心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型研究

周晟芳等

摘要：目的 探討手術(shù)方法建立心肌缺血型冠心病與腎虛血瘀病證結(jié)合模型的可行性。方法 采取驚嚇、置于寒冷環(huán)境并皮下注射氫化可的松的方法制備非疾病腎虛血瘀證候模型，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支并注射氫化可的松建立心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型。實(shí)驗(yàn)大鼠分為腎虛血瘀組、病證結(jié)合組和正常組，每組5只。觀察大鼠造模前后體溫、體質(zhì)量、呼吸頻率、心率、全血黏度、卡松黏度。依據(jù)中醫(yī)臨床腎虛血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)2種模型中醫(yī)證候進(jìn)行比較。結(jié)果 與正常組和本組造模前比較，腎虛血瘀組、病證結(jié)合組大鼠造模后均出現(xiàn)體溫下降、呼吸頻率增快（P<0.05）；與正常組比較，病證結(jié)合組、腎虛血瘀組體質(zhì)量減輕或者增長(zhǎng)緩慢、全血黏度及卡松黏度升高（P<0.05，P<0.01）；造模兩組間全血黏度、心電圖比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 2種模型在中醫(yī)證候方面無(wú)明顯差異，符合中醫(yī)臨床腎虛血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：心肌缺血型冠心??；動(dòng)物模型；腎虛血瘀；病證結(jié)合；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.09.016

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2015）09-0056-04

Research on the Model of Combining Myocardial Ischemic Coronary Disease with Syndrome of Kidney Deficiency and Blood Stasis ZHOU Sheng-fang， LIU Ru-xiu， YIN Lin-lin， LUO He-wei， LI Hui， GUAN Xuan-ke （Guanganmen Hospital， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100053， China）

Abstract：Objective To discuss the feasibility of establishing the model of combining myocardial ischemic coronary disease with syndrome of kidney deficiency and blood stasis by surgical method. Methods Non-disease of kidney deficiency and blood stasis syndrome model was built by taking the methods of fright， being placed in a cold environment and injection of hydrocortisone. The model of combining the myocardial ischemic coronary disease with the syndrome of kidney deficiency and blood stasis was established through ligating the left anterior descending branch of artery and injecting hydrocortisone. The rats were divided into kidney deficiency and blood stasis group， combination of disease and syndrome group， and normal group， 5 rats in each group. The temperature， weight， heart rate， breathing rate and whole blood viscosity， casson viscosity of the rats in the two groups before and after modeling were observed. According to TCM clinical diagnosis criteria of kidney deficiency and blood stasis syndrome， TCM syndrome characteristics of the two groups were compared. Results Compared with normal groups and before modeling， rat temperature dropped and breathing rate increased in kidney deficiency and blood stasis group， combination of disease and syndrome group （P<0.05）. Compared with normal group， rat weight decreased or grew slowly， and whole blood viscosity and casson viscosity increased （P<0.05， P<0.01）. There were statistical significant differences in whole blood viscosity and electrocardiogram between the two groups （P<0.05）. Conclusion There is no obvious difference between TCM syndrome characteristics of the two groups. They all meet the TCM clinical diagnosis criteria of kidney deficiency and blood stasis syndrome.

Key words：myocardial ischemic coronary disease；animal model；kidney deficiency and blood stasis；combination of disease and syndrome；rats

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2007BAI10B01-093）；北京市自然科學(xué)基金（7122153）；北京中醫(yī)藥“薪火傳承3+3工程”（830104）

通訊作者：劉如秀，E-mail：Liuruxiu1@163.com

病證結(jié)合研究是中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)學(xué)理論基礎(chǔ)，建立動(dòng)物病證結(jié)合模型是中醫(yī)藥現(xiàn)代研究取得突破性進(jìn)展的關(guān)鍵。目前，中醫(yī)藥對(duì)心肌缺血型冠心病的實(shí)驗(yàn)研究大多局限于建立疾病模型，而忽視了動(dòng)物模型的中醫(yī)證候表現(xiàn)，難以全方位體現(xiàn)中醫(yī)藥治療心肌缺血型冠心病的機(jī)制及特點(diǎn)。本研究通過(guò)手術(shù)方法建立心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型，并與非疾病腎虛血瘀證候模型相對(duì)照，通過(guò)比較其中醫(yī)證候特點(diǎn)，探討手術(shù)方法建立心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型的可行性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

2月齡Wistar大鼠15只，清潔級(jí)，體質(zhì)量（250±20）g，雌雄不拘，本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（京）2012-0001。分籠飼養(yǎng)于本院SPFⅡ級(jí)動(dòng)物房，溫度（20±2）℃，相對(duì)濕度45%～70%。

1.2 藥物

鹽酸利多卡因注射液，北京益民藥業(yè)有限公司，批號(hào)20130120；氫化可的松注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1303021；注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限公司，批號(hào)F3071110。

1.3 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉，上海艾研生物有限公司，批號(hào)081130251。RM6240C多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都儀器廠），HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司），SA-6000全自動(dòng)血流變測(cè)試儀（北京賽科希德科技發(fā)展有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組

實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常組、非疾病腎虛血瘀證候模型組（腎虛血瘀組）、心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合組（病證結(jié)合組），每組5只。

2.2 腎虛血瘀證候模型制造

參照文獻(xiàn)[1-4]方法，每日以冰水冷敷大鼠胸前區(qū)部位并驚擾大鼠30 min，皮下注射氫化可的松（0.37 mg/100 g），連續(xù)7 d制作腎虛血瘀大鼠模型。

2.3 病證結(jié)合模型制造

參照文獻(xiàn)[5-8]方法，采用左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎制備心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型。具體步驟如下：大鼠稱重，1%戊巴比妥鈉0.4 mL/100 g腹腔注射麻醉；將其背位固定，頭頸部自然伸直并固定，以上界胸骨上緣、下界劍突、左界胸骨左緣、右界左腋中線備皮消毒；用針形電極插入四肢皮下，觀察描記心電圖；將固定大鼠的木板傾斜至45°，將氣管插管貼唇內(nèi)中線插入氣道，將薄棉絲置于管口前1 cm處，棉絲隨著管口進(jìn)出的氣流擺動(dòng)，即可證實(shí)插管在氣道，固定氣管插管；連呼吸機(jī)，呼吸頻率80次/min，吸呼比1∶2，潮氣量3 mL/kg；術(shù)區(qū)消毒后，以胸骨柄為第二肋標(biāo)志，定位于第三肋，即左胸心跳搏動(dòng)最高處，縱行開(kāi)胸2 cm左右，鈍性分離肌層，打開(kāi)胸腔，平行于肋間方向放置眼科開(kāi)瞼器，擴(kuò)大肋間隙，輕撕心包膜以充分暴露心臟，在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐間可以看見(jiàn)左冠狀靜脈主干走行及其分支，冠狀動(dòng)脈左前降支與之伴行。用持針器夾住5-0帶線縫合針在左心耳下緣約2 mm處，沿前降支起始部進(jìn)針，肺動(dòng)脈圓錐處下1 mm出針，將左前降支連同少量心肌組織一起結(jié)扎，進(jìn)針深度0.5 mm，寬度2～3 mm；結(jié)扎后即刻，心臟表面給予利多卡因注射液1～2滴以防止室性心律失常，減輕心臟負(fù)荷；迅速將心臟復(fù)位，取出胸腔內(nèi)的棉球等殘留器械，徹底止血后輕柔擠壓胸腔排盡氣體，使胸腔恢復(fù)負(fù)壓；觀察心電圖造成左前降支梗死缺血圖后縫合。

造模成功的標(biāo)志是結(jié)扎部位以下心肌顏色變淺、呈灰白色，監(jiān)測(cè)心電圖肢導(dǎo)出現(xiàn)以下標(biāo)準(zhǔn)之一[9]：ST段弓背向上，J點(diǎn)抬高1.5 mV；T波低平（50%）、雙向、倒置；ST段下移0.5 mV。逐層縫合肋骨、肌肉和皮膚，關(guān)閉胸腔，碘伏處理切口；恢復(fù)自主呼吸后去除呼吸機(jī)。腹腔注射利多卡因注射液0.1～0.2 mL防止心律失常。腹腔注射青霉素20萬(wàn)U/d，連續(xù)3 d，抗感染。術(shù)后7 d皮下注射0.37 mg/100 g氫化可的松，促進(jìn)大鼠腎虛證模型形成。全部手術(shù)過(guò)程在30 min內(nèi)完成，嚴(yán)格無(wú)菌操作。術(shù)前、術(shù)后分別記錄心電圖。術(shù)后單籠飼養(yǎng)，3 d后合籠。

2.4 腎虛血瘀證動(dòng)物模型的中醫(yī)證候標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合虛證及老年病研究專業(yè)委員會(huì)修訂的虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)[10]及中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)活血化瘀專業(yè)委員會(huì)制定的血瘀證辨證標(biāo)準(zhǔn)[11]，腎虛血瘀證有“心悸、胸悶心痛、畏寒肢冷、舌淡紫、脈弱而澀或結(jié)代”等表現(xiàn)，并伴有不同程度的活動(dòng)障礙。本研究分別以心率、呼吸、體溫來(lái)代表“心悸”“胸悶心痛”“畏寒肢冷”，同時(shí)觀察體質(zhì)量重變化替代全身狀況變化，測(cè)量血液流變學(xué)指標(biāo)以衡量血瘀程度，以心電圖衡量由心臟冠脈前降支結(jié)扎手術(shù)后導(dǎo)致的心臟供血障礙程度。

2.5 觀察指標(biāo)

2.5.1 一般情況 觀察大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、皮毛色澤、大小便等。

2.5.2 體質(zhì)量 記錄大鼠造模前后體質(zhì)量變化。

2.5.3 體溫 手術(shù)前、采血前分別以電子體溫計(jì)測(cè)量肛溫。以溫度計(jì)金屬探頭插入肛門(mén)約2 cm處，持續(xù)1 min，以溫度計(jì)數(shù)值恒定不變?yōu)闃?biāo)準(zhǔn)。

2.5.4 呼吸頻率 手術(shù)與采血前1 h，大鼠安靜狀態(tài)測(cè)量每分鐘呼吸次數(shù)。

2.5.5 心率及心電圖 大鼠四肢皮下插入電極連接RM6240C多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)儀與電腦相連輸出，在大鼠安靜狀態(tài)下記錄體表心電圖，以連續(xù)10個(gè)RR間期的均值計(jì)算心率，并分析有無(wú)心肌缺血表現(xiàn)。

2.5.6 血液流變學(xué)指標(biāo) 病證結(jié)合組造模后第7日麻醉各組動(dòng)物，腹腔取血5 mL，加入肝素抗凝管中，用SA-6000全自動(dòng)血流變測(cè)試儀測(cè)定不同切變率全血黏度、卡松黏度。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以—x±s表示，符合正態(tài)分布的2組間比較用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的2組間比較用Wilcoxon檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

在證候造模過(guò)程中，腎虛血瘀組死亡2只，存活13只分別為正常組5只、腎虛血瘀組3只、病證結(jié)合組5只。2組造模后大鼠體質(zhì)量減輕或者增長(zhǎng)緩慢，較正常組和造模前差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1）。造模后精神不振，倦怠嗜睡，易激惹，遇抓捕精神緊張，可見(jiàn)小便失禁、面目浮腫、活動(dòng)減少、反應(yīng)遲緩、畏寒喜暖、毛色淡黯無(wú)光澤、大便質(zhì)稀、舌色紅黯或淡紫等腎虛血瘀證表現(xiàn)。2組造模大鼠體溫均較正常組和造模前降低（見(jiàn)表2），均出現(xiàn)呼吸急促、呼吸時(shí)胸部起伏增大、呼吸頻率增快（見(jiàn)表3）。2組造模大鼠心率均較正常組和造模前有所下降，心電圖顯示腎虛血瘀組大鼠心率較前下降、心電圖正常，病證結(jié)合組大鼠心率較前下降、心電圖異常，3組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表4）。2組造模大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)全血黏度及卡松黏度較正常組升高（見(jiàn)表5）。7 d后心電圖顯示，與正常組比較，腎虛血瘀組大鼠無(wú)心肌缺血表現(xiàn)；病證結(jié)合組大鼠為心肌缺血心電圖，有ST段弓背向上或T波改變等表現(xiàn)（見(jiàn)圖1～圖3）。

5 討論

心肌缺血型冠心病是心血管系統(tǒng)的常見(jiàn)多發(fā)病，是由于灌注心臟自身的血液減少，引起心臟供氧不足，心肌能量代謝失調(diào)，不能維持心臟正常運(yùn)作而致的心肌缺血等一系列表現(xiàn)。心肌缺血型冠心病屬中醫(yī)“胸痹”“心痛”等范疇，其病機(jī)為首先責(zé)之正氣虛弱，尤以宗氣不足為病之因，心陽(yáng)虧虛為病之本，腎陰匱乏為病之根。腎陽(yáng)為一身陽(yáng)氣之根本，對(duì)臟腑組織起溫煦、氣化的作用，腎陽(yáng)虛損，不能氣化腎陰，而致陰陽(yáng)兩虛。腎虛不能溫煦，陰寒內(nèi)盛，凝聚不散，久而血行不暢致腎虛血瘀證，主要表現(xiàn)為心痛、心悸、胸悶、眩暈、甚則昏厥等。本研究旨在探索腎虛血瘀型冠心病心肌缺血病證結(jié)合模型的可行性，結(jié)果表明，腎虛血瘀組與病證結(jié)合組大鼠較正常組和建模前均出現(xiàn)體重減輕、體溫降低、呼吸頻率增快、心率減慢、血液流變學(xué)呈高黏度等表現(xiàn)，且除心電圖外，2組大鼠在上述指標(biāo)的變化上無(wú)明顯差異，符合中醫(yī)臨床腎虛血瘀證候特點(diǎn)。病證結(jié)合組大鼠心電圖較腎虛血瘀組有明顯不同，病證結(jié)合組心電圖呈心肌缺血型改變。

心電圖改變是心肌缺血型冠心病的首要診斷依據(jù)。冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎后，供血不足，因此心電圖發(fā)生改變；而非疾病腎虛心陽(yáng)瘀阻證候模型并未造成心臟實(shí)質(zhì)性病變，僅發(fā)生中醫(yī)病理功能性改變，故而其心電圖沒(méi)有出現(xiàn)心肌缺血表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支并注射氫化可的松建立心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型可行且模型穩(wěn)定。

本實(shí)驗(yàn)所建立的心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型，是在手術(shù)建立西醫(yī)疾病模型的基礎(chǔ)上，并不施加人為因素，而是通過(guò)觀察疾病模型建立成功后的證候表現(xiàn)，并將之與傳統(tǒng)中醫(yī)腎虛血瘀模型相對(duì)照，比較其證候是否符合中醫(yī)腎虛血瘀證的特點(diǎn)，從而確定建模后動(dòng)物所表現(xiàn)的中醫(yī)證型。這種方法更能體現(xiàn)病證結(jié)合的內(nèi)涵，符合中醫(yī)先診病后辨證的臨床實(shí)際。陳氏等[12]研究發(fā)現(xiàn)，治療冠脈結(jié)扎法建立的大鼠急性心肌缺血模型以失笑散和瓜蔞薤白白酒湯療效分居一二，提示冠脈結(jié)扎法可致心腎虛血瘀證型。此外，以冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎法可成功建立心肌缺血型冠心病腎虛血瘀病證結(jié)合模型，從另一方面也印證了臨床心肌缺血型冠心病患者中醫(yī)病理變化大多屬于腎虛血瘀證。該心肌缺血型冠心病模型前降支結(jié)扎后心肌供血供氧不足，心臟能量代謝異常，心臟收縮能力減弱，導(dǎo)致血液流行不暢，血液流變學(xué)顯示血黏度增高，同時(shí)大鼠有舌色淡紫或紫黯，體現(xiàn)了中醫(yī)“因虛致瘀”的表現(xiàn)。且從中醫(yī)證候變化上衡量該模型，符合腎虛為本、因虛致瘀、血瘀為標(biāo)的病理實(shí)質(zhì)。我們前期研究表明，滋腎活血方治療心肌缺血型冠心病安全有效[13-14]，其療效機(jī)制可能與改善心肌供氧供血有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張碩辛.病態(tài)竇房結(jié)綜合征陽(yáng)虛血瘀大鼠病癥結(jié)合模型的研究[D].哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[2] 李長(zhǎng)祿.腎虛型老年癡呆大鼠模型的建立及藥物驗(yàn)證[D].北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2013.

[3] 陳益丹，沈蓉，張志雄.氫化可的松“虛證”模型大鼠的心率變異性研究[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，21（1）：40-42.

[4] 杜江，李楠，王和鳴.腎虛模型造模方法及相關(guān)指標(biāo)[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（50）：9433-9436.

[5] 賀海波，許佳，徐媛青，等.竹節(jié)參總皂苷預(yù)處理對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血損傷的影響[J].中藥材，2012，35（5）：744-749.

[6] 王馨.益氣活血方對(duì)大鼠心肌缺血及閏盤(pán)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[D].哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[7] 劉濤，徐秋玲，王偉，等.氣虛血瘀證大鼠模型缺血心肌蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2010，42（7）：67-69.

[8] 譚雙，王彥云，劉如秀，等.強(qiáng)心復(fù)脈顆粒對(duì)兔右冠狀動(dòng)脈缺血再灌注心律失常的干預(yù)作用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，28（1）：51-53.

[9] 章忱，盛學(xué)仕，呂嶸，等.動(dòng)物心肌缺血中醫(yī)證型規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)化研究（二）[J].上海中醫(yī)藥雜志，2003，37（3）：42-45.

[10] 沈自尹，王文健.中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1986， 6（10）：598.

[11] 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合研究會(huì)活血化瘀專業(yè)委員會(huì).血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)（1986年11月修訂）[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1987，7（3）：129.

[12] 陳世宏，葉耘，尚正錄，等.不同治法對(duì)大鼠心肌缺血模型中醫(yī)證型的反證研究[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，19（4）：36-38.

[13] 劉如秀，劉宇，徐利亞，等.劉志明從腎論治胸痹[J].四川中醫(yī)，2013， 31（2）：1-3.

[14] 劉如秀，徐利亞，劉金鳳，等.滋腎通陽(yáng)活血方聯(lián)合西藥治療冠心病心絞痛臨床研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（8）：23-26.

（收稿日期：2015-02-04；編輯：華強(qiáng)）