鹽酸小檗堿片含量測(cè)定樣品提取方法的改進(jìn)

古惠權(quán)

鹽酸小檗堿片含量測(cè)定樣品提取方法的改進(jìn)

古惠權(quán)

目的 建立鹽酸小檗堿片含量測(cè)定的樣品溶解處理的方法——離心法。方法 鹽酸小檗堿片含量測(cè)定的樣品溶解處理的方法中，樣品用沸水溶解后，過濾改為離心。結(jié)果 樣品含量測(cè)定獲得滿意結(jié)果。結(jié)論 該法樣品處理簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可作為鹽酸小檗堿片含量測(cè)定的樣品溶解處理的方法。

高效液相；鹽酸小檗堿片；配制方法；離心

鹽酸小檗堿片為國(guó)家基準(zhǔn)藥物，臨床上用于急性細(xì)菌性痢疾、腸炎等，使用范圍較廣。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)收載于《中國(guó)藥典》2010年版二部中，其含量測(cè)定方法為高效液相色譜法。筆者在檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，該方法中含量測(cè)定項(xiàng)下的樣品處理不完善，樣品加沸水溶解后，冷卻過程中容易析出絮狀沉淀，致使測(cè)定結(jié)果重復(fù)性較差，部分廠家的產(chǎn)品甚至不能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)低限，不能準(zhǔn)確反映出所有檢品的真實(shí)質(zhì)量水平。為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，筆者對(duì)樣品處理方法進(jìn)行了改進(jìn)。

1 儀器與試藥

安捷倫C1200型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；CP225D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110713-201212），乙腈為色譜醇（德國(guó)Merck Drags Biotechnoligy公司）；水為超純水（自制）。其余試劑均為分析純。鹽酸小檗堿片均為市售有效期內(nèi)藥品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱：安捷倫Eclipse XDB-C18 C18 5μm 4.6×250mm PN：990967-902 LN∶B13226以磷酸鹽緩沖液 [0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/l庚烷磺酸鈉溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0]-乙腈（60：40）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為263nm;流速：1ml/min;進(jìn)樣量 20μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品10.16mg，置于250ml量瓶中，加沸水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備（1原方法、2改進(jìn)方法）

2.3.1 取本品20片，如為糖衣片，除去糖衣。精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿40mg），置100ml量瓶中，加沸水適量使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液約8ml，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.2 取本品20片，如為糖衣片，除去糖衣。精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿40mg），置100ml量瓶中，加沸水適量使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 測(cè)定方法 精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.4 方法學(xué)認(rèn)證 加樣回收試驗(yàn)：精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品0.2032g，置于100ml量瓶中，加沸水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：20140506，含量為0.7142g/g）28mg，分別精密加入上述對(duì)照品貯備液 7.5，10，12.5ml，按2.2.2項(xiàng)下方法配制溶液，按2.2.3測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果見表1。

2.5 含量測(cè)定 取10批不同廠家不同批號(hào)的鹽酸小糪堿片，分別按原方法與改進(jìn)方法平行測(cè)定3次，結(jié)果見表2。

表1 鹽酸小檗堿片含量測(cè)定改進(jìn)方法加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

作者單位：517000廣東河源市食品藥品檢驗(yàn)所

3 結(jié)果與討論

3.1 鹽酸小檗堿片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定是衡量該制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，2000版《中國(guó)藥典》采用滴定法，2005版與2010版《中國(guó)藥典》均采用高效液相色譜法測(cè)定樣品含量。其中2005版《中國(guó)藥典》采用沸水溶解后用0.45μm的濾膜過濾的的方法提取樣品溶液，2010版《中國(guó)藥典》將用0.45μm的濾膜過濾修訂為直接過濾。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，樣品加沸水溶解后，在冷卻至室溫的過程中有部分樣品會(huì)析出絮狀沉淀（此時(shí)對(duì)照品溶液澄清無沉淀析出）。樣品析出沉淀后用0.45μm的濾膜過濾或直接過濾均會(huì)導(dǎo)致樣品測(cè)定結(jié)果偏低且重復(fù)性較差，而用離心后取上清液稀釋的方法測(cè)得的結(jié)果均重復(fù)性較好且含量較高，更能代表樣品的真實(shí)含量。

3.2 因選擇的改進(jìn)方法仍采用藥典規(guī)定的高效液相色譜方法，故未再對(duì)方法中色譜柱、流動(dòng)相組成以及方法學(xué)中的線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)進(jìn)行考察。

3.3 筆者還考察了用流動(dòng)相提取和用甲醇提取的樣品提取方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用甲醇提取的方法對(duì)色譜柱的要求較高，流動(dòng)相提取法與離心提取法的結(jié)果相近?？紤]到用流動(dòng)相提取消耗的有機(jī)試劑較多，方法較繁瑣，故最后確定改進(jìn)方法如正文。

3.4 由十批樣品含量測(cè)定可知，有部分樣品藥典法與改進(jìn)方法測(cè)得結(jié)果相差加大，改進(jìn)方法所得結(jié)果明顯高于藥典方法。比較十批樣品測(cè)定過程，發(fā)現(xiàn)樣品冷卻過程中析出大量沉淀的批次兩種方法測(cè)定結(jié)果相差較大，而樣品冷卻過程中析出沉淀較少或不析出沉淀時(shí)測(cè)得結(jié)果較接近。由說明書可知十批鹽酸小檗堿片所用輔料不同，懷疑過濾時(shí)某種輔料吸附鹽酸小檗堿并殘留在濾紙中，尚待進(jìn)一步研究。

[1]中國(guó)藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典二部[M]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:640．

[2]杜龍江,李晶波．鹽酸小檗堿片含量測(cè)定樣品溶液配制方法改進(jìn)[J]．黑龍江醫(yī)藥,2012,25(1)．

[3]魏萍,陳新善,孔愛英．鹽酸小檗堿片含量測(cè)定中樣品溶液制備方法的考察與建議[J]．解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(5):449-450．

Method to improve in Processing the Test Solution of Deternination of Contents in Berberine Hydrochioride Tablets by HPLC

Gu Huiquan
(Heyuan city,the food and drug inspection,Guangdong province,517000)

Objective To establish a simple method for sample preparation of Berberine Hydrochloride tablets in assay.Methods The sample was prepared by centrifugation.Results Determination of sample with satisfactory results.Conclusion The sample preparation method is simple,staboe,accurate,and can be used for the content determination of Berberine Hydrochloride tablets.

HPLC；Berberine Hydrochloride Tablets；Method in Processing the test solution；centrifugation

R927．2

B