海南糞箕篤根莖中總生物堿含量的測定

程 彬，戴 華，白麗麗*

(1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南?？?71199;2.海南醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，海南?？?71199)

糞箕篤(Stephania longaL.)為防己科千金藤屬植物，多年生草質(zhì)藤本，廣泛分布于廣東、福建、臺灣、海南等我國南部地區(qū)［1］。在海南全省各地可見，生于村邊或曠野灌木叢中，是天然的南藥資源。全株可入藥，味辛、性平，具有清熱解毒、利濕消腫、袪風(fēng)活絡(luò)、抑菌、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效［2-3］。該屬植物富含生物堿，近年來對該屬植物的化學(xué)成分及藥理進(jìn)行研究［4-8］，但有關(guān)糞箕篤總生物堿含量的測定鮮有報(bào)道。筆者主要采用分光光度法，以鹽酸小檗堿為對照品，對海南糞箕篤根莖中的總生物堿進(jìn)行含量測定，為糞箕篤及其千金藤屬其他植物的藥用開發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器 UV1600型紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器有限公司);PHS-3C型酸度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);B210S分析天平(北京賽多利斯有限公司)。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號110713-201212，純度86.7%);糞箕篤藥材(采自海南文昌)，經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院曾念開副教授鑒定為糞箕篤Stephania longaL.根莖，晾干粉碎后備用。所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試液配制。

1.3.1.1 對照品溶液的制備。精密稱取在110℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品10.1 mg置于50 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，按86.7%計(jì)算，即得175 μg/ml。

1.3.1.2 供試品溶液的制備。糞箕篤粉末約2.0 g精密稱量6份，置于圓底燒瓶中，用85%乙醇回流2 h，濃縮后經(jīng)氯仿提取，于100 ml容量瓶中定容至刻度，低溫冷藏、備用。

1.3.1.3 顯色液和緩沖液的配制。按藥典方法配制溴甲酚綠酸性染料溶液，以及pH=5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液［9］。

1.3.2 吸收波長的選擇。精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液各0.5 ml，置分液漏斗中，加檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0 ml，溴甲酚綠溶液2.0 ml，搖勻，加入氯仿10.0 ml，充分振搖，靜置1 h，分出氯仿層，于200～600 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，同時以氯仿作為空白參比液。

1.3.3 方法學(xué)考察。

1.3.3.1 線性關(guān)系考察。精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，加水 0.9、0.8、0.7、0.5、0.3、0.1 ml，按“1.3.2”項(xiàng)操作，充分振搖后，靜置1 h，分出氯仿層。室溫放置40 min后，在421 nm下測定吸光度值，同時以氯仿為空白對照。

1.3.3.2 穩(wěn)定性考察。取供試品溶液，在室溫和室內(nèi)光照條件下密閉放置，分別在0、5、10、30、60、120 min 時測定吸光度值。

1.3.3.3 精密度試驗(yàn)。精密量取對照品溶液0.5 ml，余下操作同“1.3.2”項(xiàng)，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)。取供試品溶液6份，操作同“1.3.2”項(xiàng)，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)。取6份供試品溶液，分別加入175 μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液0.23 ml，依照“1.3.2”項(xiàng)操作，在421 nm波長處測定吸光度值。

1.3.4 總生物堿含量的測定。取供試品溶液6份，每份0.5 ml，用氯仿定容至10.0 ml，按“1.3.2”項(xiàng)操作，分別測得吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行含量計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 波長的選擇 取供試品與對照品在200～600 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示(圖1)，鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液均在421 nm處有吸收峰，而空白參比液在 421 nm處沒有吸收，故該試驗(yàn)選擇421 nm作為測定波長。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系的考察。精確量取對照品溶液，在421 nm處測其吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)，得出線性回歸方程為A=0.074 0C+0.014 5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，在濃度 0 ～15.75 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)。平行測定6次，得其RSD=0.20%(n=6)，表明供試品溶液在0～120 min內(nèi)基本穩(wěn)定，滿足試驗(yàn)要求。

2.2.3 精密度試驗(yàn)。平行測定6次，得其RSD=0.16%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)。平行測定6次，得其RSD=2.20%(n=6)，表明重現(xiàn)性較好，符合試驗(yàn)要求。

2.2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)。由表1可知，該法回收率為102.75% ～103.57%，平均回收率為103.21%，RSD=0.30%(n=6)，表明回收率較好，符合試驗(yàn)要求。

表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 總生物堿含量的測定 平行測定6份試液，由表2可知，糞箕篤根莖中總生物堿含量為0.38% ～0.40%，平均含量為0.39%，RSD=2.20%(n=6)。

表2 糞箕篤根莖中總生物堿含量測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

采用分光光度法測定糞箕篤根莖中總生物堿含量平均為0.39%，操作簡便快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。溴甲酚綠顯色法測定總生物堿含量時，選擇合適的pH很重要，其他條件對測定結(jié)果影響較?。?0］，故該試驗(yàn)參考文獻(xiàn)［9］選定pH=5.4。該方法與液相色譜法比較，具有所用儀器簡單、操作方便、耗時少的優(yōu)點(diǎn)。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編寫委員會.中國植物志，第三十卷［M］.北京:科學(xué)出版社，1996:41.

［2］代正福，彭明，戴好富.海南中藥資源圖集 第1集［C］.昆明:云南科技出版社，2010.

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