高效液相色譜法測(cè)定清淋片中苦參堿含量

賈永亮，李曉燕，李成，盧燕

（1.河北省鹽山縣人民醫(yī)院藥劑科，河北滄州061300；2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北石家莊050035）

高效液相色譜法測(cè)定清淋片中苦參堿含量

賈永亮1，李曉燕2，李成2，盧燕2

（1.河北省鹽山縣人民醫(yī)院藥劑科，河北滄州061300；2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北石家莊050035）

目的建立測(cè)定清淋片中苦參堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為NH2氨基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9），流速1 mL/min，檢測(cè)波長為210 nm。結(jié)果苦參堿進(jìn)樣量在86.697 6～1 812.000 0 ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 99），平均加樣回收率為99.74%，RSD為1.57%（n=9）。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清淋片中苦參堿的含量測(cè)定。

清淋片；苦參堿；高效液相色譜法

清淋片由柴胡、黃芩、大黃、苦參等7味中藥材組方，具有疏解肝經(jīng)氣滯、清化下焦?jié)駸岬墓π?，臨床主要用于治療急性下尿路感染，療效顯著?？鄥槌妓?，其主要活性成分為生物堿和黃酮類［1］，其中苦參堿具有很好的抗炎作用［2-3］。為全面控制清淋片的質(zhì)量，對(duì)苦參中苦參堿進(jìn)行了定量研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器；KQ-250B型超聲波清洗器；AT201型Mettler-Toledo電子天平。苦參堿對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110805-200306）；清淋片（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為130101，130102，130103）；乙腈、無水乙醇為色譜純，其余均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Waters Spherisorb NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長：210 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

取苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含苦參堿0.3 mg的溶液，用鹽酸-甲醇（1∶25）溶液稀釋成每1 mL含苦參堿30 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取樣品研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加80%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）20 min，放冷，密塞，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3mL，加在中性氧化鋁柱（120～150目，4 g，內(nèi)徑1 cm）上，用甲醇洗脫至10 mL的容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取方中除苦參的其他藥材，按制備工藝制得陰性樣品，按供試品溶液的處理方法，得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定?？梢姡瑢?duì)照品溶液與供試品溶液色譜峰保留時(shí)間一致，陰性樣品無干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取質(zhì)量濃度為8.697 6，17.395 2，28.992 0，90.600 0，144.960 0，181.200 0 μg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、苦參堿進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.493 5 X+1.196 6，r=0.999 99（n=6）。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在86.697 6～1 812.000 0 ng范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液各10 μL，在擬訂色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.90%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液各10 μL，分別于0，2，5，8，10，13，24 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為1.71%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖2 高效液相色譜色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品9份，分別取高（0.6 g）、中（0.5 g）、低（0.4 g）3個(gè)劑量，依法測(cè)定。結(jié)果的RSD為1.02%（n=9），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取同一批已知含量的樣品9份，分為3組，分別精密加入25 mL高、中、低3種不同質(zhì)量濃度的苦參堿對(duì)照品80%甲醇溶液，超聲提取，依法測(cè)定結(jié)果，計(jì)算回收率。見表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

耐用性試驗(yàn)：取同一份樣品，分別在不同的測(cè)定波長、柱溫及色譜柱的條件下檢測(cè)苦參堿的含量，結(jié)果在210，208，212 nm波長下檢測(cè)，苦參堿的RSD為0.88%；20，25，30℃的柱溫下檢測(cè)，苦參堿的RSD為0.36%。所考察的兩種色譜柱對(duì)樣品的分離無影響，因此測(cè)定條件的微小變動(dòng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果無影響。

2.4 樣品含量測(cè)定

用所制訂的含量測(cè)定方法，對(duì)3批清淋片進(jìn)行了苦參堿的含量測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為130101，130102，130103的3批樣品中苦參堿的含量分別為每片1.967，1.985，1.972 mg。

3 討論

本研究中曾采用2010年版《中國藥典（一部）》苦參項(xiàng)下苦參堿含量測(cè)定的流動(dòng)相［4］，但苦參堿的保留時(shí)間較短，不利于樣品分析，特別是對(duì)處方藥味較多的制劑色譜峰分離較差。經(jīng)反復(fù)調(diào)整流動(dòng)相比例，確定流動(dòng)相為乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9），色譜峰分離良好。

對(duì)苦參堿對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果苦參堿在200 nm處有最大吸收，其他成分無干擾，因此選擇210 nm為檢測(cè)波長。

曾選擇70%，80%，90%及甲醇進(jìn)行提取，結(jié)果以甲醇作為提取溶劑時(shí)苦參堿的含量較低，而含水甲醇提取時(shí)苦參堿的含量較高，且不同含水甲醇苦參堿的含量相差不大。當(dāng)選擇80%甲醇，雜質(zhì)峰較多，不利于苦參堿的測(cè)定，以甲醇作洗脫劑色譜峰分離良好，且10 mL即可洗脫完全。考慮到氧化鋁的質(zhì)量會(huì)影響含量測(cè)定，因此選擇不同廠家及不同批號(hào)氧化鋁進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，市場(chǎng)上常用的氧化鋁均可用于苦參堿的含量測(cè)定。

文獻(xiàn)［5-8］均采用氯仿萃取或上氧化鋁柱、氯仿洗脫，亦有采用緩沖鹽作流動(dòng)相、氯仿提取的處理方法［9-10］。本研究中供試品溶液制備方法采用常規(guī)的含水甲醇作提取溶劑及用甲醇作洗脫劑，與采用三氯甲烷相比，降低了有毒試劑的危害，利于環(huán)保，且方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，易操作。

［1］苗抗立，張建中，董穎，等.苦參的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，13（2）：69-73.

［2］焦霞，沈其昀.苦參生物堿的臨床及藥理研究進(jìn)展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2002，13（3）：192-194.

［3］戴五好，錢利武，楊士友，等.苦參、山豆根生物堿及其總堿的抑菌活性研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（3）：177-180.

［4］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：188-189.

［5］周世玉，周曉英，唐婧坤.高效液相色譜法測(cè)定苦參片中苦參堿的含量［J］.中國藥業(yè)，2011，20（7）：27-28.

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［7］任永紅，馮紹華.HPLC法測(cè)定康婦靈片中苦參堿和氧化苦參堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2009，13（2）：154-155.

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［9］楊芳.高效液相色譜法測(cè)定瀉停封膠囊中苦參堿含量［J］.中國藥業(yè)，2011，20（24）：52-53.

［10］覃振明，孔曉龍，莫鳳珍，等.軟堅(jiān)護(hù)肝片中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2011，33（7）：882-884.

Determination of Matrine in Qinglin Tablets by HPLC

Jia Yongliang1,Li Xiaoyan2,Li Cheng2,Lu yan2
（1.Hebei province Yanshan County People′s Hospital Department of Pharmacy,Cangzhou,Hebei,China061300；2.Hebei Yiling Medicine Institute,Shijiazhuang,Hebei,China050035）

ObjectiveTo establish a method for content determination of matrine in Qinglin Tablets.MethodThe NH2column（250 mm× 4.6 mm，5 μm）was used.Mobile phase：acetonitrile-ethanol absolute-2%phosphoric acid solution（84∶7∶9）.Flow rate：1 mL/min.The detection wavelength：210 nm.ResultsThe calibration curve of matrine showed a good linearity within the range of 86.697 6-1 812.000 0 ng（r=0.999 99）.The average recovery was 99.74%and RSD was 1.57%（n=9）.ConclusionThe method is convenient,accurate and reproducible to operate and suitable for the quality control of Qinglin tablets.

Qinglin Tablets；matrine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0073-02

賈永亮（1975-），男，主管藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑質(zhì)量檢測(cè)，（電子信箱）872416195@qq.com；李曉燕（1974-），女，滿族，高級(jí)工程師，主要從事中藥新藥開發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，本文通訊作者，（電話）0311-85901590（電子信箱）sjzyllxy@163.com。

2014-10-27；

2015-04-02）