• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同氮源對海洋真菌BH0531發(fā)酵液殺線蟲活性的影響

    2015-10-20 00:10蒙春蕾王勇勇黃敏蔡爽孟慶恒孫建
    江蘇農(nóng)業(yè)科學 2015年5期
    關鍵詞:氮源

    蒙春蕾 王勇勇 黃敏 蔡爽 孟慶恒 孫建華

    摘要:海洋來源的枝頂孢霉(Acremnium,BHO531)是一株以松材線蟲為靶標篩選出的殺線蟲真菌。氮源的化合態(tài)和種類對該菌株的生長以及代謝產(chǎn)物的活性有顯著影響。研究結(jié)果顯示,不同氮源對菌體生長量的影響差異顯著,有機氮優(yōu)于無機氮;代謝物的殺線蟲活性則表現(xiàn)為無機氮優(yōu)于有機氮,其中以NaNO3為氮源的發(fā)酵液對松材線蟲的殺線率以及NH4cl為氮源的發(fā)酵液對根結(jié)線蟲的殺線率分別高達95.67%和96.60%,均高于有機氮源中最高的蛋白胨。根結(jié)線蟲對各種無機氮源發(fā)酵液的敏感性普遍高于松材線蟲。此外,經(jīng)高溫處理的代謝物仍觀察到較強的殺線蟲活性,顯示出良好的熱穩(wěn)定性。

    關鍵詞:海洋枝頂孢霉;氮源;殺線活性;松材線蟲;根結(jié)線蟲

    中圖分類號:Q939.9;5;432.4.5 文獻標志碼:A 文章編號:1002-1302(2015)05-0121-03

    植物寄生線蟲是一類世界性分布的重要植物病原物,其寄生范圍廣,環(huán)境適應性強,幾乎每種作物都受到植物線蟲的侵害,其危害程度僅次于真菌,已超過細菌、病毒,成為第二大植物病害,防控形勢嚴峻。真菌殺線劑(具殺線活性的代謝產(chǎn)物)是一類環(huán)境友好型生防因子,越來越受到廣泛重視。已經(jīng)報道的具有殺線蟲活性的真菌種類超過700種,已分離得到的殺線蟲活性代謝產(chǎn)物多達230余種。這些殺線蟲真菌及其代謝物的研究主要集中在陸生性真菌(包括病原菌和內(nèi)生真菌),如淡紫擬青霉活菌劑和總狀共頭霉(Srl8菌)等。海洋來源的枝頂孢霉(Acremnium,BHO531)是一株已被證實具有較好殺線蟲作用的海洋真菌。不同于陸生性真菌,該菌在添加海水的培養(yǎng)基中的生長情況和殺線蟲活性均優(yōu)于普通察氏培養(yǎng)基,且其代謝活性物具有含氮化合物屬性;因此,探究不同化合態(tài)的氮源對該菌在察氏培養(yǎng)基生長及其代謝物殺線蟲活性的影響,將有助于活性代謝產(chǎn)物發(fā)酵條件的優(yōu)化,克服海水高鹽組分對發(fā)酵設備的影響。據(jù)此,本試驗以松材線蟲、黃瓜根結(jié)線蟲二齡幼蟲(.T2)為對象,以殺線蟲效果(殺線率)為指標,測定了NaNO3、KNO3NH4NO3、(NH4),SO4、NH4Cl等不同氮源對BH0531菌株生長狀況及其活性代謝產(chǎn)物的影響,旨在為進一步優(yōu)化該菌的發(fā)酵條件提供試驗依據(jù)。

    1.材料與方法

    1.1試驗材料

    1.1.1供試菌株海洋枝頂孢霉(Acremnium,BHO531),菌種保藏號CGMCC-5445;灰葡萄孢霉(Batrytisnerea,BC菌),以上菌種由天津師范大學生命科學學院微生物實驗室提供。

    1.1.2供試線蟲松材線蟲(Bursaphelenchusxylophilus),中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所提供;黃瓜根結(jié)線蟲(Meloido-gyneincognita)取白天津市寶坻區(qū)黃瓜大棚基地。

    1.1.3供試培養(yǎng)基(1)活化培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200g/L煮汁,葡萄糖20g/L,瓊脂20g/L,蒸餾水定容至1000mL;用于活化BH0531菌株。(2)發(fā)酵培養(yǎng)基:2g/L氮源,1g/LKH2O4,0.5g/LMgSO40.5g/LKCl,0.01g/LFez(SO4)3·5H2O,20g/L葡萄糖,pH值自然。氮源分別為NaN0,、KNO3、NH4NO4、(NH4):SO4、NH4C1、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。(3)大麥仁培養(yǎng)基:10g大麥仁,8mL去離子水,大試管浸泡3~6h,滅菌,用于BC菌培養(yǎng)。

    1.2試驗方法

    1.2.1BH0531菌株的培養(yǎng)將保藏的BHO531菌種接種至活化培養(yǎng)基斜面試管,26qC培養(yǎng)5~7d。

    1.2.2灰葡萄孢霉的培養(yǎng)

    將灰葡萄孢霉接人大麥仁培養(yǎng)基,21℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7d,用于松材線蟲的培養(yǎng)。

    1.2.3

    松材線蟲的培養(yǎng)將松材線蟲接種于培養(yǎng)好的BC菌上,25℃下避光培養(yǎng)7d;通過貝爾曼漏斗法收集松材線蟲,制備成濃度為10000條/mL的線蟲懸液。1.2.4黃瓜根結(jié)線蟲二齡幼蟲(J2)的制將大田取得的黃瓜病根剪成1cm小段;在1%次氯酸鈉溶液中漂洗4min,再在勻漿機里攪拌2min;利用100目、300目和500目的網(wǎng)篩沖洗并收集蟲卯。再將卯收集到的離心管中,在底部加入40%蔗糖溶液,3500r/min密度梯度離心5min。之后吸取界面溶液過500目網(wǎng)篩,反復沖洗收集卯。將上述收集得到的卯置于已消毒的培養(yǎng)皿中,墊上濕潤濾紙,25qC下孵化4d。

    1.2.5發(fā)酵液的制取活化的BHO531菌株斜面,加入無菌水洗脫孢子,制備濃度為2×10。CFU/mL的孢子懸液,以1%的接種量分別接入不同氮源發(fā)酵培養(yǎng)基中,26℃、120r/min培養(yǎng)96h。發(fā)酵菌液經(jīng)離心除菌(6000r/min30min,Eppendorf-5810),再經(jīng)孔徑為O.22um的微孔濾膜過濾,即為發(fā)酵濾液,用于活性分析。

    1.2.6不同氮源發(fā)酵液殺線蟲活性檢測

    將所獲發(fā)酵液分為滅菌組和未滅菌組,以無菌水為對照,分別以松材線蟲和黃瓜根結(jié)線蟲(J2)為靶標,進行殺線蟲活性檢測。具體方法如下:取96孔板,每孔加入靶標線蟲懸液10μL(約100條),再分別加入100μL不同氮源的發(fā)酵液,設3次重復,25℃下培養(yǎng),3d后體視顯微鏡下觀測線蟲死亡情況,按下式統(tǒng)計線蟲校正死亡率:

    線蟲校正死亡率=(處理線蟲死亡率一對照線蟲死亡率)/(1一對照線蟲死亡率)×100%。

    應用SPSS12.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析,并且采用Duncan's新復極差法進行差異顯著性分析。

    2.結(jié)果與分析

    2.1不同氮源對BH0531菌體生長的影響

    試驗結(jié)果(圖1、表1)表明,不同氮源對BHO531菌絲體的外觀和生物量有明顯影響。圖1結(jié)果顯示,經(jīng)不同無機氮源發(fā)酵后,發(fā)酵液透明,呈淡黃色,菌絲球結(jié)構(gòu)松散,外觀不規(guī)整(圖1-A至E);而在蛋白胨和酵母膏條件下,菌絲體外觀結(jié)構(gòu)緊密,呈均勻球狀分布,直徑明顯大于無機氮源條件(圖1-G至H);牛肉膏中菌絲體則介于二者之間(圖l-F)。生物量測定結(jié)果進一步證實了不同氮源對該菌的影響存在明顯的差異(α=0.05),尤其體現(xiàn)在有機氮源和無機氮源之間(表1)。不同氮源對菌體生長的作用由大到小依次為蛋白胨>酵母膏>牛肉膏>KNO3>NaNO3>(NH4)2SO4>NH4NO3>NH4Cl。

    2.2不同氮源發(fā)酵液對松材線蟲活性的影響

    在試驗選定的8種氮源中,以NaNO,作為氮源的發(fā)酵液表現(xiàn)出了較好的殺線蟲活性,殺線率≥90%,達到A級(表1),其次為蛋白胨、NH4C1和KNO3,。值得關注的是除NH4cl外,其余3種氮源的發(fā)酵液經(jīng)滅菌后其代謝產(chǎn)物仍然具有≥60%的殺線活性,表明活性代謝產(chǎn)物具有較好的耐熱性。表1的分析結(jié)果顯示,代謝物的殺線蟲活性主要與氮源的種類密切相關,菌體生物量與代謝物殺線蟲活性在選定用量范圍內(nèi)未顯示出明確的相關性。這一結(jié)果提示,選用適當?shù)臒o機氮源如NaNO+用于發(fā)酵,從代謝活性物的角度可以代替海水培養(yǎng)基來獲得高活性的代謝產(chǎn)物。

    2.3不同氮源發(fā)酵液對黃瓜根結(jié)線蟲(.T2)存活的影響

    研究結(jié)果表明,BHO531代謝物不僅對松材線蟲有確切的殺線活性,對根結(jié)線蟲也有顯示出很強的殺線活性。不同氮源發(fā)酵液在滅菌前后,對黃瓜根結(jié)線蟲幼蟲J2的殺線率均較高,除牛肉膏、酵母膏外,其他6種氮源對根結(jié)線蟲的校正死亡率均大于75%(表2)。以NH4CI為氮源的發(fā)酵液對黃瓜根結(jié)線蟲的殺線率最高,達到96%,與該發(fā)酵液對松材線蟲的殺線率差異較大。表2結(jié)果還顯示,滅菌組中各氮源發(fā)酵液對黃瓜根結(jié)線蟲殺線率不僅差異顯著,還突出地表現(xiàn)出無機氮源的優(yōu)勢;未滅菌組中有機氮源間殺線率差異極顯著(P<0.01),無機氮源發(fā)酵液間殺線率差異雖不顯著,但其殺線率均在B級(>85%)以上,具有較高的殺線活性。進一步表明選用適當?shù)臒o機氮源用于BHO531活性代謝物的發(fā)酵,可以用來替代海水培養(yǎng)基獲得高活性的代謝產(chǎn)物。

    3.討論

    海洋來源的枝頂孢霉(Acremnium,BH0531)是一株以松材線蟲為靶標篩選出的生防菌,但該菌在海水培養(yǎng)基中顯示的生長優(yōu)勢并不適用于規(guī)模發(fā)酵的設備條件要求。而含氮無機鹽是海水中的重要成分,因此,探究其在不含海水的培養(yǎng)條件下的生長要素及其對殺線蟲活性代謝物的影響就顯得十分必要。研究結(jié)果表明,不同氮源,特別是無機氮源對BHO531生長狀況的影響較大。有機氮源雖然有利于菌絲體的增加,但其殺線率的優(yōu)勢并未隨菌絲體的增加而提高。試驗結(jié)果表明,以NaNO3和NH4C1 2種不同化合態(tài)的無機氮作為氮源時,菌體的生長狀況雖然不如有機氮,但所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對松材線蟲與黃瓜線蟲分別顯示出較高的抑制率,且其活性產(chǎn)物均顯示出良好的熱穩(wěn)定性,為今后進一步優(yōu)化發(fā)酵條件、完全取代海水培養(yǎng)基提供了試驗依據(jù)。

    研究還發(fā)現(xiàn),BHO531代謝物對松材線蟲和根結(jié)線蟲的殺線效果存在一定的差異。根結(jié)線蟲對于以察氏培養(yǎng)基為基礎的不同氮源的發(fā)酵產(chǎn)物的敏感性明顯高于松材線蟲。有報道顯示,不同離子對南方根結(jié)線蟲的排斥性為K+、NH+和N03>Cl,其中NH+和NO+組成的化合物NH4NO3對南方根結(jié)線蟲有強烈的排斥力,且隨著濃度升高而上升。所不同的是,各種含氮無機鹽在BH0531的培養(yǎng)過程中作為氮源會被菌體轉(zhuǎn)化利用,而且用量僅為2g/L,低于察氏培養(yǎng)基的標準用量(3g/L),因此其高效的殺線蟲活性主要取決于代謝活性物的生成。至于其活性代謝物殺線蟲的機理還有待深入研究。

    猜你喜歡
    氮源
    植物類有機氮源及其在發(fā)酵行業(yè)的應用
    一株麥氏交替單胞菌的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化特性研究?
    氮源對釀酒酵母GJ2008不同糖濃度甘蔗汁酒精分批發(fā)酵的影響
    幾種不同氮源配比營養(yǎng)液對煙苗生長發(fā)育及生理特性的影響
    無機氮源對紅曲霉調(diào)控初探
    拉曼光譜分析有機氮源促進乙醇發(fā)酵的機制
    中藥渣生產(chǎn)蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    響應面分析法和氮源改進優(yōu)化L-賴氨酸發(fā)酵工藝
    碳氮源對液體培養(yǎng)蛹蟲草生物合成蟲草多糖的影響
    不同外源碳對AM真菌吸收氮源合成精氨酸的影響
    国产免费一级a男人的天堂| 亚洲一区二区三区不卡视频| 哪里可以看免费的av片| 色在线成人网| 国产乱人视频| 老汉色∧v一级毛片| 免费在线观看影片大全网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产男靠女视频免费网站| www日本黄色视频网| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美在线黄色| 国产成年人精品一区二区| 哪里可以看免费的av片| 天天添夜夜摸| 日本 欧美在线| 亚洲精品456在线播放app | 99在线视频只有这里精品首页| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一区二区三区国产精品乱码| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一二三四社区在线视频社区8| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 色av中文字幕| 亚洲最大成人中文| 丰满的人妻完整版| 毛片女人毛片| av专区在线播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 三级毛片av免费| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 国产私拍福利视频在线观看| 1024手机看黄色片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 午夜免费成人在线视频| 久久久精品欧美日韩精品| 一进一出抽搐动态| 免费av观看视频| 此物有八面人人有两片| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲不卡免费看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 在线观看免费视频日本深夜| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美又色又爽又黄视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 丰满的人妻完整版| 少妇的逼好多水| 最近最新免费中文字幕在线| aaaaa片日本免费| 黄色丝袜av网址大全| svipshipincom国产片| 免费av观看视频| 99国产精品一区二区三区| 日本黄大片高清| 色在线成人网| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品成人久久久久久| 日本 av在线| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美性感艳星| 中国美女看黄片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99热这里只有精品一区| 99久国产av精品| x7x7x7水蜜桃| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品一区二区三区视频在线 | 日本与韩国留学比较| 99精品欧美一区二区三区四区| 观看美女的网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲人成电影免费在线| 在线国产一区二区在线| 日本五十路高清| 亚洲性夜色夜夜综合| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 欧美bdsm另类| 国产亚洲精品久久久com| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| av视频在线观看入口| 亚洲av电影不卡..在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 五月玫瑰六月丁香| 99在线视频只有这里精品首页| av专区在线播放| 波多野结衣高清无吗| a级毛片a级免费在线| 很黄的视频免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩欧美精品v在线| 精品免费久久久久久久清纯| 久久人妻av系列| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 成年免费大片在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 18禁国产床啪视频网站| 99热6这里只有精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 91av网一区二区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 中出人妻视频一区二区| 婷婷精品国产亚洲av| 宅男免费午夜| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲色图av天堂| 久久久成人免费电影| 午夜老司机福利剧场| 国产综合懂色| www日本在线高清视频| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲乱码一区二区免费版| 99久久精品热视频| 九九热线精品视视频播放| 亚洲av熟女| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲国产中文字幕在线视频| 人人妻人人看人人澡| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 丁香欧美五月| 欧美一区二区国产精品久久精品| 桃红色精品国产亚洲av| 色av中文字幕| 91在线观看av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 色综合亚洲欧美另类图片| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产亚洲欧美98| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久99热这里只有精品18| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 麻豆国产av国片精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 啦啦啦免费观看视频1| 午夜福利在线观看吧| 国产色婷婷99| www日本黄色视频网| 成人无遮挡网站| 中文字幕久久专区| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 成人一区二区视频在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲五月天丁香| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩高清综合在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 在线视频色国产色| a在线观看视频网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲美女黄片视频| 精品欧美国产一区二区三| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产色爽女视频免费观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| a级毛片a级免费在线| 校园春色视频在线观看| 午夜福利高清视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 窝窝影院91人妻| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美成人a在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜免费成人在线视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 色噜噜av男人的天堂激情| 夜夜爽天天搞| 亚洲国产色片| 一区福利在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 舔av片在线| 国产精华一区二区三区| 久久伊人香网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| av天堂在线播放| 成人三级黄色视频| 国产av不卡久久| 免费搜索国产男女视频| xxxwww97欧美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产一区二区三区视频了| 亚洲av成人av| 十八禁人妻一区二区| 日本在线视频免费播放| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 男人的好看免费观看在线视频| 日韩欧美在线二视频| 国产乱人伦免费视频| 在线观看一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 国产成+人综合+亚洲专区| 高清日韩中文字幕在线| 久久草成人影院| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产一区二区在线观看日韩 | 小说图片视频综合网站| 99在线人妻在线中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区三区国产精品乱码| 国产高清视频在线观看网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜免费观看网址| 久久人人精品亚洲av| 中国美女看黄片| 韩国av一区二区三区四区| 丰满的人妻完整版| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品一区av在线观看| 午夜老司机福利剧场| 国产伦在线观看视频一区| 黄片小视频在线播放| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产高清在线一区二区三| 午夜福利免费观看在线| 黄色片一级片一级黄色片| 免费在线观看日本一区| 大型黄色视频在线免费观看| 天天添夜夜摸| 老司机午夜福利在线观看视频| 成年版毛片免费区| 精品国产美女av久久久久小说| 性色avwww在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 在线观看舔阴道视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 成人午夜高清在线视频| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 在线观看午夜福利视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 日本与韩国留学比较| 免费大片18禁| 色av中文字幕| 一级毛片高清免费大全| 亚洲欧美激情综合另类| av专区在线播放| 日韩免费av在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 高清毛片免费观看视频网站| 最新美女视频免费是黄的| 国产极品精品免费视频能看的| 国产成年人精品一区二区| 1024手机看黄色片| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲真实伦在线观看| 天美传媒精品一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 熟女电影av网| 男女床上黄色一级片免费看| 久9热在线精品视频| 一区二区三区国产精品乱码| av天堂在线播放| 日本免费a在线| 国产精品电影一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 国产高清有码在线观看视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产av不卡久久| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产99白浆流出| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产免费男女视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美最黄视频在线播放免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 狂野欧美激情性xxxx| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 麻豆久久精品国产亚洲av| 免费看十八禁软件| 婷婷精品国产亚洲av| 国产伦人伦偷精品视频| 香蕉久久夜色| 欧美性感艳星| 亚洲无线观看免费| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 欧美高清成人免费视频www| 波多野结衣高清作品| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产高清激情床上av| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品一区av在线观看| 久99久视频精品免费| 欧美三级亚洲精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 婷婷亚洲欧美| 免费搜索国产男女视频| 手机成人av网站| 香蕉丝袜av| 18+在线观看网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久伊人香网站| 欧美在线黄色| 校园春色视频在线观看| avwww免费| 免费看日本二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 精品熟女少妇八av免费久了| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲最大成人手机在线| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品久久视频播放| 久久国产精品影院| 亚洲黑人精品在线| 免费无遮挡裸体视频| 香蕉丝袜av| 亚洲成av人片在线播放无| 成年女人永久免费观看视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲精品色激情综合| 成年免费大片在线观看| 午夜老司机福利剧场| 女人被狂操c到高潮| 18+在线观看网站| 精品乱码久久久久久99久播| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 免费大片18禁| 日本三级黄在线观看| 我的老师免费观看完整版| 天美传媒精品一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 18禁美女被吸乳视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产高清视频在线播放一区| 欧美一区二区亚洲| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 97碰自拍视频| 日韩av在线大香蕉| 亚洲在线观看片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久色成人| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产视频内射| 无遮挡黄片免费观看| 99久久精品国产亚洲精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 无遮挡黄片免费观看| 性欧美人与动物交配| 国产真实伦视频高清在线观看 | 日韩精品中文字幕看吧| 一个人观看的视频www高清免费观看| 成人国产综合亚洲| 一边摸一边抽搐一进一小说| 在线天堂最新版资源| 国产成人影院久久av| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产不卡一卡二| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜a级毛片| 法律面前人人平等表现在哪些方面| av欧美777| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲人成网站高清观看| 国产一区二区在线av高清观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲熟妇熟女久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 偷拍熟女少妇极品色| 国产午夜精品论理片| 天美传媒精品一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品久久视频播放| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品嫩草影院av在线观看 | a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女黄网站色视频| 校园春色视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 久久国产精品影院| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 人妻久久中文字幕网| 欧美三级亚洲精品| 18禁在线播放成人免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产乱人视频| 一本一本综合久久| 国产黄片美女视频| 国产精品女同一区二区软件 | 免费人成视频x8x8入口观看| 一级毛片高清免费大全| 深夜精品福利| 欧美中文综合在线视频| 日本与韩国留学比较| 操出白浆在线播放| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日韩av在线大香蕉| 又黄又粗又硬又大视频| 九九热线精品视视频播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久人人做人人爽| e午夜精品久久久久久久| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日本黄色视频三级网站网址| 丁香欧美五月| 最后的刺客免费高清国语| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 色在线成人网| 精品无人区乱码1区二区| 成人av一区二区三区在线看| 乱人视频在线观看| 九色国产91popny在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 高清毛片免费观看视频网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 听说在线观看完整版免费高清| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产精品一区二区免费欧美| 久久亚洲精品不卡| 国产高清videossex| 亚洲av成人av| 国产成+人综合+亚洲专区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 不卡一级毛片| xxxwww97欧美| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 观看免费一级毛片| 亚洲激情在线av| 99热这里只有精品一区| 美女高潮的动态| 日本黄色视频三级网站网址| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美日本视频| 淫秽高清视频在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 丁香欧美五月| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产免费一级a男人的天堂| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 俄罗斯特黄特色一大片| 中文字幕高清在线视频| 亚洲内射少妇av| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线免费观看的www视频| 天堂影院成人在线观看| 午夜免费观看网址| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲成人精品中文字幕电影| 麻豆成人午夜福利视频| 久久精品91蜜桃| 日韩高清综合在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品乱码一区二三区的特点| 制服丝袜大香蕉在线| 中文资源天堂在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费在线观看日本一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 级片在线观看| 午夜免费观看网址| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久中文看片网| 午夜久久久久精精品| 在线视频色国产色| 午夜激情福利司机影院| 免费看光身美女| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 免费高清视频大片| 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 很黄的视频免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 少妇的逼水好多| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲av一区综合| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 波野结衣二区三区在线 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美一级毛片孕妇| 男女午夜视频在线观看| 色视频www国产| 亚洲 国产 在线| 午夜久久久久精精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 精品国产美女av久久久久小说| 国产久久久一区二区三区| 99热只有精品国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 床上黄色一级片| 91在线观看av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产毛片a区久久久久| 免费搜索国产男女视频| 亚洲专区国产一区二区| 一本久久中文字幕| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 美女 人体艺术 gogo| 91久久精品电影网| 老司机午夜十八禁免费视频| 男女午夜视频在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 91在线观看av| 欧美性感艳星| 伊人久久精品亚洲午夜| 岛国在线免费视频观看| 婷婷精品国产亚洲av| 禁无遮挡网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲人与动物交配视频| 波多野结衣高清无吗| 亚洲一区高清亚洲精品| 丁香欧美五月| svipshipincom国产片| 97超视频在线观看视频| 成人一区二区视频在线观看| 综合色av麻豆| 国产探花极品一区二区| 天天躁日日操中文字幕| 国产视频一区二区在线看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 无人区码免费观看不卡| av中文乱码字幕在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日本 av在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 变态另类丝袜制服| 午夜视频国产福利| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲一区二区三区不卡视频| 极品教师在线免费播放| 一本综合久久免费| 欧美在线一区亚洲| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 黄片大片在线免费观看| 久久久久久人人人人人| av片东京热男人的天堂| 午夜福利欧美成人| 欧美大码av| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 精品无人区乱码1区二区| 成人三级黄色视频| 午夜久久久久精精品| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产视频内射| 精品国产美女av久久久久小说| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲性夜色夜夜综合| 国内精品一区二区在线观看| a在线观看视频网站| 大型黄色视频在线免费观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久精品大字幕| 18禁国产床啪视频网站| 国产v大片淫在线免费观看| 一级a爱片免费观看的视频| 色尼玛亚洲综合影院| 一a级毛片在线观看| 国产单亲对白刺激| 少妇丰满av| 九色国产91popny在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 黄片小视频在线播放| a级一级毛片免费在线观看| 一夜夜www| 中文亚洲av片在线观看爽| 51国产日韩欧美| 五月伊人婷婷丁香| 久久国产精品人妻蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 国产毛片a区久久久久|