HPLC-ELSD法測(cè)定催乳顆粒中黃芪甲苷的含量

張祖亮　鄧資源

（六安市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 六安 237000）

HPLC-ELSD法測(cè)定催乳顆粒中黃芪甲苷的含量

張祖亮鄧資源

（六安市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 六安 237000）

目的建立以高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（HPLC-ELSD）測(cè)定催乳顆粒中黃芪甲苷含量的方法。方法用ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（33∶67），流速1.0 mL/min。結(jié)果黃芪甲苷的線(xiàn)性范圍為0.1385～2.77 μg（r=0.9997），平均回收率為98.0%，RSD為1.5%（n=6）。結(jié)論該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便。

黃芪甲苷；催乳顆粒；高效液相-蒸發(fā)光散射法

催乳顆粒是由黃芪、黨參、白術(shù)、當(dāng)歸等九味中藥組成的復(fù)方制劑，具有益氣養(yǎng)血，通絡(luò)下乳的功效，主要用于產(chǎn)后氣血虛弱所致的缺乳，少乳?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)［1］采用薄層掃描法測(cè)定催乳顆粒中黃芪甲苷的含量，操作繁瑣，重現(xiàn)性差。筆者參考文獻(xiàn)［2-6］，建立HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷的含量，結(jié)果顯示專(zhuān)屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便。

1　儀器與試藥

圖1　色譜圖（a對(duì)照品；b供試品；c陰性對(duì)照；1.黃芪甲苷）

表1　加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

表2　供試品測(cè)定結(jié)果（n=3）

Waters e2695高效液相色譜儀；2424蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；Empower化學(xué)工作站；ZORBAX Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；AL204電子天平（Mettler Toledo公司，感量0.01 mg）；MS105DU電子天平（Mettler Toledo公司，感量0.1 mg）。黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)：110781-200613）為中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供，乙腈為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水，其他試劑均為分析純，催乳顆粒為市場(chǎng)銷(xiāo)售品（批號(hào)為120517、120521、120607）。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件。色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（33∶67）；流速為l mL/min；柱溫為30 ℃；檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度為75 ℃，霧化器溫度為48 ℃，氣體壓力為25 psi。

2.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取黃芪甲苷13.85 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芪甲苷對(duì)照品溶液（0.1385 mg/mL）。

2.3供試品溶液的制備：取本品約10 g，研細(xì)，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，加50 mL甲醇，精密稱(chēng)定，超聲30 min（功率：300 W，頻率：50 kHz），放冷至室溫，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足因超聲減失的重量，搖勻，濾過(guò)，蒸干；殘?jiān)尤?0 mL水，微熱溶解，用水飽和正丁醇溶液萃取4次，每次用40 mL，合并正丁醇提取液，再加氨試液洗滌2次，每次用40 mL，保留洗滌后的正丁醇液，并將其置于水浴上蒸干；殘?jiān)尤脒m量的甲醇溶解，然后轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備：取缺黃芪以外的藥材按處方要求制備樣品，按2.3的制備方法，同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)：將以上三種溶液按上述色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與對(duì)照品在相同保留時(shí)間的位置上有色譜峰，陰性對(duì)照則無(wú)色譜峰。說(shuō)明在此保留時(shí)間其他成分對(duì)其無(wú)干擾。具體見(jiàn)圖1。

2.6線(xiàn)性關(guān)系的考察：精密量取對(duì)照品溶液1、2、5、10、20 μL，依次進(jìn)樣，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積，以黃芪甲苷進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（X），以峰面積自然對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線(xiàn)性回歸，計(jì)算回歸方程為Y=2.0242X+6.9902，r=0.9997，結(jié)果表明黃芪甲苷在0.1385～2.77 μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.7精密度試驗(yàn)：重復(fù)對(duì)黃芪甲苷對(duì)照品溶液進(jìn)樣5次，每次10 μL，測(cè)定其峰面積，RSD為0.49%，表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取供試品溶液，每0、2、4、6、8、12 h，按色譜條件測(cè)定。記錄測(cè)定結(jié)果，黃芪甲苷峰面積RSD為1.1%（n=6），表明在12 h之內(nèi)測(cè)定供試品穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批號(hào)供試品（120508）6份，按供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，測(cè)定峰面積，代入線(xiàn)性方程，得平均含量為1.41毫克/袋（n=6），RSD=0.90%；說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.10加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同批已知含量的供試品（批號(hào)為120517，含量為0.0705 mg/g）6份，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液2.5 mL，按供試品測(cè)定方法制備成6份溶液，測(cè)定含量，計(jì)算其回收率，具體見(jiàn)表1，黃芪甲苷的平均回收率為98.0%，RSD為1.5%。

2.11供試品測(cè)定：取制備好的供試品溶液和對(duì)照品溶液，其中對(duì)照品分別進(jìn)樣10 μL和20 μL，供試品進(jìn)樣20 μL，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3　討　論

3.1用紫外檢測(cè)器檢測(cè)黃芪甲苷時(shí)，由于黃芪甲苷紫外吸收在近末端，干擾較大，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種通用性檢測(cè)器，可以消除紫外末端吸收引起的干擾，是檢測(cè)黃芪甲苷的較好方法。

3.2原標(biāo)準(zhǔn)中黃芪甲苷測(cè)定采用薄層掃描法，由于提取時(shí)前處理步驟多，同時(shí)需要對(duì)薄層板進(jìn)行顯色，重現(xiàn)性差，誤差也較大，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷含量，操作簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果更準(zhǔn)確。

［1］國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-413（Z-085）-2003（Z）［S］.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典2010年版一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:283.

［3］周洪波，葛曉明，房志堅(jiān)，等.HPLC-ELSD法測(cè)定玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量［J］.中藥材，2007，30（6）:739-740.

［4］孫健，劉泓，范斌.HPLC-ELSD法測(cè)定祝艾膠囊康中黃芪甲苷的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（4）:60-61.

［5］劉惠珍.HPLC-ELSD法測(cè)定胃瘍靈顆粒中黃芪甲苷的含量［J］.中國(guó)藥師，2009，12（1）:79-80.

［6］江霞，劉紀(jì)青.HPLC法測(cè)定竺黃噴霧劑中黃芪甲苷的含量［J］.中國(guó)藥房，2013，24（23）:2170-2171.

Determination of Astragaloside in Cuiru Granules by HPLC-ELSD Method

ZHANG Zu-liang，DENG Zi-yuan
（Liu'an Food and Drug Inspection Center，Liu'an 237000，China）

Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determinatione of astragaloside in Cuiru Granules. Methods ZORBAX Eclipse XDB-C18 column was used with acetonitrile-water （33∶67） as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min. Results The linear range of astragaloside was 0.1385-2.77 μg （r=0.9997）. The average recovery was 98.0% with RSD of 1.5% （n=6）. Conclusion The method is specific and simple.

Cuiru Granules；Astragaloside；HPLC-ELSD

R9

B

1671-8194（2015）22-0031-02