奶牛乳房炎病原菌分離鑒定和耐藥性的調(diào)查

程霞

摘要：奶牛乳房炎是由于物理、化學、生物等因素引起的乳房炎癥，是奶牛常見病和多發(fā)病之一，給奶牛飼養(yǎng)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。該病可使奶牛泌乳機能受損，生殖機能失調(diào)，導致產(chǎn)奶量下降，乳品質(zhì)量發(fā)生改變，延長產(chǎn)后發(fā)情和妊娠時間，造成嚴重的經(jīng)濟損失。本文通過對奶牛乳房炎病原菌分離鑒定和其耐藥程度的調(diào)查，可以更好地指導臨床治療工作。進行臨床采集病原菌標本和耐藥性實驗，根本目的是為了防治奶牛乳房炎，促進我國奶制品產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎；病原菌；耐藥性調(diào)查

奶牛乳房炎主要是由微生物引起的一類疾病，物理或化學性損傷也可導致該病發(fā)生，它已成為世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)的主要殺手，導致奶產(chǎn)量減少，乳品質(zhì)量下降而造成巨大的經(jīng)濟損失，還會產(chǎn)生嚴重的食品安全問題。掌握奶牛乳房炎致病菌的種類和耐藥性對預防治療工作是至關(guān)重要的。

1 材料與方法

1.1 關(guān)鍵材料和試劑

培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂、綿羊鮮血、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂、甘露醇高鹽瓊脂、疊氮鈉血；營養(yǎng)肉湯和各種生物微量鑒定管（購自蘭州榮昌生物制品有限公司）。

試驗試劑：阿莫西林、青霉素、慶大霉素、林可霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、紅霉素、四環(huán)素、恩諾沙星。

1.2 采集乳樣

乳樣的數(shù)量是100份，在整個采集過程中注意清潔，采集之前用清水和酒精對乳頭進行消毒，之后對乳頭進行擦拭，擦拭材料應(yīng)選擇消毒紙。采樣過程中要從第四奶開始采集，大約5～10mL，置于滅菌瓶中在零下20℃的溫度下保存。

實驗試劑：革蘭氏染色試劑，CMT試劑，藥敏紙片。

實驗儀器：恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、接種針、L棒、酒精燈、吸管和錐形瓶等。

1.3 分離鑒定病原菌

在兀菌操作下，將普通瓊脂培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基進行接種，放置在37℃的條件下約24～48h，選取不同的菌落涂片進行染色檢查，從中分離出鏈球菌的菌株和葡萄球菌的菌株。在菌株培養(yǎng)工作完成后，將檢驗出的菌類進行株菌培養(yǎng)，加入營養(yǎng)湯縮短培養(yǎng)時間，時間在24h之內(nèi)，再選用合理的試劑進行鑒定，鑒定過程要按照完整的流程，過程保持連續(xù)以免發(fā)生錯誤，在整個過程中要進行嚴格的兀菌操作，一旦被細菌感染，實驗即兀效。

1.4 耐藥性的實驗

耐藥性可選用較常見的藥物進行測試，這些藥物效果明顯成本較低，比如青霉素類的、糖苷類的和四環(huán)素類的等等，具體的測試方法包括3個程序：通過可行的方法來調(diào)節(jié)菌液的濃度，再將細菌進行涂片來接種，實驗結(jié)束后，測量出具體的數(shù)據(jù)并認真記錄。

2 結(jié)果分析

2.1 細菌分離

在100份樣品中查出有91份含有6種病原菌，其中金黃色葡萄球菌占52.78%，表皮葡萄球菌占12.67%，停乳鏈球菌占20.83%，無乳鏈球菌占2.12%，乳房鏈球菌占6.94%，大腸桿菌占2.78%。根據(jù)分離和鑒定，總細菌中主要的細菌有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及其他細菌等。

2.2 耐藥性實驗

對復方新諾明有較強耐藥性的菌類：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌；對四環(huán)素有較強耐藥性的菌類：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；對萬古霉素和青霉素有較強耐藥性的菌類：大腸桿菌和停乳鏈球菌。接種有分離菌落營養(yǎng)肉湯的小白鼠12h后，出現(xiàn)腹瀉，發(fā)燒各狀況，精神萎靡，18h后死亡3只，其他沒有太大變化，收集死亡小白鼠肝臟、脾病料，涂片。革蘭氏顯鏡與上述細菌分離生化結(jié)果是一樣的。

3 討論

經(jīng)過本次調(diào)查，發(fā)現(xiàn)奶牛乳房炎的致病菌種類主要有葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，其中葡萄球菌46株，站24.8%，鏈球菌100株，占總數(shù)的55%，大腸桿菌34株，約占18.4%，其他細菌主要為沙門氏菌和棒狀菌混合感染比較嚴重，這三種菌類的致病因素都與環(huán)境衛(wèi)生質(zhì)量差有關(guān)，因此發(fā)生奶牛乳房炎的主要原因是養(yǎng)殖場在飼養(yǎng)和擠奶過程中沒有做好衛(wèi)生工作。長期以來，人們一直關(guān)注如何防止奶牛乳房炎卻沒有考慮到衛(wèi)生消毒問題。由于長期使用抗生素，養(yǎng)殖場中的細菌有一定的耐藥性，消毒液不能殺死它們。因此，養(yǎng)殖戶們要做好養(yǎng)殖場的衛(wèi)生工作，保持舍內(nèi)外清潔，擠奶過程中嚴把消毒關(guān)，做到提前預防，早發(fā)現(xiàn)，早治療，嚴格控制病情的蔓延。

藥敏實驗表明：分離出的細菌很大部分對環(huán)丙沙星、氧氟沙星，左氧沙星有很大的刺激感應(yīng)，不過對青霉素、紅霉素等卻有很大的耐藥性，由此可見，奶牛市場防治乳房炎的藥物使用有很大的盲目性存在，過度使用青霉素、紅霉素這些抗生素，免疫系統(tǒng)就會出現(xiàn)很大的抗藥性，導致細菌肆意滋生，因此要加強抗生素科學用藥的宣傳。

目前，在奶牛乳房炎的防治過程中，抗生素仍發(fā)揮著難以比擬的作用，但它也造成了很大的問題，大量的耐藥性細菌使奶牛的生活環(huán)境受到威脅。這就要求在病癥出現(xiàn)時，要采用藥物交叉使用的方法，防止菌體內(nèi)出現(xiàn)耐藥基因。