HPLC—ELSD法測定香菊片中黃芪甲苷的含量

魏紅立 劉俊霞 呂勤芝

摘要 [目的]建立了采用蒸發(fā)光散射檢測器測定香菊片中黃芪甲苷含量的高效液相色譜法。[方法]色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相為乙腈∶水（32∶68），蒸發(fā)光散射檢測器。[結(jié)果]以峰面積積分值的常用對數(shù)（X）對進(jìn)樣量的常用對數(shù)（Y）線性回歸方程為：Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），線性范圍為0.516～10.320 μg，回收率為91.0%，RSD為1.8%。[結(jié)論]該方法操作簡便、測定結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜法；蒸發(fā)光散射檢測器；香菊片；黃芪甲苷；含量

中圖分類號 S567 文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A 文章編號 05176611（2015）34-144-02

香菊片執(zhí)行國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ12122004，由化香樹果序（除去種子）、夏枯草、野菊花、生黃芪、辛夷、防風(fēng)、白芷、甘草、川芎水煎煮提取加工制成[1]，具有辛散祛風(fēng)、清熱通竅，用于治療急、慢性鼻竇炎、鼻炎[2-3]。香菊片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中黃芪甲苷含量測定方法為薄層掃描法，文獻(xiàn)報道中有關(guān)黃芪甲苷的含量測定方法為高效液相色譜法[4-6]，但采用高效液相色譜法測定香菊片中黃芪甲苷含量未見報道。筆者在此建立了采用蒸發(fā)光散射檢測器測定香菊片中黃芪甲苷含量的高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。高效液相色譜儀（Waters e2695）、2424蒸發(fā)光散射檢測器。

1.1.2 試藥和試劑。黃芪甲苷對照品（110781-200613）購于中國藥品生物制品鑒定研究院，乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。香菊片（規(guī)格：每片重0.32 g）由陜西白云制藥有限公司生產(chǎn)（批號130504）。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液制備。取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含黃芪甲苷0.5 mg/ml的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液制備。取香菊片30片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取6 g，加甲醇30 ml置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，用氯仿提取3次，每次20 ml，棄去氯仿液，水液用水飽和的正丁醇提取4次，每次15 ml，合并正丁醇液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次15 ml，棄去堿液。正丁醇液用水洗至中性，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.3 陰性對照溶液的制備。按香菊片處方比例稱取適量除生黃芪的其余藥味，按香菊片的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺生黃芪的陰性對照品，按照“1.2.2”方法制成缺生黃芪的陰性對照溶液。

1.2.4 色譜條件。色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相為乙腈∶水（32∶68），蒸發(fā)光散射檢測器。

1.2.5 方法學(xué)考察。

1.2.5.1 專屬性。在“1.2.4”色譜條件下，分別取對照品溶液、黃芪甲苷陰性對照溶液和香菊片供試品溶液各10 μl，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，考察方法專屬性。

1.2.5.2 線性關(guān)系考察。分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20 μl，按“1.2.4”色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積積分值的常用對數(shù)為縱坐標(biāo)、黃芪甲苷量的常用對數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。

1.2.5.3 穩(wěn)定性試驗。取同一供試品溶液，在放置0、1、2、4、8、12 h后精密吸取10 μl進(jìn)樣，測定峰面積值，計算RSD。

1.2.5.4 精密度試驗。取對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，按“1.2.4”色譜條件測定黃芪甲苷的峰面積，計算RSD。

1.2.5.5 重復(fù)性試驗。取同一個批號樣品，按“1.2.2”方法制備6份供試品溶液，分別測定峰面積，計算RSD。

1.2.5.6 加樣回收試驗。取已知含有量（黃芪甲苷0.306 mg/g）的同一批樣品（批號130504）適量，研細(xì)，取約4 g，精密稱定，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液2 ml。按照“1.2.2”制備加標(biāo)樣供試液。精密吸取加標(biāo)樣供試液10 μl，按照上述測定方法測定其峰面積，計算回收率和RSD。

1.2.6 樣品含量的測定。取生產(chǎn)廠家為陜西白云制藥有限公司批號為130504的樣品，按“1.2.5.2”方法對樣品進(jìn)行含量測定，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算香菊片中黃芪甲苷的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 專屬性。圖1表明，在“1.2.5.1”條件下樣品色譜圖中與黃芪甲苷對照品色譜圖相同的保留時間（約16 min）處有吸收峰，而陰性對照品溶液色譜圖在相同保留時間處未顯吸收峰，說明樣品溶液中的其他成分不影響主成分黃芪甲苷的測定，該方法的專屬性良好。

2.1.2 線性關(guān)系的考察。按照“1.2.5.2”方法操作，計算得回歸方程Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），表明黃芪甲苷在0.516～10.320 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗。按照“1.2.5.3”方法操作，計算得出峰面積積分值的RSD為1.7%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.4 精密度試驗。按“1.2.5.4”方法操作，計算得出峰面積積分值的RSD為1.9%，表明在此試驗條件下精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗。按照“1.2.5.5”方法操作，計算含量的RSD為1.8%，表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.1.6 加樣回收試驗。由表1可見，平均回收率為91.0%，RSD為1.8%，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定。

2.2 樣品含量測定 按“1.2.6”方法進(jìn)行含量測定，結(jié)果測得黃芪甲苷的含量為0.306 mg/g，而按其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ12122004檢驗，含量測定結(jié)果為0.312 mg/g，RSD為1.4%。表明該方法可行。

3 結(jié)論與討論

生黃芪為方中主要藥物，黃芪甲苷是黃芪的主要成分[1]。該試驗采用HPLC-ELSD法代替薄層掃描法測定黃芪甲苷的含量，結(jié)果表明，以峰面積積分值的常用對數(shù)（X）對進(jìn)樣量的常用對數(shù)（Y）線性回歸方程為：Y=1.334 6X+5.929 3（r=0.997 7），線性范圍為0.516～10.320 μg，回收率為91.0%，RSD為1.8%。該方法操作簡便、測定結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，克服了薄層掃描操作繁瑣、誤差較大的缺點，可用于香菊片中黃芪甲苷的含量測定，為提高完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供重要依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]

陜西白云制藥有限公司.國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）.香菊片：YBZ12122004[S].陜西白云制藥有限公司，2014.

[2] 劉宇，龔漢明，葉吉明.香菊片對NIH小鼠抗炎、鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[J].陜西中醫(yī)，2006（5）：634-635，641.