聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的應(yīng)用價(jià)值比較

賀賽紅

【摘要】目的：探討聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的應(yīng)用價(jià)值。方法：采用聚集沉淀涂片法和直接涂片抗酸染色法對96份確診為肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果：聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的陽性率分別為54.17%、29.17%，聚集沉淀涂片法檢測的陽性率明顯高于直接涂片法。結(jié)論：聚集沉淀涂片法操作較為簡便，可提高抗酸桿菌陽性的檢出率，彌補(bǔ)直接涂片法陽性檢出敏感率低的缺點(diǎn)，便于在臨床實(shí)驗(yàn)室普及和推廣。

【關(guān)鍵詞】聚集沉淀涂片；直接涂片抗酸染色法；抗酸桿菌

【中圖分類號】R722.12【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0019（2015）01-0156-01

抗酸桿菌-結(jié)核分枝桿菌是引起肺結(jié)核的病原菌，隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，針對結(jié)核分枝桿菌檢測的新方法陸續(xù)被應(yīng)用，新方法的應(yīng)用都有各自的優(yōu)勢和劣勢。如利用儀器BACT/ALERTD法培養(yǎng)檢測，所需時間較長。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法、噬菌體裂解法、PCR-斑點(diǎn)雜交法等方法，雖然檢測快速，靈敏度高，但成本太高，有時還需要輔助特殊儀器和設(shè)備，因此無法在基層實(shí)驗(yàn)室普及和應(yīng)用。免疫學(xué)檢測方法雖然操作簡單、快速，特異性高，但其只能作為一種輔助診斷方法[1]。當(dāng)前痰標(biāo)本涂片，染色，顯微鏡檢查結(jié)核分枝桿菌仍然基層實(shí)驗(yàn)室采用的主要檢驗(yàn)方法。為提高涂片的陽性檢測率，我們將痰標(biāo)本先液化濃縮處理后涂片抗酸染色檢查抗酸桿菌，取得理想效果，現(xiàn)報(bào)告如下：

1材料和方法

1.1病例來源

2011年2月～2014年8月間來我疾控中心就診的96例肺結(jié)核患者，其中男58例，女38例，年齡16～78歲，平均年齡（52.67±10.24）歲。

1.2標(biāo)本采集

98例臨床確診為肺結(jié)核病的患者，采用WHO推薦的國際通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒、蠟紙盒采集痰標(biāo)本（參考規(guī)格：直徑4cm，高度2cm），每份痰量在3～5ml。需取即時痰（就診時患者深呼吸后咳出的痰液）、夜間痰（送檢前一天患者晚間咳出的痰液）、晨痰（患者晨起立即用清水漱口后咳出的痰液）。樣本采集運(yùn)送及儲存均嚴(yán)格按照相應(yīng)操作規(guī)程。

1.3方法

1.3.1直接涂片法檢查前對新的玻片用95%的乙醇擦拭脫脂，經(jīng)干燥、清潔、檢查無油污、無劃痕后作為合格的玻片備用，用記號筆在玻片背面一端1/3處注明實(shí)驗(yàn)室序號及標(biāo)本序號。用折斷的專用竹簽茬端挑取痰標(biāo)本中干酪樣、膿樣或可疑部分約0.05～0.1ml，于玻片正面右側(cè)2/3處，均勻涂抹成1cm×2cm的卵圓形痰膜，待其自然干燥后，抗酸染色，鏡檢。注意痰涂片的制備和固定過程，應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，以免對操作人員造成生物危害，污染工作環(huán)境。

1.3.2聚集沉淀涂片方法首先，對標(biāo)本進(jìn)行液化處理，將待檢標(biāo)本放在50ml有蓋的離心管中，加等體積的4%NaOH或H2SO4，用旋轉(zhuǎn)振蕩器混勻打散痰液。然后進(jìn)行離心沉淀，以3000轉(zhuǎn)/min離心沉淀15min，取出，將懸浮液倒入含有消毒液的缸內(nèi)。最后，取沉淀物。在載玻片上涂片（1cm×2cm），待自然干燥，抗酸染色，鏡檢。

1.4染色參考《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊》中抗酸染色法（萋-尼氏抗酸染色），染色液由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司提供。

1.5鏡檢報(bào)告鏡檢結(jié)果報(bào)告參照《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊》鏡檢結(jié)果分級報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)：抗酸桿菌陰性（-）：連續(xù)觀察300個不同視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野；抗酸桿菌陽性（1+）：3～9條/100視野；抗酸桿菌陽性（2+）：1～9條抗酸桿菌/10視野；抗酸桿菌陽性（3+）：1～9條抗酸桿菌/每視野；抗酸桿菌陽性（4+）：≥10條抗酸桿菌/每視野。

2結(jié)果

對96份確診肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本均采用直接涂片法和聚集沉淀涂片法進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果見表1。直接涂片法檢出28例陽性，陽性率為29.17%。聚集涂片法檢出陽性52例，陽性率為54.17%。聚集沉淀涂片法檢測的陽性率明顯高于直接涂片法。

3討論

結(jié)核病是臨床常見的一種慢性和緩發(fā)的傳染病，其中以肺結(jié)核最為常見，約占結(jié)核病的80%左右，嚴(yán)重威脅人類健康。早期診斷肺結(jié)核，以采取科學(xué)有效的治療方法，對于提高患者治愈率有重要的意義。近年來，結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查一直是發(fā)現(xiàn)主要傳染源的途徑和手段，為結(jié)核病的正確診斷、治療和療效評價(jià)提供了重要的依據(jù)。近50多年來，我國一直沿用并不斷改進(jìn)結(jié)核分枝桿菌的細(xì)菌學(xué)涂片，細(xì)菌培養(yǎng)，藥敏實(shí)驗(yàn)和菌型鑒定方法，結(jié)核病診斷水平不斷提高。而且在細(xì)菌學(xué)檢測的基礎(chǔ)上，逐步引進(jìn)免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測技術(shù)等對結(jié)核病進(jìn)行聯(lián)合檢測，大大提高了結(jié)核菌的陽性檢出率。免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了檢測速度和靈敏度，但其操作程序較為復(fù)雜，技術(shù)要求高，檢測成本高，而且檢測特異性及結(jié)果解釋等還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。因此痰標(biāo)本涂片，染色，顯微鏡檢查結(jié)核分枝桿菌這種常用診斷方法，仍然是最為普及和經(jīng)濟(jì)的診斷方法。直接涂片法檢測結(jié)核分枝桿菌，一般痰液中的含菌量在105/ml以上，才能得到陽性結(jié)果，如果痰液中的含菌量在105/ml以下，陽性率檢出率低。而聚集沉淀涂片法是聚集分散在整個標(biāo)本內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌（MTB），將痰液濃縮到沉淀中，可提高涂片選取標(biāo)本內(nèi)的MTB含量，抗酸桿菌陽性檢出率有所提高。本組研究資料中，聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的陽性率分別為54.17%、29.17%，聚集沉淀涂片法比直接涂片法陽性檢測率有了較大的提高。綜上所述，聚集沉淀涂片檢測抗酸桿菌，有利于提高檢測的靈敏度，陽性檢測率也得以提高，而且這種方法操作簡便、快速，設(shè)備投入少，成本低廉，可值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1]劉春玉.實(shí)驗(yàn)室直接涂片抗酸染色法與聚集沉淀涂片檢測抗酸桿菌的應(yīng)用比較[J].中國民族民間醫(yī)藥.2012，21（13）：57.