高效液相色譜質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中的萊克多巴胺

引言

瘦肉精是指能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)的一類(lèi)藥物的統(tǒng)稱(chēng)，主要包括：鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等腎上腺素受體激動(dòng)劑。豬攝入瘦肉精后能加速生長(zhǎng)、降低脂肪沉積、提高瘦肉率、提高飼料報(bào)酬，但豬食用瘦肉精后會(huì)在組織內(nèi)形成殘留，人類(lèi)食用后直接危害人體健康。2002年農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部和國(guó)家藥品監(jiān)督管理局聯(lián)合發(fā)文，將鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺一同列入《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》（中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告 第176號(hào)）。

2008年以來(lái)，國(guó)內(nèi)就多次發(fā)生由于豬肉中高濃度的瘦肉精導(dǎo)致的中毒事件。萊克多巴胺過(guò)量攝取會(huì)引起神經(jīng)興奮，出現(xiàn)肌肉振顫、心慌、頭疼、惡心、嘔吐、甚至心臟驟停致昏迷死亡等癥狀，特別對(duì)心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病和甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)等患者有極大危害。所以對(duì)豬肉中的萊克多巴胺含量進(jìn)行檢測(cè)很有必要。

1.試驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

1.1.1儀器

Agilent 6460高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀

J2Scientific Preplinc AS4全自動(dòng)固相萃取儀

1.1.2試劑

萊克多巴胺，純度97.0%

乙酸銨（0.2mol/L）：稱(chēng)取7.7g乙酸銨，加水溶解并稀釋至500mL，用乙酸調(diào)pH至5.2

β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶

高氯酸（0.1mol/L）：稱(chēng)取14.35g 70%高氯酸，加水稀釋至1000mL

氫氧化鈉溶液（10mol/L）：稱(chēng)取400g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1000mL

甲酸水溶液：2%

甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）

1.2儀器工作條件

1.2.1色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18 50mm×2.1mm×1.8?m 流速：0.4ml/min

柱溫：40℃ 進(jìn)樣體積：2?l 流動(dòng)相：A0.1%甲酸水 B 0.1%甲酸乙腈

梯度 時(shí)間（min） %A %B

0 92 8

1 92 8

5 60 40

8 92 8

1.2.2質(zhì)譜條件

干燥氣溫度：350℃ 干燥氣流速：5L/min 霧化氣壓力：45psi

鞘氣溫度：400℃ 鞘氣流速：12L/min

待測(cè)物 MRM通道（m/z） Fragmentor（V） Collision Energy（V）

萊克多巴胺 320.2>164.0 90 15

萊克多巴胺 320.2>107.1 90 25

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1工作曲線

準(zhǔn)確移取萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，用流動(dòng)相稀釋成濃度分別為2，4，8，16，40?g/L的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜質(zhì)譜分析。以萊克多巴胺為橫坐標(biāo)，離子峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2樣品的預(yù)處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.00g測(cè)試樣品于50ml離心管中，加入0.2mol/L乙酸銨溶液（pH=5.2）8.0ml，再加入β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶40?l，渦旋混勻，于37℃下避光水浴振蕩16h酶解后放置至室溫，10000r/min高速離心10min，傾出上清液于另一50ml離心管內(nèi)，加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，渦旋混勻，用高氯酸調(diào)pH至1.0，10000r/min高速離心10min后，將上清液轉(zhuǎn)移至另一50ml離心管內(nèi)。用10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9.5，加入乙酸乙酯15ml，渦旋混勻，并振蕩10min，5000r/min離心5min，取出上層有機(jī)相至另一50ml離心管內(nèi)。再在下層水相中加入叔丁基甲醚10ml，渦旋混勻，并振蕩10min，5000r/min離心5min，合并有機(jī)相，50℃下氮?dú)獯蹈桑?%甲酸水溶液5ml溶解，經(jīng)全自動(dòng)固相萃取儀萃取、凈化，最后用甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）0.2ml溶解，供高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.3測(cè)定

將儀器調(diào)至最佳測(cè)定條件，設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)系列各點(diǎn)濃度及試樣質(zhì)量、定容體積、稀釋倍數(shù)。待儀器穩(wěn)定后依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)系列、樣品空白溶液、樣品溶液。

2.結(jié)論

采用高效液相色譜質(zhì)譜法建立了豬肉中的萊克多巴胺含量的檢測(cè)方法。樣品中殘留藥物經(jīng)酶解后，再高速離心去蛋白，用乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取，固相萃取、凈化，經(jīng)Agilent SB-C色譜柱分離，梯度洗脫，外標(biāo)法定量。經(jīng)實(shí)際樣品檢測(cè)的試驗(yàn)，該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，適合于肉制品中萊克多巴胺的日常檢測(cè)。

（作者單位：馬鞍山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所）

作者簡(jiǎn)介

方猛，男，1975年生，馬鞍山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所食品化工室主任，高級(jí)工程師.