慢性乙型肝炎患者抗病毒治療過(guò)程中肝組織HBV cccDNA變化及與血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性

·論 著·

慢性乙型肝炎患者抗病毒治療過(guò)程中肝組織HBV cccDNA變化及與血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性

目的 觀(guān)察慢性乙型肝炎（乙肝）患者在阿德福韋酯（ADV）抗病毒治療過(guò)程中肝組織總的乙肝病毒核酸（HBV tDNA）、cccDNA含量變化及與血清 HBVDNA、HBsAg的相關(guān)性，探討肝組織HBV tDNA和cccDNA含量改變?cè)诳共《局委熤械囊饬x。方法 47例慢性乙肝患者口服ADV 10mg/d，每隔12周檢測(cè)病毒學(xué)、血清學(xué)和生化學(xué)等指標(biāo)。47例基線(xiàn)患者和24例治療48周患者行肝組織活檢及肝組織HBV tDNA和cccDNA檢測(cè)。結(jié)果 47例慢性乙肝患者ADV治療48周后，HBVDNA低于檢查下限占36.2％（17/47）；ALT和AST復(fù)常率分別為76.6％（36/47）和85.1％（40/47）。比較基線(xiàn)和48周均取肝活檢的24例患者，48周時(shí)血清和肝組織中HBVDNA載量均較基線(xiàn)顯著下降（P＜0.01），血清HBVDNA下降值大于肝組織HBV tDNA和肝組織HBV cccDNA（分別為3.21lg拷貝/ml、1.02lg拷貝/細(xì)胞和0.76lg拷貝/細(xì)胞）?；€(xiàn)時(shí)，24例患者肝組織HBV tDNA、cccDNA與血清 HBVDNA和 HBsAg呈正相關(guān)（P＜0.01）；但治療48周時(shí)，各指標(biāo)間無(wú)相關(guān)性。結(jié)論 ADV治療慢性乙肝患者可使其肝組織 HBV tDNA、cccDNA和血清 HBVDNA水平顯著下降，但血清HBVDNA下降較肝組織 HBV tDNA、cccDNA更為顯著。

慢性乙型肝炎；阿德福韋酯；乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（HBV cccDNA）；熒光定量

資料和方法

一、研究對(duì)象

入組病例為2010至2012年解放軍第八八醫(yī)院就診的慢性乙肝患者47例，男性33例，女性14例，年齡20～65歲，平均年齡（35.7±12.4）歲。其中HBeAgg陽(yáng)性37例，HBeAgg陰性10例，治療基線(xiàn)各項(xiàng)臨床指標(biāo)特點(diǎn)見(jiàn)表1。納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：入組病例均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》建議的治療指征，所有患者在ADV規(guī)范治療前半年內(nèi)未接受過(guò)抗病毒治療；排除合并失代償性肝硬化、自身免疫性肝病、藥物性肝病、代謝性肝病、酒精性肝炎及其他原因所致的肝損傷。所有患者給予ADV 10mg/d口服治療，隨訪(fǎng)觀(guān)察48周。每隔12周取血，檢測(cè)HBV 血清學(xué)標(biāo)志物、HBVDNA和肝功能等指標(biāo)。基線(xiàn)和治療48周時(shí)分別有47例和24例患者行肝穿刺活檢。

二、血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

采用科華試劑經(jīng)酶聯(lián)免疫法進(jìn)行HBV血清學(xué)標(biāo)志物定性檢測(cè)；采用Abbott I2000（美國(guó)雅培公司）化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)血清HBsAg；采用Abbottm2000全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)熒光定量PCR法檢測(cè)血清HBVDNA（根據(jù)雅培試劑說(shuō)明書(shū)：1IU/mL=3.41拷貝/mL）；采用Abbott Aeroset全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清ALT、AST等。

三、肝組織相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

采用熒 光定量 PCR 法［8］檢測(cè)肝 組 織 中 HBV cccDNA和tDNA。肝組織炎癥活動(dòng)度及纖維化程度分為0～4級(jí)（G）和0～4期 （S），病理學(xué)診斷結(jié)果由本院病理科出具報(bào)告。

四、耐藥位點(diǎn)檢測(cè)

據(jù)趙澄宇等［9］報(bào)道的巢式PCR方法擴(kuò)增基線(xiàn)患者血清HBVRT區(qū)（若出現(xiàn)耐藥位點(diǎn)，擴(kuò)增相應(yīng)基線(xiàn)肝組織 HBV cccDNA RT區(qū)），送至北京英濰捷基生物科技有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序，采用ContigExpress、BioEdit5.0和DNAStar4.0以及http：//www.hivgrade.de/cms/grade/hbv-tool.html中的生物信息學(xué)工具分析測(cè)序結(jié)果。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)非正態(tài)分布數(shù)據(jù)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)；肝組織炎癥分級(jí)、纖維化程度的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 47例慢性乙肝患者的臨床特點(diǎn)

結(jié)果

一、ADV治療48周時(shí)HBVDNA和HBeAg陰轉(zhuǎn)率、ALT和AST復(fù)常率

47例慢性乙肝患者經(jīng)ADV 治療48周時(shí)，HBVDNA＜103拷貝/mL者為36.2％（17/47），ALT復(fù)常率為76.6％（36/47），AST復(fù)常率為85.1％（40/47）。37例HBeAgg陽(yáng)性患者HBeAgg陰轉(zhuǎn)率為13.5％（5/37），HBeAg/抗-HBe血清轉(zhuǎn)換率為0。

二、慢性乙肝患者肝組織和血清學(xué)指標(biāo)在治療48周時(shí)變化情況

基線(xiàn)時(shí)，47例慢性乙肝患者肝組織HBV tDNA中位數(shù)是374.20拷貝/細(xì)胞，均值為（2.31±0.83）lg拷貝/細(xì)胞；HBV cccDNA中位數(shù)是3.31拷貝/細(xì)胞，均值為（0.41±0.65）lg拷貝/細(xì)胞。血清HBsAg均值為（4.12±0.76）lgIU/mL；HBVDNA均值為（7.93±1.65）lg拷貝/mL。HBeAgg陽(yáng)性慢性乙肝患者肝組織HBV tDNA和cccDNA中位數(shù)均高于HBeAg陰性患者（462.49比35.42拷貝/細(xì)胞，P=0.005；3.31比0.53拷貝/細(xì)胞，P=0.011）。治療48周時(shí)，有24例患者行肝活檢檢查，其肝組織和血清學(xué)指標(biāo)的變化情況見(jiàn)表2。24例患者血清和肝組織中病毒載量在48周時(shí)均較基線(xiàn)顯著下降（P＜0.01），血清HBVDNA下降值＞肝組織HBV tDNA＞肝組織HBV cccDNA（3.21lg拷貝/mL＞1.02lg拷貝/細(xì)胞＞0.76lg拷貝/細(xì)胞）。

三、基線(xiàn)時(shí)肝組織HBV tDNA和ccc DNA水平與血清HBVDNA、HBsAg的相關(guān)性

基線(xiàn)時(shí)，47例慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA與肝組織HBV tDNA呈顯著正相關(guān)（r=0.655，P＜0.001，見(jiàn)圖1A）。肝組織HBV cccDNA與血清HBVDNA及HBsAg呈正相關(guān)（r=0.466，P=0.001；r=0.540，P＜0.01，見(jiàn)圖1B、1C）。肝組織HBV tDNA與血清HBVDNA及HBsAg呈正相關(guān)（r=0.528，P＜0.01；r=0.495，P=0.003）。血清HBsAg與HBVDNA呈顯著正相關(guān)（r=0.681，P＜0.01）。在基線(xiàn)和48周時(shí)均取肝活檢的24例患者，肝組織HBV cccDNA與肝組織HBV tDNA及血清HBsAg呈正相關(guān)（r=0.497，P=0.013；r=0.422，P=0.040），與血清HBVDNA無(wú)相關(guān)性（r=0.225，P=0.291）。

表2 24例慢性乙肝患者基線(xiàn)和治療48周時(shí)肝組織和血清學(xué)指標(biāo)變化

圖1A 治療基線(xiàn)時(shí)慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA與HBV tDNA的相關(guān)性分析（47例）

圖1B 治療基線(xiàn)慢性乙肝患者肝組織 HBV cccDNA與血清 HBVDNA的相關(guān)性分析（47例）

圖1C 治療基線(xiàn)時(shí)慢性乙肝患者肝組織 HBV cccDNA與血清HBsAg的相關(guān)性分析（47例）

四、ADV治療48周肝組織HBV tDNA和cccDNA與血清HBVDNA、HBsAg的相關(guān)性

ADV治療48周時(shí)，取肝活檢的24例患者肝組織HBV cccDNA與HBV tDNA呈正相關(guān)（r=0.620，P＜0.01，見(jiàn)圖2A）。肝組織HBV cccDNA 與血清HBVDNA及HBsAg均無(wú)相關(guān)性（r=0.351，P=0.092；r=0.168，P=0.433）。肝組織HBV tDNA與血清HBVDNA及HBsAg均無(wú)相關(guān)性（r=0.353，P=0.090；r=0.299，P=0.156）。血清HBVDNA與HBsAg呈顯著正相關(guān)（r=0.583，P＜0.01，47例）。

五、ADV治療48周時(shí)肝組織HBV tDNA和cccDNA下降值及與血清HBVDNA、HBsAg下降值的相關(guān)性

ADV治療48周時(shí)，24例慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA下降值與HBV tDNA下降值無(wú)相關(guān)性（r=0.387，P=0.062）。肝組織HBV cccDNA下降值與血清HBVDNA及HBsAg下降值均無(wú)相關(guān)性（r=0.273，P=0.197；r=0.182，P=0.395）。肝組織HBV tDNA下降值與血清HBVDNA及HBsAg下降值均無(wú)相關(guān)性（r=0.286，P=0.175；r=-0.037，P=0.865）。24例患者血清HBVDNA下降值與HBsAg下降值未見(jiàn)相關(guān)性（r=0.063，P=0.770），但47例血清HBVDNA下降值與HBsAg下降值呈正相關(guān)（r=0.440，P=0.002），分析結(jié)果不一致可能與例數(shù)不同有關(guān)。

六、ADV治療48周時(shí)肝組織學(xué)炎癥及纖維化分級(jí)的變化

24例慢性乙肝患者ADV治療48周時(shí)肝穿刺病理診斷，肝組織學(xué)炎癥和纖維化程度較治療前改善，炎癥改善率為45.83％（11/24）；纖維化改善率為29.17％（7/24）。經(jīng)秩和檢驗(yàn)（Mann-Whitney UTest），肝組織炎癥程度（G）較治療前顯著改善（Z=-2.865，P=0.004），肝組織纖維化程度（S）改善不顯著（Z=-0.255，P=0.799）。

七、基線(xiàn)耐藥檢測(cè)

47例慢性乙肝患者基線(xiàn)時(shí)檢測(cè)耐藥位點(diǎn)，2例患者血清HBVDNART區(qū)分別檢出LAM相關(guān)耐藥位點(diǎn)M204I和恩替卡韋（ETV）耐藥位點(diǎn)L180M+M204V+S202G，相應(yīng)肝組織HBVcccDNA中也檢出相同耐藥位點(diǎn)（M204I和L180M+M204V+S202G）。其中，基線(xiàn)LAM耐藥患者ADV治療12周時(shí)血清HBeAgg轉(zhuǎn)陰，36周時(shí)HBVDNA降至檢測(cè)下限（3lg拷貝/mL），之后HBVDNA載量維持在較低水平（＜4lg拷貝/mL）；基線(xiàn)ETV耐藥患者ADV初始治療病毒學(xué)應(yīng)答良好，治療12～48周時(shí)HBVDNA較基線(xiàn)下降＞4lg拷貝/mL，60周出現(xiàn)病毒學(xué)突破，經(jīng)核實(shí)，患者這段時(shí)間服藥依從性欠佳，繼續(xù)治療，患者依從性良好，HBVDNA逐漸下降，治療84周時(shí)＜3lg拷貝/mL，之后維持在較低水平（＜4lg拷貝/mL）。

圖2A 治療48周時(shí)慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA和tDNA的相關(guān)性分析（24例）

圖2B 治療48周時(shí)慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA與血清 HBVDNA的相關(guān)性分析（24例）

圖2C 治療48周時(shí)慢性乙肝患者肝組織 HBV cccDNA與血清HBsAg的相關(guān)性分析（24例）

討論

抗病毒是治療慢性乙肝的關(guān)鍵。與干擾素相比，ADV用藥方便且不良反應(yīng)相對(duì)較少；與LAM相比，ADV治療耐藥突變率較低；與ETV相比，ADV雖抗病毒力較低，但價(jià)格較便宜，因此，在我國(guó)基層醫(yī)院對(duì)慢性乙肝患者進(jìn)行抗病毒治療時(shí)，ADV仍廣泛應(yīng)用。

ADV抗病毒療效已得到大規(guī)模臨床試驗(yàn)證實(shí)，可使患者獲得病毒學(xué)、肝功能和組織學(xué)的改善，且耐藥率較低。Marcellin等［10］研究顯示，口服10mg/dADV治療172例HBeAgg陽(yáng)性慢性乙肝患者，48周后HBVDNA檢測(cè)不到率為21％，ALT復(fù)常率為48％，HBeAg陰轉(zhuǎn)率為24％，HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率為12％。茅益民等［11］開(kāi)展的一項(xiàng)多中心、隨機(jī)雙盲臨床試驗(yàn)表明，ADV治療120例HBeAg陽(yáng)性慢性乙肝患者有效且安全，治療48周時(shí)，HBVDNA陰轉(zhuǎn)率為34.2％，ALT復(fù)常率為75.3％，HBeAg陰轉(zhuǎn)率和血清學(xué)轉(zhuǎn)換率分別為6.42％和4.55％。本研究48周隨訪(fǎng)結(jié)果與以上文獻(xiàn)報(bào)道相似。47例慢性乙肝患者ADV治療48周后，HBVDNA陰轉(zhuǎn)率為36.2％（17/47），ALT復(fù)常率為76.6％（36/47），AST復(fù)常率為85.1％（40/47），37例HBeAg陽(yáng)性患者血清HBeAg陰轉(zhuǎn)率為13.5％（5/37），但未觀(guān)察到 HBeAgg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，可能與研究例數(shù)相對(duì)較少及治療期限短有關(guān)。

在本研究中，ADV治療48周后，血清HBVDNA已降到檢測(cè)限以下的患者，肝組織內(nèi)仍能檢測(cè)到HBV cccDNA；治療48周肝組織HBV cccDNA僅下降0.76lg拷貝/細(xì)胞，遠(yuǎn)低于血清 HBVDNA下降幅度（3.21lg拷貝/mL）。Werle-Lapostolle等［12］定量檢測(cè)22例 ADV治療的慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA，發(fā)現(xiàn)ADV治療48周后，HBV cccDNA平均下降0.8og拷貝/細(xì)胞，但發(fā)生 HBsAg清除及HBeAgg陰轉(zhuǎn)的患者肝組織仍檢測(cè)到HBV ccc DNA?？梢?jiàn)抗病毒治療時(shí)，降低肝細(xì)胞內(nèi)HBV ccc DNA水平是相當(dāng)緩慢的過(guò)程，即使患者血清 HBeAgg轉(zhuǎn)陰，HBVDNA降到檢測(cè)限以下，肝組織內(nèi)仍存在HBV cccDNA，停藥后很可能會(huì)造成病毒反彈，導(dǎo)致抗病毒治療失敗等一系列問(wèn)題。一些研究探討將肝組織HBV ccc DNA水平動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)作為判斷抗病毒治療療效及停藥的指標(biāo)，Wursthorn等［13］檢測(cè)26例HBsAg陽(yáng)性慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA 含量，經(jīng)ADV聯(lián)合干擾素治療48周后，5例血清HBVDNA降至檢測(cè)限以下的患者，其肝組織仍檢測(cè)到HBV cccDNA；5例發(fā)生HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換的患者，仍有3例肝組織中檢出HBV cccDNA；8例患者發(fā)生HBeAgg陰轉(zhuǎn)，肝組織仍檢出HBV cccDNA。Sung等［14］隨訪(fǎng)觀(guān)察了47例拉米夫定單一或聯(lián)合聚乙二醇干擾素治療1年的HBeAgg陽(yáng)性慢性乙肝患者，在治療結(jié)束時(shí)及結(jié)束后52周測(cè)定血清HBVDNA及肝組織HBV cccDNA，29例在治療結(jié)束時(shí)有病毒學(xué)應(yīng)答，其中15例在治療結(jié)束后52周仍有持續(xù)應(yīng)答反應(yīng)，但患者肝組織中均存在HBV cccDNA，持續(xù)應(yīng)答患者肝組織內(nèi)HBV cccDNA水平顯著低于未取得持續(xù)應(yīng)答患者。提示肝組織cccDNA定量檢測(cè)能更好地預(yù)測(cè)持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答。同時(shí)提示，對(duì)于HBV cccDNA水平未顯著下降患者，延長(zhǎng)治療以避免停藥復(fù)發(fā)，有利于取得抗病毒治療的持久療效。

在臨床實(shí)踐中，實(shí)施肝組織HBV cccDNA定量檢測(cè)，需要患者進(jìn)行肝穿刺活檢，因此，HBV cccDNA定量檢測(cè)不易作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。尋找與肝組織HBV cccDNA水平變化密切相關(guān)的血清學(xué)指標(biāo)成為我們進(jìn)一步探討的目的。在本研究中，慢性乙肝患者治療基線(xiàn)時(shí)肝組織HBV cccDNA 和tDNA 與血清HBVDNA、HBsAg顯著相關(guān)，但ADV治療48周后，肝組織HBV cccDNA和tDNA與血清HBVDNA及HBsAg均無(wú)相關(guān)性。Wursthorn 等［13］研究報(bào)道，26例慢性乙 患者基線(xiàn)時(shí)肝組織HBV ccc DNA與HBsAg顯著相關(guān)（P=0.006），ADV聯(lián)合干擾素治療48周后，肝組織 HBV cccDNA與HBsAg無(wú)相關(guān)性（P=0.600），與我們的研究結(jié)果一致。本研究還統(tǒng)計(jì)分析了24例患者從治療基線(xiàn)到48周時(shí)肝組織HBV cccDNA、tDNA和血清HBVDNA、HBsAg水平下降情況，相關(guān)性分析顯示，肝組織HBV cccDNA下降值與血清HBVDNA及HBsAg下降值均無(wú)相關(guān)性（r=-0.258，P=0.223；r=0.199，P=0.352）。HBV cccDNA下降程度與HBsAg下降程度無(wú)相關(guān)性，與Wong等［15］報(bào)道的ADV治療1年觀(guān)察結(jié)果一致。Chan等［16］研究26例 HBeAgg陽(yáng)性慢性乙肝患者抗病毒治療基線(xiàn)和2年時(shí)肝內(nèi)cccDNA和 HBsAg關(guān)系，治療前肝內(nèi)HBV cccDNA與血清HBsAg有明顯相關(guān)性（r=0.54，P=0.004），治療后肝內(nèi)HBV cccDNA下降水平與 HBsAg下降水平明顯相關(guān)（r=0.68，P＜0.001），但在治療2年時(shí)，HBV cccDNA和HBsAg水平的相關(guān)性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；本研究結(jié)果與該報(bào)道差異之處可能與治療療程不同有關(guān)。以往研究例數(shù)均較少，有關(guān)HBV cccDNA與血清HBsAg相關(guān)性的研究需要擴(kuò)大樣本量，尤其是增加抗病毒治療前后均取肝活檢的病例數(shù)，因此，血清HBsAg定量檢測(cè)是否可作為反映肝內(nèi)cccDNA水平的指標(biāo)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，ADV抗病毒治療可有效抑制HBV復(fù)制，改善肝功能及肝臟炎癥活動(dòng)程度，并逆轉(zhuǎn)肝纖維化的形成，降低生化學(xué)、血清學(xué)和病毒學(xué)指標(biāo)以及肝組織HBV tDNA、HBV cccDNA水平。在ADV抗病毒治療中，生化學(xué)、血清學(xué)和病毒學(xué)指標(biāo)結(jié)合肝組織炎癥和纖維化程度變化以及肝組織HBVDNA、HBV cccDNA水平變化，能更加完善地評(píng)價(jià)抗病毒療效，為選擇合適的停藥時(shí)機(jī)提供綜合依據(jù)，從而使更多患者取得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答，減少治療后復(fù)發(fā)。在抗病毒治療中，有關(guān)肝組織HBV tDNA 和cccDNA水平變化與血清HBVDNA和HBsAg等指標(biāo)的相關(guān)性以及血清學(xué)指標(biāo)替代肝組織指標(biāo)的可能性，需要擴(kuò)大觀(guān)察患者例數(shù)并延長(zhǎng)治療隨訪(fǎng)時(shí)間繼續(xù)研究和探討。

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15 Wong DK，Seto WK，F(xiàn)ung J，et al.Reduction of hepatitis B surface antigen and covalently closed circular DNA by nucleos（t）ide analogues of different potency.Clin Gastroenterol Hepatol，2013，11：1004-1010.

16 Chan HL，Wong VW，Tse AM，et al.Serum hepatitis B surface antigen quantitation can reflect hepatitis B virus in the liver and predict treatment response.Clin Gastroenterol Hepatol，2007，5：1462-1468.

（本文編輯：錢(qián)燕）

PCR Relationship between the serum HBVDNA and the change of the intrahepatic HBV cccDNA levels in antiviral therapy for chronic hepatitis B

LIU Xue-yan，SHANG Qing-hua，LIU Xue-en，ZHUANG Hui.Fujian Cosunter Pharmaceutical Co.，Ltd.，F(xiàn)uzhou 350003，China

Objective To investigate the correlations between the The serum HBVDNA and the intrahepatic HBV tDNA and cccDNA levels were decreased significantly after 48 weeks intrahepatic HBV tDNA，cccDNA and serum HBVDNA，HBsAg levels in patients with chronic hepatitis B treated with adefovir dipivoxil（ADV）.The association between the antiviral response and the changed levels of the intrahepatic HBV tDNA and cccDNA was explored.Methods Forty seven patients with chronic hepatitis B were treated with ADV 10 mg/d.The virological，serological and biochemical parameters were measured every 12 weeks during treatment.Liver biopsies were performed in 47 patients at baseline and 24 patients at 48 weeks.The intrahepatic HBV tDNA and cccDNA levels were quantitated by real-time PCR.Results The sero-negative rate of HBVDNA was 36.2％ （17/47），and normalization rates of ALT and AST levels were 76.6％（36/47）and 85.1％ （40/47）in 47 patients treated with ADV for 48 weeks.The serum HBVDNA and the intrahepatic HBV tDNA and cccDNA levels were decreased significantly after 48 weeks therapy in 24 patients performed liver biopsies at baseline and 48 weeks.The decreased values of serum HBVDNA，the intrahepatic HBV tDNA and cccDNA were 3.21 log copies/mL，1.02 log copies/cell and 0.76 log copies/cell，respectively（P＜0.01）.At baseline，the intrahepatic HBV tDNA and cccDNA levels were positively correlated with serum HBVDNA and HBsAg.However，the correlations were not observed after 48 weeks treatment.Conclusion The intrahepatic HBV tDNA、cccDNA and serum HBVDNA levels were decreased significantly after 48 weeks ADV therapy.The correlations between the intrahepatic HBV tDNA，cccDNA and serum HBVDNA，HBsAg levels were observed at baseline but not at 48weeks，suggesting serum HBVDNA and HBsAg could not be the alternative for HBV tDNA and cccDNA.

Chronic hepatitis B；Adefovir dipivoxil；Hepatitis B virus covalently closed circular DNA；Real-time PCR

國(guó)家“十二五”傳染病重大專(zhuān)項(xiàng)（2013ZX10002004，2012ZX10002003）

350003福州福建廣生堂藥業(yè)股份有限公司（劉雪艷）；山東解放軍第八八醫(yī)院肝病中心（商慶華）；北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系和感染病中心（劉學(xué)恩，莊輝）

HBV感染是嚴(yán)重的全球性健康問(wèn)題之一，目前全球約20億人感染過(guò)HBV，其中約3.5億為HBV慢性感染，每年約100萬(wàn)人死于乙型肝炎（乙肝）相關(guān)終末期肝病、肝硬化或肝癌［1］。我國(guó)是HBV感染高發(fā)區(qū)，2006年全國(guó)乙肝血清流行病學(xué)調(diào)查表明，HBsAg陽(yáng)性攜帶者約7.18％［2］，其中25％發(fā)展為慢性乙肝。符合治療指征的慢性乙肝患者將接受核苷（酸）類(lèi)似物和干擾素等抗病毒藥物治療，這些藥物能夠有效抑制病毒復(fù)制，降低外周血乙肝病毒載量［3］，減少慢性乙肝患者終末期肝病、肝硬化和肝癌的發(fā)生。阿德福韋酯（ADV）是我國(guó)目前臨床上常用的四種核苷類(lèi)抗病毒藥物之一，國(guó)內(nèi)外大量研究顯示ADV可顯著改善慢性乙肝患者的生化學(xué)、病毒學(xué)、血清學(xué)、組織學(xué)指標(biāo)，且長(zhǎng)期用藥耐藥率較低［4］。同時(shí)，ADV對(duì)病毒野生株及拉米夫定（LAM）耐藥株、前C區(qū)變異株等各種HBV毒株感染均有效［5］。

HBV復(fù)制過(guò)程中形成的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（HBV cccDNA）是慢性乙肝患者抗病毒治療時(shí)產(chǎn)生耐藥和停藥后反跳的重要原因［6］。Bourne等［7］報(bào)道肝組織中HBV cccDNA水平與抗病毒治療的療效和持續(xù)應(yīng)答有關(guān)，提出肝組織中HBV ccc DNA定量檢測(cè)對(duì)臨床抗病毒療效的監(jiān)測(cè)和治療方案的調(diào)整等具有重要意義。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RTPCR）對(duì)ADV治療前、后慢性乙肝患者肝組織HBV cccDNA進(jìn)行定量檢測(cè)，研究其與血清HBVDNA、HBsAg等在治療隨訪(fǎng)中的變化和相互關(guān)系，旨在探討肝組織HBV cccDNA含量的改變?cè)诳共《局委熤械闹笇?dǎo)意義以及血清學(xué)指標(biāo)代替肝組織指標(biāo)的可能性。

2015-06-15）

劉雪艷 商慶華 劉學(xué)恩 莊輝