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    美味牛肝菌液態(tài)發(fā)酵菌醋的研制

    2015-10-28 22:53:25呂紅英
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年16期

    呂紅英

    摘要:通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定美味牛肝菌(Boletus edulis)菌絲體液態(tài)發(fā)酵的優(yōu)化條件,利用其發(fā)酵液研制出美味牛肝菌液態(tài)菌醋。結(jié)果表明,美味牛肝菌液態(tài)發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基為: 葡萄糖20.0 g、酵母浸出膏5.0 g、KH2PO4 3.0 g、MgSO4·7H2O 1.5 g、VB1 0.01 mg;最佳發(fā)酵條件為:pH 5.0、裝液量90 mL、培養(yǎng)溫度26 ℃、振蕩速度180 r/min、培養(yǎng)時(shí)間6 d。美味牛肝菌液態(tài)菌醋的最優(yōu)配方為:發(fā)酵液50%、檸檬酸0.20%、穩(wěn)定劑0.18%、甜味劑0.15%。

    關(guān)鍵詞:美味牛肝菌(Boletus edulis);液態(tài)發(fā)酵;醋

    中圖分類號:S646.3;TS264.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2015)16-4026-05

    DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.050

    The Preparation of the Liquid Fermentation Vinegar of Boletus edulis

    LV Hong-ying

    (College of Bioengineering, Jilin Agricultural Science and Technology College, Jilin 132101,Jilin, China)

    Abstract:Optimize the conditions of liquid fermentation for mycelium of Boletus edulis by single factor test and orthogonal test. Developed using fermented liquid porcini of B. eduli. The results showed that: the optimal conditions of liquid fermentation of B. edulis: Glucose20.0 g, yeast extract 5.0 g, KH2PO4 3.0 g,MgSO·7H2O1.5 g, VB1 0.01 mg.The optimum culture conditions were: the value of pH was 5.0, the volume of liquid 90 mL , culture temperature of 26 ℃, the oscillation velocity 180 r/min, cultiva tiontime 6 d. The optimal formula for liquid vinegar bacteria of B. edulis was: fermentation liquid 50%, citric acid 0.20%, stabilizer 0.18%, sweetener 0.15%.

    Key words:Boletus edulis; liquid fermentation; vinegar

    釀造醋不僅含有豐富的營養(yǎng)成分還具有天然、營養(yǎng)、保健等特性[1]。中國民間也流傳著許多以食醋為主或?yàn)檩o治療疾病的藥方[2]。食醋不僅有抗菌、緩解疲勞、降血脂、降低血清中的膽固醇含量、預(yù)防和治療糖尿病等功效,而且還有抗氧化、抗衰老、美容、解酒保肝等作用[3,4]。

    食用菌是能夠形成大型肉質(zhì)或膠質(zhì)的子實(shí)體或菌核類組織,并能供人們食用或藥用的一類大型真菌[5],不僅味道鮮美,營養(yǎng)豐富,而且富含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖、維生素、抗生素、核苷酸等物質(zhì),能調(diào)節(jié)人體新陳代謝,增強(qiáng)體質(zhì),被譽(yù)為“人類植物性食品營養(yǎng)的頂峰”[6],是深受大眾喜愛的健康食品。為了豐富食品種類,提高食品營養(yǎng)價(jià)值和保健功能,可以將食用菌應(yīng)用到食品工業(yè)中,其中食用菌發(fā)酵菌醋就是一種有效的途徑。美味牛肝菌(Boletus edulis)又名大腳菇,屬于擔(dān)子菌亞門層菌綱傘菌目牛肝菌科中的一種[7],是一種世界范圍內(nèi)分布的食藥兼用經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的真菌,中國各省均有分布,尤其西南地區(qū)產(chǎn)量較高[8],且全世界已知的牛肝菌屬已有1 024種,中國已知的可食用的就有199種[9]。美味牛肝菌的肉質(zhì)肥厚而細(xì)嫩、香味濃郁、味道鮮美、營養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特,美味牛肝菌含有多種生物堿可治腰腿疼痛、手足麻木、盤骨不舒、四肢抽搐以及婦女白帶異常等癥[9,10],具有一定的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。經(jīng)常食用牛肝菌可明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫力、改善機(jī)體微循環(huán)。本試驗(yàn)旨在利用美味牛肝菌的營養(yǎng)功效研發(fā)液態(tài)發(fā)酵菌醋的生產(chǎn)工藝,拓寬其利用范疇。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    菌種:美味牛肝菌,釀酒干酵母,醋酸菌。

    儀器:電子天平、真空抽濾裝置、恒溫?fù)u床、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、手持糖量計(jì)等。

    1.2 工藝流程

    1.3 方法

    1.3.1 菌種活化 將美味牛肝菌種用接種針接到斜面培養(yǎng)基中,于25 ℃活化培養(yǎng)5 d,待菌絲體長滿斜面[5],備用。

    1.3.2 液體種子培養(yǎng) 將活化的美味牛肝菌用接種針從斜面接入到液體種子培養(yǎng)基中,培養(yǎng)溫度28 ℃,150 r/min搖瓶培養(yǎng)3 d。

    1.3.3 液體發(fā)酵培養(yǎng) 將種子培養(yǎng)液按10%接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基,28 ℃,150 r/min振蕩培養(yǎng)6 d后得到發(fā)酵液。

    1.3.4 菌絲體生物量測重方法 用雙層紗布過濾即分離得到菌絲體和發(fā)酵液,發(fā)酵液備用,將菌絲體用去離子水沖洗3次再用濾紙吸至不滴水,用電子天平稱重。

    1.3.5 補(bǔ)料 向上述美味牛肝菌發(fā)酵液中補(bǔ)充已滅菌的20%蔗糖溶液,將其可溶性固形物含量調(diào)整為9%~10%。

    1.3.6 酒精發(fā)酵、醋酸發(fā)酵 將補(bǔ)料后的美味牛肝菌發(fā)酵液100 mL裝入250 mL三角瓶中,接入預(yù)先活化好的酵母菌,接種量10%,均勻攪拌,置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4 d,待酒精含量達(dá)到5%~6%時(shí)停止酒精發(fā)酵。向酒精發(fā)酵后的成熟的酒醪中接入醋酸菌培養(yǎng)液,在28~32 ℃下進(jìn)行醋酸發(fā)酵,醋酸發(fā)酵過程中每日攪拌2~3次,并隨時(shí)檢測發(fā)酵液中醋酸和酒精的含量變化。當(dāng)酸度不再增加,酒精含量達(dá)到最小即到達(dá)醋酸發(fā)酵終點(diǎn)。

    1.3.7 加鹽淋醋、澄清過濾 醋醅成熟后及時(shí)加入8%~10%食鹽抑制醋酸菌的活性,防止成熟醋醅發(fā)生過度氧化,降低醋酸產(chǎn)量。先將一半食鹽放入醋醅上拌勻,另一半食鹽撒在醋醅表面,第二天翻醅1次,接著再翻醅,1~2 d即可進(jìn)行淋醋,采用套淋法循環(huán)泡淋。然后將上述發(fā)酵液用4層紗布進(jìn)行粗濾之后加入殼聚糖澄清,用真空泵進(jìn)行抽濾, 即得澄清透明的美味牛肝菌醋原液。

    1.3.8 調(diào)配 量取飲用水和蜂蜜(作為風(fēng)味成分,添加量4%,添加過多會增加成品飲料中糖的含量),然后對發(fā)酵液量、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、檸檬酸等進(jìn)行單因素試驗(yàn),確定單因素對產(chǎn)品品質(zhì)的影響,然后進(jìn)行正交試驗(yàn),以期獲得最佳配方工藝[11-14]。

    1.3.9 裝瓶、滅菌、陳釀、成品檢驗(yàn) 定量裝瓶封蓋,裝瓶后,立即用巴氏消毒法進(jìn)行滅菌,密封陳釀20~30 d左右,即得成品美味牛肝菌保健醋。對產(chǎn)品進(jìn)行感官檢驗(yàn)[15]、理化檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn),各項(xiàng)指標(biāo)都符合飲料行業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)即為成品。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選

    2.1.1 碳源對菌絲生長的影響 以蛋白胨2.0 g,KH2PO4 3.0 g,MgSO4·7H2O 1.5 g,VB1 0.01 mg為單因子基礎(chǔ)培養(yǎng)基[16],分別以20.0 g的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、山梨醇和可溶性淀粉作碳源試驗(yàn),以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為空白對照,確定對美味牛肝菌菌絲生長影響的最優(yōu)碳源。圖1結(jié)果表明,美味牛肝菌對試驗(yàn)中所用碳源均可利用,既能利用成分復(fù)雜的復(fù)合碳源,也能利用單糖和雙糖等小分子碳源,所試碳源中以葡萄糖最好,菌絲體生物量達(dá)121 g/L,菌絲生長快,菌絲球小,均勻,密度高。所以綜合不同碳源對美味牛肝菌菌絲生長的影響,以葡萄糖為最適碳源。

    2.1.2 氮源對菌絲生長的影響 以葡萄糖20.0 g,KH2PO4 3.0 g,MgSO4·7H2O 1.5 g,VB1 0.01 mg為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,分別以5.0 g的牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出膏、硫酸鎂、麩皮和水解乳蛋白作氮源試驗(yàn),以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為空白對照,測定不同氮源對美味牛肝菌菌絲生長的影響。圖2結(jié)果表明,在不同的氮源培養(yǎng)基中菌絲體生物量有所不同。其中以酵母浸出膏作為氮源時(shí),菌絲生物量最高,并且菌絲球大小均勻。所以綜合不同氮源對美味牛肝菌菌絲生長的影響,以酵母浸出膏為最適氮源。

    根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果表明,確定最適發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:葡萄糖20.0 g,酵母浸出膏5.0 g,KH2PO4 3.0 g,MgSO4·7H2O 1.5 g,VB1 0.01 mg。

    2.2 發(fā)酵條件的選擇

    2.2.1 培養(yǎng)溫度對菌絲生長的影響 將接種搖瓶分別置于18、22、26、30 ℃ 180 r/min振蕩培養(yǎng)6 d后,測定培養(yǎng)溫度對美味牛肝菌絲生長的影響(表1)。結(jié)果表明,溫度對美味牛肝菌的生長十分重要,在受試的18~30 ℃菌絲均能生長。但是在較低溫度和較高溫度下菌絲生長都不是很好,只有在26 ℃菌絲最好,菌絲體生物量高,且合適的溫度能縮短發(fā)酵時(shí)間。因此,菌絲生長的最適培養(yǎng)溫度為26 ℃。

    2.2.2 培養(yǎng)時(shí)間對菌絲生長的影響 250 mL三角瓶裝入90 mL培養(yǎng)液,26 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng),測定不同培養(yǎng)時(shí)間對美味牛肝菌絲生長的影響(表2)。由表2可知,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,菌絲體含量逐漸增加,但發(fā)酵前期菌絲體生物量增加迅速,第五天出現(xiàn)了大量菌絲球,發(fā)酵液變得透明,第六天菌絲體生物量達(dá)到較大值。從第七天再繼續(xù)培養(yǎng),雖然菌絲體也在增加,但菌絲體生物量增加幅度相對緩慢。而隨著發(fā)酵周期的延長,生產(chǎn)成本增加幅度較大,因此,綜合產(chǎn)品質(zhì)量因素及經(jīng)濟(jì)因素,菌絲生長的最適發(fā)酵周期確定為6 d。

    2.2.3 pH對菌絲體生長的影響 將培養(yǎng)液pH分別調(diào)為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0,接斜面菌種1.0 cm2、26 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)6 d后,測定pH對美味牛肝菌絲生長的影響(表3)。由表3可知,美味牛肝菌在偏酸的環(huán)境下生長較好,菌絲體生物量比較高,且該pH與培養(yǎng)基的自然pH 5.0相近。綜合培養(yǎng)基初始pH對菌絲生長的影響,美味牛肝菌絲生長的最適pH為5.0~5.5。

    2.2.4 振蕩速度對菌絲生長的影響 250 mL三角瓶于26 ℃條件下分別處于90、120、150、180、210 r/min振蕩速度培養(yǎng)6 d后,測定振蕩速度對美味牛肝菌絲生長的影響(表4)。由表4可知,食用菌液體搖瓶培養(yǎng)的菌絲生物量顯著優(yōu)于固體培養(yǎng)基或液體靜置培養(yǎng)基,在一定范圍內(nèi),隨著轉(zhuǎn)速的增大,通氣量增大,菌絲球數(shù)量增多,有利于菌絲的生長;在轉(zhuǎn)速達(dá)到180 r/min時(shí)菌絲生物量最大,但當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到210 r/min時(shí),菌絲生長開始下降,因此,美味牛肝菌絲生長的最適振蕩速度為180 r/min。

    2.2.5 裝液量對菌絲生長的影響 250 mL的三角瓶中分別選擇50、60、70、80、90、100、110、120 mL裝液量,26 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)6 d后,測定裝液量對美味牛肝菌絲生長的影響(表5)。由表5可知,菌絲體生物量與裝液量呈正相關(guān),隨著裝液量的增加,菌絲體生物量也增多;裝液量少,菌絲體生物量也少,培養(yǎng)基利用率也不高,但裝液量超過90 mL時(shí),由于搖瓶供氧不足,菌絲生物量的增加幅度降低。因此,美味牛肝菌絲生長的最適裝液量確定為90 mL。

    2.3 發(fā)酵條件綜合試驗(yàn)

    通過發(fā)酵過程中培養(yǎng)基pH、振蕩速度、培養(yǎng)溫度、裝液量及培養(yǎng)時(shí)間5個(gè)因素,設(shè)計(jì)3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn), 以菌絲體干重為參考指標(biāo),確定最優(yōu)發(fā)酵條件(表6)。由表6的極差R的大小可知,A>D>C>B>E即各因子重要性的順序?yàn)椋簆H>裝液量>培養(yǎng)溫度>轉(zhuǎn)速>培養(yǎng)時(shí)間,發(fā)酵的最優(yōu)搭配組合為A2B2C3D3E2,即pH 5.0、裝液量90 mL、培養(yǎng)溫度26 ℃、振蕩速度180 r/min、培養(yǎng)時(shí)間6 d來進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn),有利于美味牛肝菌在發(fā)酵罐中產(chǎn)生大量的菌絲體,且發(fā)酵液香味清純。

    2.4 菌醋配方的設(shè)計(jì)

    2.4.1 發(fā)酵液對產(chǎn)品品質(zhì)的影響 采用檸檬酸的添加量為0.2%、穩(wěn)定劑(黃原膠)的添加量為0.2%、甜味劑(甜菊糖苷)的添加量為0.05%~0.15%的基礎(chǔ)上分別加入30%、40%、50%、60%、70%的發(fā)酵液配制飲料(表7)。由表7可知,當(dāng)發(fā)酵液的添加量從30%增加到50%時(shí),產(chǎn)品品質(zhì)越來越好。當(dāng)發(fā)酵液的添加量繼續(xù)增加,發(fā)酵液對發(fā)酵飲料的品質(zhì)影響較小,甚至停止。

    2.4.2 甜味劑的選用及用量 甜菊糖苷作為一種常用的甜味劑,其用量直接影響著發(fā)酵飲料的風(fēng)味,需要嚴(yán)格控制用量,是調(diào)配過程中應(yīng)特別注意的步驟。在發(fā)酵液的添加量為50%,檸檬酸的添加量為0.2%,穩(wěn)定劑(黃原膠)的添加量為0.2%的基礎(chǔ)上分別加入0.01%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%的甜菊糖苷配制飲料。由表8可知,甜菊糖苷的添加量在0.05%~0.15%時(shí)品質(zhì)較好,比較合適大眾口味。

    2.4.3 檸檬酸對產(chǎn)品品質(zhì)的影響 在發(fā)酵液的添加量為50%,穩(wěn)定劑(黃原膠)的添加量為0.2%,甜味劑(甜菊糖苷)的添加量為0.05%~0.15%的基礎(chǔ)上分別加入0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的檸檬酸配制飲料。由表9可知,當(dāng)檸檬酸的添加量為0.2%時(shí)發(fā)酵飲料的感官品質(zhì)最好,當(dāng)其量超過0.2%后,發(fā)酵飲料的酸味越來越大,從而影響產(chǎn)品品質(zhì)。

    2.4.4 穩(wěn)定劑的選擇 通過前期試驗(yàn)對黃原膠、果膠、明膠、CMC等穩(wěn)定劑進(jìn)行對比選擇試驗(yàn)后,確定黃原膠穩(wěn)定效果最好,需對黃原膠的用量進(jìn)一步確定。在發(fā)酵液的添加量為50%,檸檬酸的添加量為0.2%,甜味劑(甜菊糖苷)的添加量為0.05%~0.15%的基礎(chǔ)上分別加入0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的穩(wěn)定劑(黃原膠)配制飲料。由表10可知,當(dāng)穩(wěn)定劑的添加量達(dá)到0.2%時(shí),發(fā)酵飲料的感官品質(zhì)最好,且不會出現(xiàn)沉淀,而超過0.2%后穩(wěn)定劑會使發(fā)酵飲料中的可溶性固形物產(chǎn)生沉淀,從而影響感官品質(zhì)。

    2.5 發(fā)酵飲料配方的綜合試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選取最優(yōu)的3個(gè)水平,按L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)最佳配方。正交試驗(yàn)因素水平見表11,試驗(yàn)結(jié)果見表12。由表12可知,A>D>C>B,即發(fā)酵液對發(fā)酵飲料品質(zhì)的影響顯著,檸檬酸、穩(wěn)定劑、甜味劑對發(fā)酵飲料品質(zhì)的影響均不顯著,因素影響主次順序?yàn)榘l(fā)酵液>穩(wěn)定劑>檸檬酸>甜味劑,試驗(yàn)時(shí)可選取最佳水平為A2B3C2D2,即發(fā)酵液50%、檸檬酸0.20%、穩(wěn)定劑0.18%、甜味劑0.15%時(shí),感官評分最高,發(fā)酵飲料品質(zhì)最好。

    3 結(jié)論

    以美味牛肝菌為研究對象,從菌種的活化、培養(yǎng)、發(fā)酵及發(fā)酵飲料配方的設(shè)計(jì)等方面進(jìn)行研究。先對發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選進(jìn)行單因素試驗(yàn),得出最適碳源為葡萄糖,最適氮源為酵母浸出膏,然后對發(fā)酵條件的選擇進(jìn)行正交試驗(yàn),得出最佳發(fā)酵條件為:pH 5.0、裝液量90 mL、培養(yǎng)溫度26 ℃、振蕩速度180 r/min、培養(yǎng)時(shí)間6 d,最后進(jìn)行發(fā)酵飲料配方的正交試驗(yàn)得到發(fā)酵飲料的最優(yōu)配方為:發(fā)酵液50%、檸檬酸0.20%、穩(wěn)定劑0.18%、甜味劑0.15%。試驗(yàn)采用食用菌液態(tài)發(fā)酵的方法,制得更加優(yōu)化的發(fā)酵液,并對其發(fā)酵液進(jìn)行食品開發(fā),經(jīng)后期調(diào)配降低酸度,并添加甜味物質(zhì)制成的美味牛肝菌保健醋飲料,風(fēng)味獨(dú)特, 酸甜可口, 富含多種生物活性物質(zhì), 具有十分廣闊的市場前景。

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