H-型高血壓患者M(jìn)THFR基因型分布及與冠心病的關(guān)系

張 凱 廖敏蕾 李曉惠

（上海市第一人民醫(yī)院寶山分院心血管內(nèi)科，上海 200940）

H-型高血壓患者M(jìn)THFR基因型分布及與冠心病的關(guān)系

張 凱 廖敏蕾 李曉惠*

（上海市第一人民醫(yī)院寶山分院心血管內(nèi)科，上海 200940）

目的 探討H-型高血壓患者中N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T位點突變與血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）及冠心病之間的關(guān)系。方法 選擇60例經(jīng)冠狀動脈造影的H-型高血壓患者，分為冠心病組33例，非冠心病組27例，應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測2組MTHFR基因型，并比較2組MTHFR基因型分布及血漿Hcy水平。結(jié)果 冠心病組的MTHFR基因CC型頻率為27.3%，CT型頻率為48.5%，TT型頻率為24.2%。非冠心病組CC型頻率為40.7%，CT型頻率為48.2%，TT型頻率為11.1%，冠心病組TT型基因及T等位基因頻率高于非冠心病組，但是兩組差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。冠心病組的血漿平均Hcy濃度（19.82±16.2）μmol/L高于非冠心病組（15.78±5.63）μmol/L （P=0.022＜0.05），TT型的患者平均血漿Hcy濃度（32.58±23.06）μmol/L高于CC（14.64±6.93）μmol/L及CT（14.76±3.65）μmol/L組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 MTHFR基因多態(tài)性與H-型高血壓患者冠心病的發(fā)生無明顯相關(guān)性，MTHFR基因突變導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥。高同型半胱氨酸血癥是冠心病的獨立危險因素。

H-型高血壓；冠心??；同型半胱氨酸；亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）

近年來研究表明，高同型半管氨酸血癥（HHcy）是冠心病的獨立危險因素［1］，其與高血壓對冠心病的發(fā)生有協(xié)同作用。為此，我國專門有學(xué)者提出H-型高血壓的概念，即合并有高同型半胱氨酸血癥的原發(fā)性高血壓［2］。而亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）參與Hcy的代謝過程［3］，編碼該酶的基因在C677T，其基因突變常導(dǎo)致血漿Hcy水平增高［4］。然而MTHFR基因突變是否與冠心病有關(guān)目前尚存在爭議，MTHFR基因多態(tài)性具有種族和民族的差異，本文旨在探討在H-型高血壓患者中MTHFRC677T位點突變與血漿同型半胱氨酸及冠心病之間的關(guān)系。

1　對象與方法

1.1研究對象：選擇2014年1月～9月在上海市第一人民醫(yī)院寶山分院心內(nèi)科住院行冠脈造影的，居住地為上海的漢族的H-型高血壓患者60例，根據(jù)造影結(jié)果分為冠心病組及非冠心病組，冠心病組33例，男性23例，女性10例，平均年齡（69.88±10.11）歲，非冠心病組27例，男性19例，女性8例，平均年齡（66.81±8.66）歲。

高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：休息狀態(tài)下收縮壓≥140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mm Hg，或正在接受抗高血壓藥物治療者。冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)冠狀動脈造影證實在左主干、左前降支、回旋支或右冠脈中至少有1支血管狹窄程度〉50%。高同型半胱氨酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：血漿Hcy＞10 μmol/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并內(nèi)分泌疾病，風(fēng)濕性疾病，肺栓塞，深靜脈血栓，急性腦梗死，腫瘤，硬皮病，銀屑病，曾經(jīng)服用葉酸，急、慢性腎能不全，嚴(yán)重肝功能異，非漢族。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本收集：入選者空腹12 h后取肘靜脈血8 mL，其中4 mL于半小時內(nèi)以3000 r/min離心5 min，取血清，2-8 ℃冰箱保存，48 h內(nèi)完成Hcy水平的檢測。另4 mL置于EDTA抗凝管，立即置于-80 ℃保存以檢測基因型。

1.2.2同型半胱氨酸的檢測：采用Beckman AU5400全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，用酶法測定，檢測試劑盒有深圳奧薩制藥有限公司提供。

1.2.3MTHFR檢測：采用MTHFR（C677T）基因檢測試劑盒（PCR-芯片雜交法，上海瑞鹿科技有限公司）測定。向全血樣本中加入DNA抽提液，使細(xì)胞裂解，釋放出DNA，將抽提獲得的染色體DNA作為模板，將兩條寡聚核苷酸引物、聚合酶進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：50 ℃5 min；94 ℃ 5 min；94 ℃ 25 s，56 ℃ 25 s，72 ℃ 25 s，35 個循環(huán)；72 ℃5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物使用全自動雜交儀（BR-526-24型）進(jìn)行雜交反應(yīng)，雜交反應(yīng)結(jié)束后取出芯片，將芯片放入生物芯片識讀儀（BE-2.0）中，用MTHFR 基因型分析軟件進(jìn)行圖像掃描及數(shù)據(jù)分析，輸出檢測結(jié)果。結(jié)果包括三種基因型：677TT，677CT，677CC（圖1～3）。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSSl8.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料用（）表示，研究對象的Hardy-Weinberg平衡、各組基因型分布及等位基因頻率等計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，計量資料比較用獨立樣本t檢驗。顯著性以P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1　MTHFR基因TT型

圖2　MTHFR基因CT型

圖3　MTHFR基因CC型

2　結(jié) 果

2.1兩組一般臨床資料：2組間年齡、性別、吸煙、血脂無差異，具有可比性。冠心病組Hcy水平高于非冠心病組，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果提示HHcy是冠心病的危險因素之一。見表1。

表1　兩組患者一般臨床資料

2.2兩組的MTHFR基因型分布及等位基因頻率：各組MTHFR C677T的基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，可以認(rèn)為本研究選擇的研究人群基因頻率能夠代表群體的基因分布。冠心病組TT型基因頻率高于非冠心病組，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.332＞0.05）。冠心病組T等位基因頻率高于非冠心病組，也無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.143＞0.05）。提示MTHFRC677T基因點突變與冠心病無明顯相關(guān)性。見表2。

表2　兩組的MTHFR基因型分布及等位基因頻率

2.3三種基因型Hcy水平：TT型基因Hcy水平明顯高于CC組及CT組（P＜0.05），CT型基因Hcy水平與CC型無明顯差別（P=0.476），說明MTHFR基因突變導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥。見表3。

表3　三種基因型Hcy水平

3　討 論

同型半胱氨酸是是體內(nèi)三種含硫氨基酸之一，是由蛋氨酸去甲基生成，其代謝受多種因素的影響，如遺傳、疾病與藥物、飲食、性別和年齡等。MTHFR是Hcy代謝的關(guān)鍵酶，其C677T基因點突變導(dǎo)致MTHFR的耐熱性和活性均降低約50%［5］，引起血漿Hcy水平升高，本研究也證實MTHFRC677TT型基因的血漿Hcy水平升高。HHcy通過損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)脂質(zhì)沉積，加速斑塊鈣化，增強(qiáng)凝血功能，激活動脈粥樣硬化進(jìn)程中的炎性反應(yīng)等導(dǎo)致冠心?。?］。并且Hcy與高血壓對心腦血管疾病的發(fā)生有協(xié)同作用，其心腦血管事件發(fā)生率約為單純高血壓患者的5倍，約為正常對照人群25～30倍［7］，占我國高血壓患者75%左右［8］。但是MTHFR基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性在中國不同地區(qū)和民族，以及世界不同國家得出的結(jié)論并不一致，甚至矛盾。日本有研究顯示MTHFR基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)［9］，但Muniz等［10］研究表明，MTHFR基因多態(tài)性和冠心病無關(guān)，在我國漢族人口中靳鈺［11］等研究表明其與冠心病相關(guān)，而顧燕寧［12］等對寧夏回族、漢族人群MTHFR基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MTHFR基因C677T在兩個不同民族基因型分布無差異，677TT與冠心病的發(fā)生并沒有相關(guān)性。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)MTHFR基因多態(tài)性與H-型高血壓患者冠心病的發(fā)生無明顯相關(guān)性，MTHFR基因突變導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥，高同型半胱氨酸血癥是冠心病的危險因素。因此，今后臨床中對于冠心病的防治應(yīng)注意控制血漿Hcy的水平。當(dāng)然，本研究研究樣本量較少，導(dǎo)致結(jié)果存在偏倚，今后需更多的大型循證醫(yī)學(xué)及分子細(xì)胞水平的新證據(jù)來闡明MTHFR基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系。

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The Relationship between MTHFR Genotype Distribution and Coronary Heart Disease in H-type Hypertension Patients

ZHANG Kai， LIAO Min-lei， LI Xiao-hui*
（Department of Cardiovascular Medicine， the Baoshan Branch of Shanghai First People's Hospital， Shanghai 200940， China）

Objective To investigate the relationship between the gene polymorphism of N5，10-methylene tetrahydrofolate reductase （MTHFR） site-specific mulation C667T， homocysteine（Hcy） and coronary heart disease in H-type hypertension patients. Methods In this case-control study， we selected 60 H-type hypertension patients after Coronary angiography， All patients were divided into two groups， CHD group（n=33）and non-CHD（n=27）. To detected MTHFR C677T by gene chip technology， MTHFR genotype distributionb， the level of plasma Hcy was compared between the two groups. Results In CHD and non-CHD group，the frequencies of MTHFR C677T genotype were CC 27.3% vs 40.7%， CT 48.58% vs 48.2%， and TT 24.2% vs 11.1%. The frequency of T allele and TT homozygotes in MTHFR in CHD group was higher than that in non-CHD group， but there was no significant difference between the two groups（P＞0.05）. ②In CHD group， the plasma Hcy level（19.82±16.2）μmol/L was higher than that（15.78±5.63）μmol/L of the non-CHD group（P=0.022＜0.05）. ③The plasma Hcy concentration of individuals with TT genotype（32.58±23.06）μmol/L was higher than that of individuals with CC（14.64±6.93）μmol/L and CT（14.76±3.65）μmol/L genotype（P＜0.05）. Conclusions The polymorphism of MTHFR C677T are not related to coronary heart disease in H-type hypertension patients. MTHFR gene mutations can lead to high homocysteine levels. HHcy were all independent risk factors of CHD.

H-type hypertension； Coronary heart disease； Homocysteine； MTHFR

R541.4

B

1671-8194（2015）28-0008-02