皮層下帶狀灰質(zhì)異位的DCX和LIS1基因檢測(cè)

歐陽梅李淡芳張佩琪李花胡湘蜀劉興洲

皮層下帶狀灰質(zhì)異位的DCX和LIS1基因檢測(cè)

歐陽梅*李淡芳*張佩琪*李花*胡湘蜀*劉興洲*

目的 對(duì)皮層下帶狀灰質(zhì)異位癥（subcortical band heterotopias，SBH，雙皮層綜合征）患者進(jìn)行已經(jīng)證實(shí)的致病基因DCX和LIS1檢測(cè)，明確其基因型與臨床表型、影像學(xué)的關(guān)系。方法 對(duì)確診為皮層下帶狀灰質(zhì)異位癥的1例患者進(jìn)行相關(guān)基因DCX和LIS1的檢測(cè)。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)患者有DCX基因2號(hào)外顯子新發(fā)突變，c. 451A＞G（p.K151E）。結(jié)論 對(duì)確診的SBH患者進(jìn)行相關(guān)基因檢測(cè)對(duì)分析患者的表型、影像學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后有重要的臨床意義。

皮層下帶狀灰質(zhì)異位癥 DCX癲癇

皮層下帶狀灰質(zhì)異位癥（subcortical band heterotopias，SBH）是神經(jīng)發(fā)育移行異常導(dǎo)致的腦發(fā)育障礙疾病。胚胎期當(dāng)神經(jīng)元母細(xì)胞因?yàn)楦鞣N原因（外傷、基因突變、藥物等）無法順利從室管膜下向皮層移行，存活的神經(jīng)元母細(xì)胞在移行過程中出現(xiàn)異常，形成與正常皮層相同或者相似的結(jié)構(gòu)［1］。有兩個(gè)基因證實(shí)與SBH的發(fā)生有關(guān)，DCX（同時(shí)被稱為doubecortin或者XLIS），定位于X染色體Xq22.3-q23；為主要的致病基因；該基因在胚胎早期高表達(dá)，出生后表達(dá)明顯降低也提示該基因與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育密切相關(guān)［2］。另一個(gè)基因?yàn)長(zhǎng)IS1（也被稱為PAFAH1B1，編碼一個(gè)血小板激活因子乙酰水解酶bata1亞單位）位于染色體17p13.3［3］。目前國(guó)內(nèi)未見該類患者相應(yīng)基因檢測(cè)的詳細(xì)報(bào)道。本研究對(duì)臨床診斷明確的患者進(jìn)行相關(guān)基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)患者的DCX2號(hào)外顯子c.451A＞G突變，相應(yīng)氨基酸突變?yōu)閜.K151E，為新發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變，可能為致病性突變。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 患者的臨床資料如下：患兒LYM，女，11歲，右利手，因“反復(fù)發(fā)作性神志不清7年余”入院。患兒4歲首次發(fā)作，感冒后出現(xiàn)意識(shí)不清、雙眼發(fā)呆、流涎、喉部咀嚼樣動(dòng)作，伴左側(cè)肢體陣攣抖動(dòng)。持續(xù)約1 min。發(fā)作前無明顯預(yù)感，發(fā)作后睡眠半小時(shí)到1 h，發(fā)作為10次/年，清醒睡眠均可發(fā)作。5歲開始服用丙戊酸鈉0.4 g每天2次+香草醛片2#每天2次無發(fā)作，9歲時(shí)停用月6個(gè)月余感冒后再次出現(xiàn)發(fā)作，表現(xiàn)同前，但程度較前更嚴(yán)重，當(dāng)天共發(fā)作3次。此后給予調(diào)整為拉莫三嗪16.7 mg每天2次，+德巴金0.5 g，每晚1次后無發(fā)作。此外，患者經(jīng)常出現(xiàn)發(fā)作性全身不定部位肢體輕微抖動(dòng)一下，睡眠中出現(xiàn)。母孕期：無異常。足月產(chǎn)程長(zhǎng)而轉(zhuǎn)剖腹產(chǎn)，出生時(shí)正常。1歲說話，1歲3個(gè)月能走路?，F(xiàn)小學(xué)二年級(jí)，成績(jī)差，不能完成1～10計(jì)算，日常生活基本自理。神經(jīng)系統(tǒng)查體未見明顯異常，入院查頭顱MRI平掃報(bào)告：①考慮層狀灰質(zhì)異位；②雙側(cè)額枕葉局部局腦回畸形；③透明隔囊腫形成。視頻腦電圖報(bào)告：異常腦電圖III（清醒/睡眠），間歇期：癲癇樣放電，彌漫性，雙中央-顳區(qū)著；診斷為層狀灰質(zhì)異位，給予行經(jīng)典型無腦回畸形LIS1和DCX基因分析。

1.2方法 ①基因組DNA定量；②用PCR-測(cè)序技術(shù)分析LIS1，DCX基因編碼區(qū)及鄰近內(nèi)含子區(qū)有無點(diǎn)突變。

2　結(jié)果

被檢樣本LIS1基因編碼區(qū)及鄰近內(nèi)含子區(qū)未見致病突變位點(diǎn)：被檢樣本DCX基因編碼區(qū)找到1個(gè)錯(cuò)義變異點(diǎn)：c.451A＞G，p.K151E，其雙親均未攜帶此變異點(diǎn)。

3　討論

皮層下帶狀灰質(zhì)異位（SBH，雙皮層綜合征）是一種神經(jīng)元行障礙性疾病，臨床主要表現(xiàn)為癲癇發(fā)作、不同程度的智力障礙。磁共振成像技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，提高了大腦皮層發(fā)育在癲癇病因?qū)W上的診斷水平。高分辨率的頭顱MRI可以準(zhǔn)確評(píng)估腦溝的分布和深度、皮層厚度、灰白質(zhì)界限。SBH患者頭顱MRI表現(xiàn)為雙側(cè)對(duì)稱的異?；屹|(zhì)帶，位于側(cè)腦室和外皮層中間。

皮層下帶狀灰質(zhì)異位根據(jù)頭顱MRI可分3型。部分型：累及1～2個(gè)腦葉，間歇型：累及2個(gè)腦葉及第3個(gè)腦葉的一部分；彌漫型：累及3個(gè)以上腦葉。pachygyria-SBH：前部巨腦回畸形合并后頭部皮層下帶狀灰質(zhì)異位。男性患者的MRI變異性更大，有多種不同的表現(xiàn)，如部分型、間歇性后頭部、pachygyria-SBH。女性的MRI主要為經(jīng)典的、彌漫性的SBH和前頭部為主的帶狀灰質(zhì)異位。男性患者的智力障礙差別很大，而女性患者一般有顯著的智力障礙。SBH患病率性別比例差別大，女性：男性（110:13）。前頭部為主的SBH傾向于遺傳性，而后頭部為主的SBH傾向于散發(fā)性。

散發(fā)女性、家族遺傳傾向的患者、無腦回畸形的男性患者，有80%可發(fā)現(xiàn)DCX基因突變。而散發(fā)的男性多發(fā)現(xiàn)LIS1基因突變，并主要表現(xiàn)為無腦回畸形。兩種基因突變的性別及臨床差異可能與雜合子女性基因表達(dá)的隨機(jī)失活效應(yīng)有關(guān)。符合之前的假設(shè)，該基因突變表現(xiàn)為一個(gè)從SBH、巨腦回畸形到無腦回畸形的一個(gè)連續(xù)的疾病譜。研究證實(shí)DCX突變與前頭部腦區(qū)有關(guān)，臨床癥狀更嚴(yán)重，而LIS1突變多見于嚴(yán)重的無腦回畸形或者累及頂、枕部的SBH。對(duì)男性患者的基因分析發(fā)現(xiàn)，這些突變包非編碼區(qū)的、截短突變、嵌合體等突變［4］。

SBH患者可僅表現(xiàn)為體型異常及智力障礙，也可表現(xiàn)為不同類型的癇性發(fā)作。對(duì)30例男性患者分析發(fā)現(xiàn)，36%患者表現(xiàn)為一種單一的癲癇發(fā)作，主要是復(fù)雜部分性發(fā)作。64%有多于一種癲癇發(fā)作類型。起病年齡從生后5 d到16歲不等，兒童期可表現(xiàn)為不同類型癲癇性腦病，可伴有嚴(yán)重的智力障礙，成人期起病多為部分性發(fā)作，智力基本正常。

圖1　DCX基因2號(hào)外顯子c.451A＞G突變，相應(yīng)氨基酸突變?yōu)閜. K151E，為新發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變，可能為致病性突變

圖2　患者頭顱MRI（T2flair及T2軸位）雙側(cè)大腦半球深部白質(zhì)內(nèi)較對(duì)稱層狀的灰質(zhì)樣信號(hào)影，透明隔囊腫形成

圖3　患者腦電圖　背景基本正常，間歇期放電提示雙側(cè)大腦半球大量同步性低至中波幅棘慢波，以雙中央-顳區(qū)為著

SBH患者頭皮腦電圖無特異性，主要和臨床發(fā)作特點(diǎn)相關(guān)［5］?？杀憩F(xiàn)為多灶性放電、全面性放電、癲癇性腦病改變。睡眠腦電圖提示在非快速眼動(dòng)睡眠期（NREM）出現(xiàn)癲癇樣放電持續(xù)狀態(tài)，而在快速眼動(dòng)睡眠期（REM）雙額區(qū)、額顳區(qū)出現(xiàn)尖波。長(zhǎng)時(shí)間的13 Hz左右的紡錘波，提示睡眠結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂［6］。本例患者的間歇期腦電圖提示為中央顳區(qū)為主放電，類似于伴有中央顳區(qū)棘波的兒童良性癲癇。因此對(duì)于首診的癲癇患者，需要結(jié)合頭顱MRI進(jìn)一步深入診斷，以避免漏診、誤診。

對(duì)SBH患者進(jìn)行發(fā)作期及間歇期的腦功能影像學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，致癇灶位于皮層下異常增多的皮層可能性大。雙皮層中正常和異常的神經(jīng)元均投射至皮層下區(qū)域，同時(shí)和丘腦有纖維聯(lián)系。異常皮層還與紋狀體、腦干和脊髓相聯(lián)系。通過18F-FDG PET和Tc-ECD SPECT對(duì)發(fā)作期患者的研究發(fā)現(xiàn)，相比正常的皮層，異常神經(jīng)元中有糖代謝增高，rCBF增加［7］。

目前對(duì)于SBH患者治療仍抗癲癇藥物為主，但該疾病傾向于耐藥。對(duì)耐藥性、難治性癲癇患者進(jìn)行了外科手術(shù)治療。部分患者表現(xiàn)為早期改善，對(duì)大多數(shù)患者的癲癇發(fā)作的頻率及嚴(yán)重程度無持久的改善作用。

患者的突變位點(diǎn)考慮為新生突變可能大。此錯(cuò)義變異點(diǎn)目前還未有文獻(xiàn)報(bào)道是否致病，SNP數(shù)據(jù)庫(kù)也未見收錄。Jamuar等［8］對(duì)518例腦發(fā)育畸形的患者進(jìn)行DNA檢測(cè)，其中包括30例層狀灰質(zhì)異位，20例伴有多小腦回畸形的巨腦回畸形、61例側(cè)腦室結(jié)節(jié)狀灰質(zhì)異位，47例腦回畸形，發(fā)現(xiàn)有27例患者外周血突變，其中8例為嵌合體突變（尤其在患者）。SBH采用的是外周血提取DNA，本研究納入的患者雙親未發(fā)現(xiàn)有明顯突變，不能排除雙親是否存在生殖腺嵌合現(xiàn)象，再次生育時(shí)可考慮進(jìn)行產(chǎn)前診斷減少再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。因此，對(duì)SBH進(jìn)行相關(guān)基因檢測(cè)包括對(duì)DCX和LIS1基因進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，需要聯(lián)合應(yīng)用多種檢測(cè)方法提高診斷水平，對(duì)遺傳學(xué)具有重要意義，本研究未進(jìn)行相關(guān)突變的功能學(xué)研究，有待進(jìn)一步探索。

致謝：感謝北京大學(xué)遺傳學(xué)系黃昱老師在基因診斷給予的技術(shù)支持和指導(dǎo)。

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R749.1

A

2015-03-31）

（責(zé)任編輯:李立）

10.3969/j.issn.1002-0152.2015.10.010

*廣東三九腦科醫(yī)院（廣州 510510）