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    補腎益沖丸延緩大鼠卵巢早衰實驗研究

    2015-10-20 08:46:19寧曄劉小婷寧艷單志群許志芃
    新中醫(yī) 2015年6期
    關(guān)鍵詞:美力早衰灌胃

    寧曄,劉小婷,寧艷,單志群,許志芃

    深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東 深圳 518033

    補腎益沖丸延緩大鼠卵巢早衰實驗研究

    寧曄,劉小婷,寧艷,單志群,許志芃

    深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東 深圳 518033

    目的:研究補腎益沖丸對卵巢早衰大鼠動物的干預(yù)作用。方法:建立卵巢早衰大鼠動物模型,在上述模型基礎(chǔ)上,相應(yīng)給藥,監(jiān)測空白對照組、中藥組、倍美力組、造模對照組大鼠的情況及檢測血清激素[促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)]、抗卵巢抗體水平。結(jié)果:造模第10天開始,中藥組、倍美力組、造模對照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié),毛無光澤,體毛蓬松,脫毛的癥狀,動情周期紊亂等,有的陰道涂片僅有動情間期的白細胞。灌胃后30天,中藥組、倍美力組FSH、LH降低,E2升高,與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。灌胃后30天,中藥組血清抗卵巢抗體下降,與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:補腎益沖丸對卵巢早衰模型大鼠的FSH、LH、E2有改善作用,亦可調(diào)節(jié)免疫功能,改善機體免疫狀態(tài),恢復(fù)卵巢功能,而達到治療卵巢早衰的功效。

    卵巢早衰;補腎益沖丸;動物實驗;大鼠

    卵巢早衰(POF)是指婦女在40歲以前由于卵巢功能衰退而引起月經(jīng)失調(diào)、不孕、性功能降低、更年期綜合征等一系列癥狀的疾病。因此,探討POF的有效治療方法十分必要。中醫(yī)藥具有整體調(diào)控和多靶點、多方式調(diào)節(jié)的特點,特別是能提高卵巢對促性腺激素的反應(yīng)性和卵巢中性激素受體的含量,促使卵巢功能恢復(fù)和改善,且與西藥相比無任何毒副反應(yīng),安全而有效,因而對女性卵巢功能失調(diào)類疾病的防治顯示出優(yōu)勢[1]。

    補腎益沖丸是取得廣東省藥監(jiān)局批準文號的科研制劑,研究表明,該藥可提高排卵和妊娠率,對接受試管嬰兒助孕技術(shù)患者胚胎著床、成功妊娠的療效肯定[2]。在本院臨床上長期用于治療月經(jīng)失調(diào),不孕癥等病癥。近年來隨著POF患者的日益增多,本藥被用于此病腎虛型患者的治療,臨床療效明顯?,F(xiàn)擬通過POF動物模型的實驗研究,揭示補腎益沖丸對POF的作用機理。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 清潔級雌性成熟未交配過的SD大鼠40只,12周齡,體重250~270 g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

    1.2 藥物 中藥制備:補腎益沖丸由廣東省藥監(jiān)局批準、深圳市中醫(yī)院制劑室提供(2000年深衛(wèi)制劑第3P-036號,2003年廣東省藥監(jiān)局批準文號:粵藥制字ZO3O3OO12),每10 g含生藥21.9 g,組成:熟地黃,當歸、白芍、山茱萸、黃精、紫河車粉,鹿角膠、續(xù)斷、菟絲子、巴戟天、淫羊藿、香附。用法:實驗時按所需分量將藥丸配置成混懸液備用。倍美力溶液制備:每片0.625m g[由美國惠氏艾爾斯特制藥公司艾爾斯特藥廠制造,惠氏制藥有限公司分裝,生產(chǎn)批號0502090,國藥準字(2001)J-51(2)號],生理鹽水溶解定容。

    1.3 造模方法 所有雌性大鼠每天進行陰道細胞涂片檢查,選擇動情周期4~5天的大鼠,隨機分為中藥組、倍美力組、造模對照組、空白對照組。中藥組、倍美力組、造模對照組以雷公藤多甙片50m g/kg灌胃造模,每天1次,連續(xù)灌胃14天[3]??瞻讓φ战M:連續(xù)生理鹽水2m L/kg灌胃14天。中藥組:造模結(jié)束后24 h用補腎益沖丸混懸液(按成人等效劑量8倍于成人劑量)24 g/kg灌胃,每天1次,連續(xù)30天。倍美力組:造模結(jié)束后24 h用倍美力0.075m g/kg灌胃,每天1次,連續(xù)30天。造模對照組:造模結(jié)束后24 h用生理鹽水2 m L/kg灌胃,每天1次,連續(xù)30天??瞻讓φ战M:繼續(xù)生理鹽水灌胃2m L/kg灌胃,每天1次,連續(xù)30天。

    1.4 一般情況觀察 活動:有無活動抑制、嗜睡、厭食、旋轉(zhuǎn)、輕癱等行為異常。糞便、尿液或身體其他排出物有無帶血。有無立毛、體毛篷松、脫發(fā),腫脹、腫塊、損傷等情況。若有動物死亡,記錄死亡數(shù)量及原因,考慮中途因灌藥/喂養(yǎng)不當?shù)人劳鲈颉?/p>

    1.5 采血檢測 灌胃后第1天及處死當天各組大鼠,乙醚吸入麻醉后,眼眶下靜脈叢取血。取血3m L注入干燥管,離心,取血清,儲存于-20℃冰箱備用,用以檢測血清激素[促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)]水平。采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測定。將血清放入測定管后由Elecsys 2010 Roche全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(瑞士Roche公司)自動完成。用間接ELISA方法檢測抗卵巢抗體,試劑盒由上海玉蘭生物技術(shù)研究所提供,每次實驗均按試劑盒說明書操作。血清按1∶20稀釋,結(jié)果以酶標儀讀數(shù)判斷。

    1.6 卵巢檢測 處死各組大鼠后,觀察雙側(cè)卵巢大體解剖,并取下雙側(cè)卵巢組織,用10%(體積分數(shù))的甲醛液固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,待做HE染色及免疫組織化學(xué)分析,光鏡觀察卵巢的組織形態(tài)改變、卵泡的大小發(fā)育情況。

    2 實驗結(jié)果

    2.1 一般形態(tài) 造模第10天開始,中藥組、倍美力組、造模對照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié),毛無光澤,體毛蓬松,脫毛的癥狀,動情周期紊亂等,有的陰道涂片僅有動情間期的白細胞。

    2.2 各組大鼠血清激素變化比較 見表1。造模結(jié)束后30天,中藥組、倍美力組FSH、LH降低,E2升高,與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    表1 各組大鼠血清激素變化比較±s)

    表1 各組大鼠血清激素變化比較±s)

    與空白對照組比較,①P<0.05

    組別空白對照組中藥組倍美力組造模對照組n FSH(mIU/mL) LH(mIU/mL) E2(pg/mL)10 10 10 10造模結(jié)束后第1天11.05±1.36 13.25±1.67①13.83±2.01①13.71±1.62①造模結(jié)束后第30天11.26±1.85 11.20±1.74 12.94±1.15 13.68±2.53①造模結(jié)束后第1天8.16±1.39 8.85±1.26①8.74±1.31①8.95±2.03①造模結(jié)束后第30天8.08±1.92 8.02±0.87 8.26±1.26 8.56±1.73①造模結(jié)束后第1天754.39±80.47 602.75±68.46①608.76±89.43①612.58±76.17①造模結(jié)束后第30天748.41±88.02 725.59±82.48 738.29±65.47 638.59±74.39①

    2.3 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較 見表2。造模結(jié)束后30天,中藥組血清抗卵巢抗體下降,與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s) OD

    表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s) OD

    與空白對照組比較,①P<0.05

    組別空白對照組中藥組倍美力組造模對照組n 10 10 10 10造模結(jié)束后第1天1.49±0.18 1.92±0.25①1.95±0.33①1.93±0.27①造模結(jié)束后第30天1.50±0.25 1.61±0.38 1.91±0.24①1.89±0.19①

    3 討論

    POF為臨床常見病、疑難病,其發(fā)病率逐年增加,其發(fā)生率約為1%,卵巢狀態(tài)與正常絕經(jīng)后相似,嚴重影響婦女身心健康。其發(fā)病原因尚不明確,有學(xué)者認為可能與自身免疫、遺傳因素,促性腺激素及其受體傳導(dǎo)缺陷,原始卵泡儲備少,以及物理化學(xué)因素等有關(guān)[4]。探討POF的有效治療方法十分必要。本研究探討補腎益沖丸對POF大鼠動物的干預(yù)作用,初步闡明了作用機理。實驗結(jié)果表明,補腎益沖丸對POF造模大鼠的FSH、LH、E2有改善作用,亦可調(diào)節(jié)免疫功能,改善機體免疫狀態(tài),恢復(fù)卵巢功能,而達到治療POF的功效。

    [1]張蕾,曲季芬.卵巢早衰的中醫(yī)藥治療研究進展[J].中醫(yī)藥信息,2009,26(2):10-12.

    [2]許爽君,楊水清,王建萍,等.補腎益沖丸的毒理學(xué)實驗研究[J].中國中醫(yī)急癥,2007,16(7):852-853.

    [3]高慧,楊涓,夏天,等.補腎調(diào)沖方對卵巢早衰大鼠卵巢相關(guān)因子TNF-α、IFN-γ蛋白和基因表達的影響[J].國醫(yī)論壇,2008,23(3):38-39.

    [4]王迪華,梁雪雯,周紅.逍遙助卵煎對卵巢早衰患者血清性激素水平的影響[J].中國婦幼保健,2007,22(33):4687-4688.

    (責(zé)任編輯:駱歡歡)

    R711.75

    A

    0256-7415(2015)06-0268-02

    10.13457/j.cnki.jncm.2015.06.126

    2014-12-30

    深圳市科技計劃項目(201102200)

    寧曄(1974-),女,主管護師。

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