫大。瓣胃堅實難以剖開，皺胃黏膜腫脹，有許多針頭至黃豆大、暗紅色或黃白色的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)部上皮細(xì)胞壞死后形成中央凹陷、邊緣不整有稍隆起的潰瘍病灶，胃黏膜脫落。脾臟明顯腫大，被膜上有出血點，脾髓質(zhì)軟呈黑色糊狀。腎臟腫大、質(zhì)軟，有粟粒大暗紅色病灶，外膜易剝離。肝臟腫大，質(zhì)脆，色澤灰紅，被膜有多量出血點和出血斑，肝門淋巴結(jié)腫大，膽囊腫大黃染。血液稀薄呈淡紅色，不易凝固。

從圖1可知，明顯地可看出病死牛心臟脂肪有大小不等的出血；圖2可知，心肌出血點或出血斑；圖3可知，腸黏膜上有明顯的出血斑；圖4可知，胃壁上大小不等出血點。

圖1 心脂肪出血

3.4 病原學(xué)檢查結(jié)果

3.4.1 細(xì)菌分離

用血液和臟器作血平板劃線和觸片培養(yǎng)后，均未見有細(xì)菌生長，排除該病為細(xì)菌性疾病的可能性。

3.4.2 血液蟲體檢查結(jié)果

在對無菌采集的病牛作血液涂片后，采用姬姆薩染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞內(nèi)有多量小于紅細(xì)胞半徑的環(huán)形泰勒蟲病原體，細(xì)胞內(nèi)蟲體呈梨形、環(huán)形或橢圓形。染色結(jié)果見圖5。

圖2 心肌出血

圖3 腸黏膜出血

圖4 胃壁出血

圖5 吉姆薩染色結(jié)果

3.4.3 淋巴結(jié)穿刺淋巴內(nèi)容物涂片檢查結(jié)果

可見到淋巴細(xì)胞內(nèi)有圓形、橢圓形的石榴體。

4 討論

4.1 診斷關(guān)鍵

該病與牛巴貝斯焦蟲、牛雙芽巴貝斯焦蟲在臨床癥狀和剖檢變化上較為相似，同時染色時應(yīng)與附紅細(xì)胞體病原體作區(qū)別，以防出現(xiàn)誤診，延誤治療時機，造成大的經(jīng)濟損失。在本次疾病診斷過程中，先根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、發(fā)病牛的臨床癥狀及剖檢病變作出初步推斷，確診本病需要進行病原學(xué)檢查，在對無菌采集的血液涂片進行姬姆薩染色后，鏡檢發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞內(nèi)有多量小于紅細(xì)胞半徑的環(huán)形泰勒蟲病原體，從而確診為本病。雖然在本次疫情中，有部分癥狀及病變與某些細(xì)菌性疾病及牛巴貝斯焦蟲、牛雙芽巴貝斯焦蟲病相似，本人在實驗室病原學(xué)檢查過程中，細(xì)菌分離培養(yǎng)未見有細(xì)菌生長，可排除細(xì)菌性疾病的可能性。

診斷牛環(huán)形泰勒蟲病還應(yīng)注意與牛雙芽巴貝斯蟲病相區(qū)別。有些獸醫(yī)工作者常把可視黏膜黃染、出血、有血紅蛋白尿作為診斷牛環(huán)形泰勒蟲病的臨床依據(jù)。牛感染泰勒蟲發(fā)病時，可視黏膜常表現(xiàn)貧血和出血，這是由于蟲體在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)進行大量無性繁殖抑制了造血功能，導(dǎo)致紅細(xì)胞發(fā)育不良、增生緩慢而引起的，再加上毒素對組織器官的破壞作用，致使血管壁通透性增強，發(fā)生出血斑塊。當(dāng)蟲體進入紅細(xì)胞后，一般不再進行裂體繁殖，所以對紅細(xì)胞的溶血和破壞作用都遠(yuǎn)比雙芽巴貝斯蟲小，故臨床上很少能見到可視黏膜黃染和血紅蛋白尿。當(dāng)?；茧p芽巴貝斯蟲病時，由于蟲體在紅細(xì)胞內(nèi)以成對出牙的生殖方式進行無性繁殖，蟲體對紅細(xì)胞的大量破壞引起溶血性貧血，此時血紅蛋白轉(zhuǎn)變成膽紅素滯留于血液中引起黃疸，可視黏膜被黃染，當(dāng)一部分血紅蛋白隨尿液排出時，則出現(xiàn)血紅蛋白尿。因此，臨床可視黏膜黃染程度、血紅蛋白尿的有無是區(qū)別泰勒蟲病和雙芽巴貝斯蟲病的重要依據(jù)。對附紅細(xì)胞體鏡檢時，可見紅細(xì)胞邊緣不整齊，呈菜花狀或星狀，紅細(xì)胞表面有許多圓形、橢圓形紫紅色蟲體，折光性較強，寄生在紅細(xì)胞表面還可寄生在血漿中，且姬姆薩染色中變形體較為常見。另外，80％以上附紅細(xì)胞體寄生于紅細(xì)胞邊緣，圓形，邊緣整齊。一個紅細(xì)胞可以附著1～16個蟲體，甚至更多，個體較小，0.3～0.8微米。當(dāng)它在繁殖階段時，蟲體呈多樣性，有圓形、三角形等，但在帶蟲階段一般呈圓形。

4.2 帶蟲免疫

牛只建立焦蟲病帶蟲免疫后，即意味著這些牛發(fā)生焦蟲病的可能性已顯著降低，但建立帶蟲免疫功能時，必須嚴(yán)格控制焦蟲病的感染率。因為牛感染焦蟲過多即使不發(fā)病也會影響牛的生長發(fā)育及引起皮炎，同時也會引發(fā)其他疾病的發(fā)生，所以在建立帶蟲免疫功能的過程中，應(yīng)密切注意牛只的感染狀態(tài)。

4.3 流行要素

焦蟲病在我國主要流行于西北、華北和東北地區(qū)。構(gòu)成該病流行的基本要素有三種，即病原體（焦蟲）、硬蜱和易感動物，三者形成一個流行的鏈環(huán)，缺少其中任何一個因素就不可能有焦蟲病的發(fā)生和流行。鑒于該病危害性大治愈率低且無特效藥，因此，主要應(yīng)采取綜合措施防制該病的發(fā)生。

焦蟲病原是該病流行的重要因素之一，在對該奶牛場進行問診時發(fā)現(xiàn)，該場4000頭奶牛中除2000頭是自繁自養(yǎng)外，還有部分是從東北某牛場引進的，我國東北是焦蟲病主要發(fā)病區(qū)，上述外來牛可能成為本病重要傳染源之一。但該場在引進時又未做嚴(yán)格的隔離觀察及相關(guān)檢查，引入病?；騻鞑ッ浇椋纾?，引發(fā)了本次疾病的發(fā)生。由于外地牛生存于該病原體的環(huán)境中，對其有一定的耐受性或帶蟲免疫能力，而本地牛卻未曾接觸過該病原，對病原體較為敏感，因此，本次疫情發(fā)病牛主要為本地牛。由此可見，應(yīng)加強檢疫，嚴(yán)格控制牛只調(diào)動，以防本病。若確需引進牛只，應(yīng)選擇蜱不在牛體活動的時期進行，應(yīng)從非疫區(qū)引進，且對引進的牛只進行隔離觀察及作相應(yīng)檢查后再合群。

本病的發(fā)生還與畜主對蜱等吸血昆蟲的危害性認(rèn)識不清，對消滅奶牛場的各種寄生蟲重視不夠。任蜱等吸血昆蟲在該奶牛場生長、傳播有關(guān)。要消滅牛環(huán)形泰勒焦蟲病，預(yù)防的關(guān)鍵是在滅蜱。應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)仳绲幕顒右?guī)律和生活習(xí)性，制定滅蜱措施，嚴(yán)格執(zhí)行，并要始終堅持防重于治。在發(fā)病季節(jié)，每隔15～20天，用辛硫磷澆潑劑，經(jīng)自來水500倍稀釋后，噴霧牛體、牛舍、牛床及周圍環(huán)境等處滅蜱。同時，配合使用伊維菌素散劑按0.2毫克/千克體重拌料口服，每月1次，進行滅蜱，尤其在蜱蟲活動季節(jié)，需嚴(yán)防蜱和吸血昆蟲對牛體叮咬而傳播疾病。

4.4 綜合防治

藥物預(yù)防可用血蟲凈（主要成分：三氮脒）按5毫克/千克體重，配制成5％的溶液，每隔20天給牛注射1次，還可用咪唑苯脲進行肌肉注射預(yù)防，用量為2毫克/千克，這種方法可有效杜絕該病發(fā)生和傳播。

近些年來，經(jīng)過科研工作人員的努力，已經(jīng)研制出了牛環(huán)形泰勒焦蟲裂殖體膠凍細(xì)胞苗，在疫區(qū)對新購進的尚未感染焦蟲的牛只用抗焦蟲病疫苗進行預(yù)防，可起到一定的保護作用。盡管孫世榮等（2000）報道，牛環(huán)形泰勒蟲裂殖體膠凍苗有較好的預(yù)防效果，但疫苗保存期較短，其使用仍難以推廣，各科研單位及個人還需繼續(xù)研究延長細(xì)胞苗保存期的方法，進一步擴大成果的推廣應(yīng)用。此外，在威脅地區(qū)的牛群可因不斷受到蜱的侵襲（可人工接種），部分牛只可能成為長期帶蟲者，故產(chǎn)生長期帶蟲免疫。因此，在老疫區(qū)若不能完根除焦蟲病，可使牛群經(jīng)常帶蟲或感染牛蜱，并使之有一定的免疫能力，但需用抗焦蟲藥物來控制感染的數(shù)量和程度。

加強飼養(yǎng)管理，要注意放牧環(huán)境，認(rèn)真搞好畜舍內(nèi)外衛(wèi)生，在蜱活動季節(jié)及時滅蜱。在發(fā)病季節(jié)到來之前，牧區(qū)放牧避免牛群到蜱大量孳生的牧場上放牧，清除牛舍周圍雜草，噴灑滅蜱藥物。

總之，在奶牛環(huán)形泰勒焦蟲病的防治過程中，應(yīng)貫徹“防治結(jié)合、防重于治”的方針，做好預(yù)防工作。根據(jù)牛場疾病的發(fā)病季節(jié)及當(dāng)?shù)貍鞑フ呱盍?xí)性等地域特征制定一整套防治措施。這樣，不僅可以降低奶牛環(huán)形泰勒焦蟲病的發(fā)病率，同時也是降低飼養(yǎng)成本、減少飼養(yǎng)風(fēng)險的最經(jīng)濟，最有效的方法。另外，近幾年焦蟲和附紅細(xì)胞體及細(xì)菌類等混合感染的病例比較多，所產(chǎn)生的臨床癥狀及病變自然也會有交叉，因此，我們在診斷病情時要綜合考慮，不能只看到其中一種，而忽視另外病因，耽誤治療。