微生態(tài)制劑對(duì)肝硬化自發(fā)性腹膜炎血清PCT、CD64、CRP 的影響

李春英 鄒金海

自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(SBP)是指腹腔內(nèi)無(wú)原發(fā)感染灶和臟器損傷時(shí)出現(xiàn)的急性或者亞急性細(xì)菌性腹膜炎，它是肝硬化嚴(yán)重的并發(fā)癥之一［1］。病死率較高。其發(fā)生和發(fā)展主要與門(mén)靜脈高壓時(shí)腸道菌群紊亂、腸黏膜屏障功能的減弱、腸道細(xì)菌移位和機(jī)體免疫低下等多種因素有關(guān)［2］。臨床目前常用的SBP 診斷方法為腹水培養(yǎng)，但其具有細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率較低及有一定時(shí)限性等不足之處。研究發(fā)現(xiàn)血漿降鈣素原(PCT)、中性粒細(xì)胞CD64 表達(dá)和C-反應(yīng)蛋白(CRP)等炎性指標(biāo)可用于SBP 的早期診斷和療效評(píng)估［3，4］。微生態(tài)制劑輔助治療肝硬化自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎，療效確切。但其對(duì)血漿PCT、CD64 和CRP 的影響筆者所見(jiàn)報(bào)道不多。因此，應(yīng)用微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)失衡，重建腸道的正常菌群，對(duì)肝硬化SBP 的治療有十分重要的意義。我院在應(yīng)用足量抗生素基礎(chǔ)上聯(lián)合微生態(tài)制劑治療SBP 并檢測(cè)治療前后血漿PCT、CD64、CRP 水平，報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1 一般資料我院2013 年6 月至2014 年2 月確診的肝硬化SBP 住院患者46 例(SBP 組)，診斷均符合《病毒性肝炎防治方案》［5］診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中乙型肝炎后肝硬化38 例，丙型肝炎后肝硬化3 例，酒精性肝硬化5 例。將46 例肝硬化SBP 患者隨機(jī)分為微生態(tài)治療組24 例和常規(guī)治療組22 例。微生態(tài)治療組:男16 例，女8 例;年齡22 ～67 歲，平均年齡(49.2±2.9)歲;常規(guī)治療組:男15 例;女7 例，年齡21 ～68 歲，平均年齡(50.4±2.7)歲。另以同期住院20 例肝硬化腹水無(wú)SBP 患者為對(duì)照組，男12 例，女8 例;年齡20～65 歲，平均年齡(50.9±2.1)歲。3 組患者性別比、年齡一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 診斷與排除標(biāo)準(zhǔn)SBP 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6，7］:(1)局部癥狀和(或)腹膜炎表現(xiàn):腹痛、腹部壓痛、嘔吐、腹瀉、腸梗阻;(2)高熱或低熱、寒戰(zhàn)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常、和(或)呼吸急促;(3)肝性腦病無(wú)明確誘因;(4)無(wú)明確原因的急進(jìn)型腎損害;(5)未預(yù)防應(yīng)用抗生素的消化道出血;(6)肝功能惡化;(7)休克;(8)腹水中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥250×106/L;(9)腹水細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性;(10)血清腹水白蛋白梯度(SAAG)≥11 g/L。符合(8)及(10)可確診，符合(10)及(1)～(7)或(9)中至少1 項(xiàng)為臨床疑診。排除標(biāo)準(zhǔn):排除近期有明確繼發(fā)性腹腔感染及其他感染患者、排除14 d 內(nèi)服用過(guò)腸道非吸收性抗生素的肝硬化患者。

1.3 治療方法2 組均給予抗感染、保肝、利尿、降門(mén)脈壓等綜合治療。微生態(tài)治療組在此基礎(chǔ)上加用微生態(tài)制劑培菲康(雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、腸球菌三聯(lián)活菌)420 mg 口服，3 次/d，餐后30 min 溫水服用。2 組均治療7 d。

1.4 實(shí)驗(yàn)室儀器及試劑(1)采用電化學(xué)發(fā)光免疫法(雙抗夾心ELISA 法)檢測(cè)血清降鈣素原。設(shè)備為羅氏e601 電化學(xué)發(fā)光免疫機(jī)，試劑盒由羅氏提供。PCT 以＞0.5 ng/ml 為陽(yáng)性。(2)應(yīng)用美國(guó)BD 公司生產(chǎn)的FACSCalibur 流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行CD64 檢測(cè)。CD64 參考值4 314 mol/cell。(3)應(yīng)用免疫比濁法測(cè)定血清CRP，設(shè)備型號(hào)為日歷7600-120 全自動(dòng)生化分析儀，試劑由森美?？爽敼旧a(chǎn)。CRP 參考值0 ～5 ng/ml。

1.5 標(biāo)本采集2 組患者在入院后24 h 內(nèi)、抗菌藥物使用前及治療7 d 后，分別采集空腹上肢靜脈血測(cè)定PCT、CD64、CRP、血常規(guī)、肝腎功能、凝血功能等檢查。對(duì)照組一次性采血測(cè)定以上指標(biāo)。

1.6 中性粒細(xì)胞CD64 的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)CD64 指數(shù)測(cè)定采用直接免疫熒光檢測(cè)法。血漿經(jīng)離心濃縮后以磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 值7.2 ～7.4)調(diào)整細(xì)胞數(shù)至(1 ～2)×106個(gè)/ml，50 μm 尼龍篩網(wǎng)過(guò)濾，離心濃縮至細(xì)胞數(shù)不少于1×107個(gè)/ml。取100 μl 細(xì)胞懸液，加入以下抗體(所加熒光抗體的體積根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行)，抗體組合為CD45-PerCP+CD64-PE+CD14-FITC，充分混勻，室溫下避光放置20 min，然后加入紅細(xì)胞裂解液，避光孵育10 min，PBS 洗滌2 次，上機(jī)檢測(cè)采用側(cè)向角散射光信號(hào)(side scatter，SSC)和CD45 設(shè)門(mén)檢測(cè)中性粒細(xì)胞群CD64 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及PMN、Lym、Mo 平均熒光強(qiáng)度(mean fluorescent intensity，MFI)。采用FCS Express V3 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s 標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SBP 組與對(duì)照組血漿PCT、CD64、CRP 比較

SBP 組血漿PCT、CD64、CRP 水平較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 SBP 組與對(duì)照組血漿PCT、CD64、CRP 水平比較 ±s

表1 SBP 組與對(duì)照組血漿PCT、CD64、CRP 水平比較 ±s

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.05

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2.2 微生態(tài)治療組與常規(guī)治療組血漿PCT、CD64、CRP 水平比較 微生態(tài)治療組治療前血漿PCT、CD64、CRP 水平和常規(guī)治療組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，但微生態(tài)治療組治療后血漿PCT、CD64、CRP 水平較常規(guī)治療組治療后明顯下降(P ＜0.05)。見(jiàn)表2。

3 討論

肝硬化失代償期患者均存在著不同程度的腸道菌群失調(diào)，特別以雙歧桿菌、擬桿菌以及酵母樣真菌等明顯減少，同時(shí)以下厭氧菌如(腸球菌、大腸埃希菌、梭菌)等顯著增多［8］。肝硬化失代償期時(shí)由于腸道屏障減弱，腸黏膜通透性的增加，腸道細(xì)菌移位以及門(mén)脈高壓門(mén)體分流，肝臟單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能減弱等因素使得有害菌及毒素進(jìn)入全身或腹腔而引起腹膜炎癥。

表2 微生態(tài)治療組與常規(guī)治療組治療前后血漿PCT、CD64、CRP 水平比較±s

表2 微生態(tài)治療組與常規(guī)治療組治療前后血漿PCT、CD64、CRP 水平比較±s

注:與常規(guī)治療組比較，*P ＜0.05

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SBP 是失代償期肝硬化腹水患者的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，SBP 的發(fā)生預(yù)示著患者肝硬化病情較為嚴(yán)重，如無(wú)法及時(shí)有效診斷及治療，會(huì)迅速導(dǎo)致多種并發(fā)癥(如內(nèi)毒素血癥、感染性休克或全身臟器衰竭等)迅速發(fā)展，危及患者生命。但是SBP 的臨床表現(xiàn)不典型，因此患病早期常無(wú)法有效確診。目前診斷多依靠腹水中多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)(PMN)及細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果，但由于大部分SBP 患者伴有不同程度的脾功能亢進(jìn)，大量腹水稀釋了炎性滲出物，同時(shí)PMN 受大量抗生素及腹水中有形成分紅細(xì)胞的影響，其敏感性降低。另腹水細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率低，多在10%～15%［8］，且需時(shí)較長(zhǎng)。

CD64 是免疫球蛋白IgG 的受體。主要存在單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面，在中性粒細(xì)胞表面呈低水平表達(dá)。當(dāng)受到細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖、細(xì)胞集落刺激因子和干擾素-γ 等的刺激可導(dǎo)致CD64 可在中性粒細(xì)胞表面大量表達(dá)［9］。當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染時(shí)，體內(nèi)中性粒細(xì)胞CD64 分子表達(dá)在4 h 內(nèi)明顯增高［10］。PCT 在正常生理狀態(tài)下只由甲狀腺C 細(xì)胞合成，在血漿中含量很少。機(jī)體受感染時(shí)甲狀腺外組織可大量產(chǎn)生PCT［11］。有研究表明，PCT 在細(xì)菌感染患者體內(nèi)水平急劇升高。從感染后4 h 開(kāi)始，6 ～8 h 到達(dá)峰值，此后24 h 持續(xù)保持較高水平［12］。CRP 是指當(dāng)機(jī)體受到微生物侵襲或組織損傷等炎癥性刺激時(shí)，由肝細(xì)胞合成的急性相蛋白，目前是臨床最常用的炎性標(biāo)記物。因此PCT、CD64 及CRP 對(duì)肝硬化SBP 早期診斷具有較高的特異度和敏感度。

SBP 的關(guān)鍵治療，是使腸道的正常菌群得到恢復(fù)，腸道正常的微生態(tài)環(huán)境得到重建，使機(jī)體的免疫功能得到增強(qiáng)，內(nèi)毒素血癥發(fā)生減少。微生態(tài)制劑培菲康是含有雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌三種腸道有益菌的微生態(tài)制劑。肝硬化患者口服后腸道益生菌能迅速有效的得到補(bǔ)充，從而使失調(diào)的腸道菌群得到改善。微生態(tài)制劑培菲康還能充分使外源性致病菌得到抑制甚至殺滅，從而使原生菌群重新成為腸道的優(yōu)勢(shì)菌群，優(yōu)勢(shì)菌群和腸黏膜上皮細(xì)胞共同作用，形成穩(wěn)固的生物學(xué)屏障，使腸道防御功能得到增強(qiáng)，從而恢復(fù)了腸道健康的微生態(tài)平衡環(huán)境［13］。

本研究結(jié)果顯示，SBP 組血漿PCT、CD64、CRP 水平明顯高于對(duì)照組(P ＜0.05)。微生態(tài)治療組治療前血漿PCT、CD64、CRP 水平與常規(guī)治療組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，但微生態(tài)治療組治療后血漿PCT、CD64、CRP 水平較常規(guī)治療組治療后明顯下降(P ＜0.05)。說(shuō)明微生態(tài)制劑輔助治療肝硬化自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎，可降低血中炎性指標(biāo)PCT、CD64、CRP 水平，抑制炎性反應(yīng)，療效確切，安全有效，具有一定的臨床輔助治療作用。

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