• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藏靈菇乳中具有優(yōu)良抗氧化活性乳酸菌的篩選鑒定

    2015-10-18 09:44:34陳歷水陳歷俊劉繼超姜鐵民
    食品科學 2015年3期
    關鍵詞:過氧化乳酸菌提取物

    羅 章,陳歷水,陳歷俊,劉繼超,姜鐵民

    (1.西藏大學農(nóng)牧學院食品科學學院,西藏 林芝 860000;2.中糧營養(yǎng)健康研究院,品牌食品研發(fā)中心,北京 102209;3.北京三元食品股份有限公司科研中心,北京 100086)

    藏靈菇乳中具有優(yōu)良抗氧化活性乳酸菌的篩選鑒定

    羅 章1,陳歷水2,陳歷俊3,劉繼超3,姜鐵民3

    (1.西藏大學農(nóng)牧學院食品科學學院,西藏 林芝 860000;2.中糧營養(yǎng)健康研究院,品牌食品研發(fā)中心,北京 102209;3.北京三元食品股份有限公司科研中心,北京 100086)

    為了得到具有抗氧化活性的乳酸菌,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法和抑制脂質(zhì)過氧化法對11 株來源于西藏藏靈菇乳的乳酸菌抗氧化活性進行測定,包括它們的完整細胞和無細胞提取物,發(fā)現(xiàn)HN05菌株有較好的抗氧化活性。根據(jù)菌株的表型、生理生化特征和基因型的特性,初步將HN05菌株鑒定為清酒乳桿菌清酒亞種(Lactobacillus sakei subsp. sakei)。

    藏靈菇乳;抗氧化活性;乳酸菌;鑒定

    有研究表明自由基是導致機體氧化損傷的原因,如癌癥、肺氣腫、肝硬化、動脈粥樣硬化和關節(jié)炎等都與氧化損傷有關。因此,清除體內(nèi)多余的自由基直接關系到生物體的健康。雖然人類與其他生物體都具有抗氧化防御和修復系統(tǒng),可以保護機體免遭氧化損傷,但這些系統(tǒng)不能完全有效地防止損害。所以,通過補充抗氧化劑或含有抗氧化劑的食品可以幫助人體減少氧化損傷[1-2]。有報道[3-4]發(fā)現(xiàn)有的乳酸菌及其相關制品可減少體內(nèi)的自由基含量,具有抗氧化活性,可預防和抑制脂質(zhì)過氧化和減少一些相關疾病的發(fā)生。

    藏靈菇乳是西藏傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品,這類飲品由于其獨特的保健效果,在民間廣為流傳,長期飲用能夠增強人體免疫力、補充維生素、延緩衰老、消除疲勞,特別適合胃病、腎病和肝膽病患者。其發(fā)酵劑開菲爾粒(Kefir grain)是一種由數(shù)種乳酸菌、酵母菌和醋酸菌共生而成的多菌種復合體,呈乳白色、膠質(zhì)狀,外形酷似米粒,可在鮮乳中生長、分裂并將其特性傳給下一代以產(chǎn)生新粒,藏靈菇由于其經(jīng)過在牛奶中培養(yǎng),體積會增大很多,形狀如盛開的雪蓮,所以又稱之為“西藏雪蓮”[5]?;诓仂`菇乳獨特的營養(yǎng)價值和生理功能,目前,開發(fā)適應大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的藏靈菇發(fā)酵劑,已成為國內(nèi)外研究的熱點,藏靈菇的菌相研究尤為重要。本課題組對藏靈菇乳中篩選得到的乳酸菌進行體外抗氧化實驗,并將篩選得到的具有較強抗氧化活性的菌株進行進一步鑒定,為菌株的后期應用提供理論基礎。

    1 材料與方法

    1.1菌株、試劑與培養(yǎng)基

    被測乳酸菌均為西藏農(nóng)牧民家自然發(fā)酵藏靈菇中分離得到。標準菌株鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus GG)ATCC 53103和對照菌株德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)均為實驗室保藏。

    1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、亞油酸 美國Sigma公司;吐溫-20、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)及其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    MRS液體/固體培養(yǎng)基 北京陸橋生物技術(shù)有限公司;聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)用酶、核酸分離試劑、電泳相關試劑與材料 生工生物工程(上海)股份有限公司。

    1.2儀器與設備

    BD150L型厭氧培養(yǎng)箱 德國Binder股份有限公司;UV-2100型紫外-可見分光光度計 尤尼柯(上海)有限公司;BX53型微生物顯微鏡 日本奧林巴斯公司;Scientz-IID超聲波細胞粉碎機 寧波新芝科技有限公司;PCR儀 日本TaKaRa公司。

    1.3方法

    1.3.1樣品預處理

    對藏靈菇進行無菌采樣,經(jīng)低溫冰盒運輸,取樣品25 g加入到225 g無菌PBS(pH 7.4,含0.5 g/L半胱氨酸鹽酸鹽)置于均質(zhì)儀中拍打均質(zhì)5 min,然后經(jīng)過標準系列稀釋,制備成不同稀釋度的樣品供微生物分離使用。

    1.3.2菌株活化

    取4 ℃冰箱中貯存的2 代菌株,以1%接種量接種于滅菌的MRS培養(yǎng)基中,置于37 ℃振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h,獲得新鮮的第3代培養(yǎng)物用于實驗。

    1.3.3乳酸菌的培養(yǎng)

    所有菌株都接種于MRS(液體/固體)培養(yǎng)基中(牛肉膏3 g、酵母提取物5 g、吐溫-80 1 mL、MgSO4·7H2O 0.64 g、K2HPO45.0 g、冰乙酸4.30 mL、MnSO40.17 g、蛋白胨7.0 g、葡萄糖20.0 g、乙酸鈉5.0 g、檸檬酸銨2.0 g、胰蛋白胨7.0 g、L-半胱氨酸0.5 g,加蒸餾水定容至1 L,調(diào)節(jié)至pH 6.2~6.5)高壓滅菌(1.01 MPa,121 ℃)15 min后備用。

    1.3.4無細胞培養(yǎng)物的制備

    所有的菌株經(jīng)過3 次傳代。培養(yǎng)液5 000 r/min離心20 min,收集菌體,用PBS洗滌3 次,重懸浮于PBS溶液中,調(diào)整菌數(shù)到108CFU/mL,冰水浴中超聲破碎25 min細胞后,于4 ℃、12 000 r/min離心30 min,收集上清液得無細胞提取物。

    1.3.5清除DPPH自由基能力的測定

    對DPPH自由基清除能力的測定參照參考文獻[6]。

    1.3.6抗脂質(zhì)過氧化能力的測定

    參照文獻[7]方法略加改動。0.5 mL樣品與0.5 mL的PBS溶液(0.02 mol/L,pH 7.4)、1 mL亞油酸的乳化液(18.8 mL水中添加1 mL亞油酸,0.2 mL吐溫-20)混合,然后加入0.2 mL 0.01% FeSO4和0.2 mL 20 mmol/L H2O2在37 ℃水浴中反應12 h。反應液加入0.2 mL的三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA),2 mL的硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA),0.2 mL 0.4%的二丁基羥基甲苯(butylated hydroxytoluene,BHT),在100℃反應30 min,冷卻后加入2.5 mL三氯甲烷抽提,離心收集上清液在532 nm波長處測吸光度(A)。實驗中以PBS作為對照,抗脂質(zhì)過氧化率以下式計算得出。

    1.3.7乳酸菌的形態(tài)學鑒定及生理生化鑒定

    乳酸菌在MRS培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后進行革蘭氏染色和形態(tài)學檢測。過氧化氫酶活性檢測及發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣實驗按照凌代文等[8]的方法進行。選擇在5、10、40、45 ℃不同溫度條件下進行生長實驗,其中5 ℃和10 ℃條件下培養(yǎng)14 d;40 ℃和45 ℃條件下培養(yǎng)7 d,分別在pH 3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、7.5和8.0條件下培養(yǎng)7 d,觀察乳酸菌的生長狀況[9]。分別在質(zhì)量分數(shù)為 3.0%和6.5%的NaCl溶液中觀察乳酸菌的耐鹽能力。接觸酶實驗、葡萄糖產(chǎn)氣實驗及糖發(fā)酵實驗等生理生化特征的分析參照有關文獻[10]。

    1.3.8乳酸菌的16S rDNA鑒定和進化分析

    將確定的乳酸菌分離物涂布在MRS平板上厭氧37 ℃培養(yǎng)72 h后,觀察菌落形態(tài)和細胞顯微形態(tài),利用通用引物(27F:5’-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’,1525R:5’-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3’)擴增乳酸菌16S rDNA,送生工生物工程(上海)股份有限公司進行測序,將測序結(jié)果在NCBI BLAST中的核酸庫進行比對,根據(jù)相似度及評分來判斷菌株種屬,并應用Cluxtal X和MEGA 5.0軟件采用鄰位相連法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

    1.3.9生長曲線的測定

    用待測菌株24 h的培養(yǎng)液,以3%的接種量接入MRS液體培養(yǎng)基中,于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h,每隔2 h取一次樣品,放于4 ℃冰箱中,最后以培養(yǎng)基為空白,在620 nm波長處測定樣品的光密度(OD)值,同時測定pH值,并以培養(yǎng)時間為橫坐標,相對應的OD620nm和pH值為縱坐標分別繪制生長曲線[11]。

    1.4數(shù)據(jù)分析

    所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計軟件(16.0版)分析,每組實驗重復3 次,數(shù)據(jù)結(jié)果以的方式表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1具有抗氧化活性乳酸菌的篩選

    清除DPPH自由基活性及抑制脂質(zhì)過氧化活性的測定是篩選具有抗氧化活性菌株常用的方法[12]。當DPPH自由基遇到提供質(zhì)子的物質(zhì)抗氧化劑時就會被清除,表現(xiàn)為吸光度的降低?;诖嗽恚寡趸镔|(zhì)的抗氧化能力可以用其清除DPPH自由基的能力來表示。本實驗對11 株來源于藏靈菇乳中得到的乳酸菌和1 株標準菌株ATCC 53103(所有測試菌濃度均約為108CFU/mL)清除DPPH的能力進行了測定,結(jié)果如表1所示??芍煌娜樗峋憩F(xiàn)出不同的清除活性,而且乳酸菌完整細胞的活性一般要比相對應的提取物的活性低,比如完整細胞的活性為1%~37%不等,而提取物的活性范圍則在4%~47%之間。其中活性最強的為菌株HN05,其次是菌株LS31,這2 株菌的活性顯著高于包括標準菌株ATCC 53103的其他菌株(P<0.05)。

    表1 乳酸菌的清除DPPH自由基活性Table1 DPPH radical scavenging activity of LAB isolates

    表1 乳酸菌的清除DPPH自由基活性Table1 DPPH radical scavenging activity of LAB isolates

    注:同列小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)。表2同。

    菌株號完整細胞無細胞提取物HN0536.72±0.68g46.78±0.55ghLZ1532.43±0.40g25.31±2.19dLS1012.38±1.32d40.03±3.25hLS1511.90±0.54d29.57±0.27dLS3113.09±1.65d42.73±0.55efLZ041.21±0.03a12.31±0.10bLZ559.03±0.43c38.65±0.36eGB616.26±1.54e27.85±0.54dGB111.15±0.04a16.98±0.51cGB164.28±0.05b8.63±0.65bGB221.36±0.05a4.25±0.52aATCC 5310328.01±0.12f40.46±1.65ef

    由于不飽和脂肪酸(LH)在活性氧的引發(fā)下可以發(fā)生過氧化反應,在脂類過氧化過程中產(chǎn)生L·、LO·、LOO·等自由基與LOOH。其中LOOH可使I-釋放,生成共軛二烯、乙烷等氣體及丙二醛等中間產(chǎn)物,通過測定中間產(chǎn)物可以得到抑制過氧化反應的能力[13]。通過測定12 株不同乳酸菌在亞油酸氧化體系中抑制脂肪過氧化的能力,結(jié)果如表2所示。乳酸菌完整細胞活性為6.48%~59.38%,低于相應的無細胞提取物的活性(45.78%~72.43%),這一結(jié)果與報道過的長雙歧桿菌ATCC 15708和乳酸菌ATCC 4356及其他乳酸菌趨勢相同[14]。

    Lee等[15]曾對4 株乳桿菌的總抗氧化能力和對活性氧的耐受性進行測定后發(fā)現(xiàn)L. casei KCTC 3260的完整細胞和無細胞提取物抑制亞油酸過氧化的能力很強,抑制率分別達到了46.2%和72.9%。Lin等[16]對11 株乳酸菌進行抑制脂質(zhì)過氧化反應和清除活性氧自由基能力的研究發(fā)現(xiàn)5 株L. delbrueckii ssp. bulgaricus和6 株St. thermophilus都顯示了較好的抑制亞油酸過氧化的能力,所有菌株的無細胞提取物都具有清除自由基能力。進一步研究發(fā)現(xiàn)Lacidophilus ATCC 4356和B. longum ATCC 15708的完整細胞對亞油酸過氧化反應的抑制率分別為48%和28%,對DPPH自由基的清除率分別為52%和21%[17],與本實驗結(jié)果相近。本實驗發(fā)現(xiàn)菌株HN05具有較強的清除DPPH自由基活性,而且抑制脂質(zhì)過氧化活性也比較高,所以選擇該菌株進行下一步研究;菌株LS31雖然有較強的清除DPPH自由基的能力,抑制脂質(zhì)過氧化的能力卻比較低,所以沒有將該菌株做進一步研究。

    表2 乳酸菌的抑制脂質(zhì)過氧化活性Table2 Inhibitory activity of LAB isolates on lipid peroxidation %

    2.2乳酸菌的鑒定

    2.2.1乳酸菌的形態(tài)學與生理生化特征

    經(jīng)實驗檢測,HN05菌株為桿狀,革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性、同型發(fā)酵乳酸菌,具有一般乳桿菌的特性。采用德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)為對照菌株進行研究,所分離到的革蘭氏陽性桿菌在硝酸鹽還原實驗、明膠液化實驗、溶血實驗、聯(lián)苯胺實驗、H2S產(chǎn)生實驗以及運動性實驗均呈陰性,在10~45 ℃之間均能生長,在pH 4.5的環(huán)境中生長,其結(jié)果與對照菌株一致,鑒定為乳桿菌屬的細菌,結(jié)果見表3。

    表3 菌株 HN05的具乳桿菌屬鑒定結(jié)果Table3 Identification of strain HN05 with Latbcillus

    菌株HN05除具有乳桿菌屬的特征外,能分解多種單糖、雙糖和多糖,但不能發(fā)酵鼠李糖、木糖,也不利用麥芽糖、棉子糖,15 ℃能生長分解七葉苷,水解精氨酸,初步鑒定為清酒乳桿菌(Lactobacillus sakei),結(jié)果見表4。

    表4 菌株 HN05的具清酒乳桿菌鑒定結(jié)果Table4 Identification of strain HN05 with Lactobacillus sakei

    2.2.2乳酸菌菌株16S rDNA序列測定及系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建

    通過乳酸菌16S rDNA的特異性對HN05菌株進行鑒定。提取該菌的總DNA,在滅過菌的PCR管中加入Taq酶、ddH2O、模板、上游引物UNI-F和下游引物UNI-R。離心后放入PCR儀中對其16S rDNA序列進行PCR擴增,擴增后進行電泳檢測,如圖1所示,發(fā)現(xiàn)該菌株的序列在1 000 bp與2 000 bp之間,將所得部分序列送生工生物工程(上海)股份有限公司測序,得到菌株HN05的16S rDNA序列為1 453 bp。將測得的序列以BLAST軟件在GenBank中進行相似性檢索,用DNAStar軟件分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株HN05和序列號為NR_075032.1(一株來源于美國的Lactobacillus sakei subsp. sakei 23K)的同源性達100%。將得到的序列同GenBank中16 株同源性高于98%的乳酸菌進行BLAST分析,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,如圖2所示。結(jié)果顯示菌株HN05與Lactobacillus sakei親緣關系最近。由此初步確定這株菌為Lactobacillus sakei。

    圖1 菌株HN05 16S rDNA PCR產(chǎn)物擴增圖Fig.1 Electrophorogram of 16S rDNA PCR products from strain HN05

    圖2 HN05菌株 16S rDNA序列系統(tǒng)進化樹Fig.2 Phylogenetic tree based 16S rDNA sequences of strain HN05

    2.3乳酸菌的生長曲線

    圖3 乳酸菌HN05的生長曲線Fig.3 Growth curve of strain HN05

    圖4 乳酸菌HN05的pH值變化Fig.4 The pH change of strain HN05

    3 結(jié) 論

    本研究對從西藏藏靈菇乳中篩選得到的11 株乳酸菌進行抗氧化實驗后,得到一株具有抗氧化活性的菌株HN05,通過對該菌株的形態(tài)分析、生理生化分析及16S rDNA序列的測定,結(jié)果顯示該菌株為清酒乳桿菌(Lactobacillus sakei)。該菌株的對數(shù)生長期為2~12 h,12 h的生長速率達到最快,然后進入穩(wěn)定期,此后OD620nm值變化較小,但稍有增加的趨勢,pH值逐漸下降直到7 h之后,逐漸穩(wěn)定。

    [1] HALLIWELL B, GUTTERIDGE J M, CROSS C E. Free radicals,antioxidants and human disease: where are we now?[J]. Journal of Laboratory and Clinical Medicine, 1992, 119(6): 598-615.

    [2] SHAHIDI F. Antioxidants in food and food antioxidants[J]. Food/ Nahrung, 2000, 44(3): 158-163.

    [3] SAIDE J A O, GILLILAND S E. Anti-oxidative activity of lactobacilli measured by oxygen radical absorbance capacity[J]. Journal of Dairy Science, 2005, 88(4): 1352-1357.

    [4] SONGISEPP E, KULLISAAR T, HUTT P, et a1. A new probiotic cheese with anti-oxidative and antimicrobial activity[J]. Journal of Dairy Science, 2004, 87(7): 2017-2023.

    [5] 羅章, 陳歷俊, 陳歷水, 等. 西藏乳及發(fā)酵乳制品中乳酸菌與酵母菌分布[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(11): 392-395.

    [6] 陳歷水. 乳源潛在益生酵母菌的篩選鑒定及其對類Camembert干酪特性影響[D]. 哈爾濱: 哈爾濱工業(yè)大學, 2010: 1-20.

    [7] KULLISAAR T, SONGISEPP E, MIKELSAAR M, et al. Antioxidative probiotic fermented goats’ milk decreases oxidative stress-mediated atherogenicity in human subjects[J]. British Journal of Nutrition, 2003, 90(2): 449-456.

    [8] 凌代文, 東秀珠. 乳酸細菌分類鑒定及實驗方法[M]. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 1999.

    [9] CAI Y, SUYANANDANA P, SAMAN P, et al. Classification and characterization of lactic acid bacteria isolated from the intestines of common carp and fresh water prawns[J]. Journal of General and Applied Microbiology, 1999, 45(4): 177-184.

    [10] 周德慶. 微生物學實驗教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2006.

    [11] 張慧杰, 玉柱, 王林, 等. 青貯飼料中乳酸菌的分離鑒定及優(yōu)良菌株篩選[J]. 草地學報, 2011, 19(1): 137-140.

    [12] 劉天祎, 潘道東. 抗氧化活性乳酸菌的篩選[J]. 食品科學, 2011,32(19): 125-129.

    [13] 張?zhí)觳? 具有抗氧化活性乳酸菌的研究[D]. 上海: 上海水產(chǎn)大學,2007: 1-10.

    [14] USKOVA M A, KRAVCHENKO L V. Antioxidant properties of lactic acid bacteria: probiotic and yogurt strains[J]. Voprosy Pitaniia,2009, 78(2): 18-23.

    [15] LEE J, HWANG K, CHUNG M Y, et al. Resistance of Lactobacillus casei KCTC 3260 to reactive oxygen species (ROS): role for a metal ion chelating effect[J]. Journal of Food Science, 2005, 70(8): 388-391.

    [16] LIN M Y, CHANG F J. Antioxidative effect of intestinal bacteria Bifidobacterium longum ATCC 15708 and Lactobacillus acidophilus ATCC 4356[J]. Digestive Diseases and Sciences, 2000, 45(8): 1617-1622.

    [17] SHORI A B. Antioxidant activity and viability of lactic acid bacteria in soybean-yogurt made from cow and camel milk[J]. Journal of Taibah University for Science, 2013, 7(4): 202-208.

    [18] 許女, 王艷萍, 習傲登, 等. 西藏Kefir粒中菌相的初步研究[J]. 中國釀造, 2011, 30(10): 133-136.

    [19] 努爾古麗·熱合曼, 陳曉紅, 古麗蘇木·托克遜, 等. 清酒乳桿菌對新疆酸駝乳發(fā)酵特性的影響[J]. 食品科學, 2011, 32(13): 275-279.

    Screening and Identification of Lactic Acid Bacteria with High Antioxidant Activity from Tibetan Kefir

    LUO Zhang1, CHEN Lishui2, CHEN Lijun3, LIU Jichao3, JIANG Tiemin3
    (1. College of Food Science, Agricultural and Animal Husbandry College of Tibet University, Linzhi 860000, China;2. Brand Food Center of R&D, COFCO Nutrition and Health Research Institute, Beijing 102209, China;3. R&D Center, Beijing Sanyuan Food Co. Ltd., Beijing 100086, China)

    This study aimed to obtain lactic acid bacteria (LAB) with high antioxidant activity. Intact cells and cell-free extracts of 11 LAB isolates from Tibetan Kefir were evaluated for antioxidant activities by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazl(DPPH) free radical scavenging and linoleic acid peroxidation inhibition assays. Strain HN05 possessing excellent antioxidant activity was screened. Based on its morphological, biochemical, physiological and genotypic characteristics, this strain was identified as Lactobacillus sakei subsp. sakei.

    Tibetan Kefir; antioxidant activity; lactic acid bacteria; identification

    TS252.1

    A

    1002-6630(2015)03-0109-05

    10.7506/spkx1002-6630-201503021

    2014-02-08

    國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(2011AA100903)

    羅章(1965—),男,副教授,博士,研究方向為畜產(chǎn)品加工及貯藏。E-mail:luozhang1759@sohu.com

    猜你喜歡
    過氧化乳酸菌提取物
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:44
    中藥提取物或可用于治療肥胖
    中老年保健(2021年5期)2021-12-02 15:48:21
    脂質(zhì)過氧化在慢性腎臟病、急性腎損傷、腎細胞癌中的作用
    禽用乳酸菌SR1的分離鑒定
    神奇的落葉松提取物
    西洋參防護X線輻射對小鼠肺的過氧化損傷
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:48
    紫地榆提取物的止血作用
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:27
    乳酸菌成乳品市場新寵 年增速近40%
    過氧化硫酸鈉在洗衣粉中的應用
    乳飲品中耐胃酸乳酸菌的分離鑒定與篩選
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:04
    免费观看av网站的网址| 欧美日韩精品成人综合77777| 日韩中文字幕视频在线看片| 好男人视频免费观看在线| 少妇 在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 日本黄色日本黄色录像| 午夜av观看不卡| 一级毛片电影观看| 女性被躁到高潮视频| 久久久久久久国产电影| 欧美+日韩+精品| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产精品国产三级专区第一集| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 又黄又粗又硬又大视频| 一级爰片在线观看| 免费观看av网站的网址| 国产男女内射视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲第一区二区三区不卡| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 高清毛片免费看| 捣出白浆h1v1| 午夜av观看不卡| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日日啪夜夜爽| 天堂中文最新版在线下载| 日韩伦理黄色片| 国产综合精华液| 麻豆乱淫一区二区| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品 国内视频| 亚洲综合色网址| 最近手机中文字幕大全| 国产成人精品一,二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av福利片在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av播播在线观看一区| 国产高清国产精品国产三级| 久久久精品区二区三区| 国产精品.久久久| 日本色播在线视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 飞空精品影院首页| videosex国产| av免费在线看不卡| 国产精品嫩草影院av在线观看| 丝袜喷水一区| 精品福利永久在线观看| 伦理电影免费视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久ye,这里只有精品| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲丝袜综合中文字幕| 两性夫妻黄色片 | 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产日韩欧美视频二区| 99国产精品免费福利视频| 成人手机av| 免费大片18禁| 丝瓜视频免费看黄片| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲综合精品二区| 秋霞伦理黄片| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产亚洲最大av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产av一区二区精品久久| 久久久亚洲精品成人影院| 午夜久久久在线观看| 欧美日韩av久久| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 在线观看免费高清a一片| 香蕉精品网在线| 国产欧美亚洲国产| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 少妇熟女欧美另类| 亚洲性久久影院| 只有这里有精品99| 日韩成人av中文字幕在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产一区二区激情短视频 | 久久午夜福利片| 亚洲精品一区蜜桃| 午夜福利网站1000一区二区三区| 成人漫画全彩无遮挡| 国产69精品久久久久777片| 在线天堂中文资源库| 日韩中字成人| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美97在线视频| 国产免费一级a男人的天堂| 午夜激情久久久久久久| 99热这里只有是精品在线观看| 国产在线视频一区二区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 2021少妇久久久久久久久久久| 免费少妇av软件| 永久免费av网站大全| 夫妻午夜视频| 久久久久久人人人人人| 香蕉丝袜av| 黑人高潮一二区| 久久久久精品性色| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 国产亚洲最大av| 丝袜在线中文字幕| 熟女电影av网| 精品一区在线观看国产| 中文字幕制服av| 久久女婷五月综合色啪小说| 九色成人免费人妻av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲内射少妇av| 99热全是精品| 国产成人精品在线电影| 国产片内射在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 99香蕉大伊视频| 精品国产国语对白av| 国产亚洲一区二区精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 99热网站在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品人妻久久久影院| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本黄色日本黄色录像| 日韩av免费高清视频| 秋霞在线观看毛片| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品久久蜜臀av无| 欧美成人精品欧美一级黄| 看十八女毛片水多多多| 国产男女内射视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久热在线av| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲熟女精品中文字幕| 老司机亚洲免费影院| 国产不卡av网站在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 尾随美女入室| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲国产色片| 五月开心婷婷网| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人免费观看视频高清| www.熟女人妻精品国产 | 日韩三级伦理在线观看| 丝袜在线中文字幕| 国产永久视频网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品视频人人做人人爽| 美女主播在线视频| a 毛片基地| 精品少妇黑人巨大在线播放| 精品久久国产蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 在线观看www视频免费| 看十八女毛片水多多多| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 中文字幕免费在线视频6| 久久人妻熟女aⅴ| 精品第一国产精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜日本视频在线| 2021少妇久久久久久久久久久| 尾随美女入室| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品,欧美精品| 嫩草影院入口| 亚洲国产精品999| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 在现免费观看毛片| 国产免费现黄频在线看| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品久久久av美女十八| 一区在线观看完整版| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲性久久影院| 成人国语在线视频| 国产精品久久久久久精品古装| 插逼视频在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av男天堂| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲中文av在线| 色哟哟·www| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 丝袜人妻中文字幕| 99久国产av精品国产电影| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产成人精品婷婷| videos熟女内射| freevideosex欧美| 热99国产精品久久久久久7| 免费看光身美女| 九色成人免费人妻av| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产一区二区三区av在线| 国产在视频线精品| 90打野战视频偷拍视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产xxxxx性猛交| 亚洲熟女精品中文字幕| 女性被躁到高潮视频| 少妇高潮的动态图| 精品第一国产精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久精品国产自在天天线| 日本欧美国产在线视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 夫妻午夜视频| 午夜影院在线不卡| 亚洲av成人精品一二三区| 韩国av在线不卡| 人体艺术视频欧美日本| 观看美女的网站| 国产色婷婷99| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美成人午夜精品| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲,一卡二卡三卡| 考比视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 老女人水多毛片| 香蕉国产在线看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品一二三区在线看| 国产av码专区亚洲av| 人人澡人人妻人| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产熟女午夜一区二区三区| 99热全是精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成年人免费黄色播放视频| www.熟女人妻精品国产 | 国产视频首页在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 91aial.com中文字幕在线观看| a 毛片基地| 全区人妻精品视频| 亚洲成人手机| 久久久久国产网址| 9色porny在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 高清av免费在线| 国产在线一区二区三区精| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久国内精品自在自线图片| 熟女电影av网| 性色avwww在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 欧美另类一区| 午夜福利乱码中文字幕| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产成人欧美| 免费人妻精品一区二区三区视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费观看在线日韩| 亚洲国产最新在线播放| www.av在线官网国产| 搡老乐熟女国产| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产男人的电影天堂91| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲国产精品专区欧美| 成年av动漫网址| 国产精品无大码| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久99一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 美女视频免费永久观看网站| 男人操女人黄网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久99一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 女人久久www免费人成看片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品三级大全| 国产又爽黄色视频| 黄片无遮挡物在线观看| a 毛片基地| 免费观看在线日韩| 9色porny在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲国产av影院在线观看| 婷婷成人精品国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 2021少妇久久久久久久久久久| 大陆偷拍与自拍| 热re99久久国产66热| 99re6热这里在线精品视频| 免费av中文字幕在线| 91成人精品电影| 欧美日韩精品成人综合77777| 妹子高潮喷水视频| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产黄频视频在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品熟女久久久久浪| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 大片免费播放器 马上看| 人妻一区二区av| 交换朋友夫妻互换小说| 观看美女的网站| 新久久久久国产一级毛片| 中文天堂在线官网| 免费大片18禁| 精品人妻一区二区三区麻豆| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 最近最新中文字幕免费大全7| 视频中文字幕在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 久久免费观看电影| 日日爽夜夜爽网站| 韩国精品一区二区三区 | 国产免费视频播放在线视频| 久久久欧美国产精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 韩国精品一区二区三区 | 黄色视频在线播放观看不卡| 91精品三级在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 在线观看一区二区三区激情| 九草在线视频观看| 一级毛片 在线播放| 国产成人aa在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久久大尺度免费视频| 日本午夜av视频| 亚洲成人一二三区av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| a级毛色黄片| 国产黄频视频在线观看| 飞空精品影院首页| 草草在线视频免费看| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲国产av新网站| 十八禁高潮呻吟视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产精品国产精品| 黑人高潮一二区| 天天影视国产精品| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久精品免费免费高清| 亚洲欧洲日产国产| 久久久欧美国产精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 少妇的逼水好多| 丰满乱子伦码专区| 宅男免费午夜| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利,免费看| 青春草亚洲视频在线观看| 人妻一区二区av| 午夜免费鲁丝| 国产精品一区二区在线观看99| 毛片一级片免费看久久久久| 国产有黄有色有爽视频| 国产亚洲精品久久久com| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 曰老女人黄片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 18禁动态无遮挡网站| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一个人免费看片子| 男女边吃奶边做爰视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲av电影在线进入| 9191精品国产免费久久| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 蜜桃国产av成人99| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲欧洲日产国产| 久久久久久久久久成人| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久国产精品麻豆| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品久久久久久久电影| 男人爽女人下面视频在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 只有这里有精品99| 国产爽快片一区二区三区| 精品国产一区二区久久| 丝袜喷水一区| www.熟女人妻精品国产 | 一本久久精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品一二三区在线看| 69精品国产乱码久久久| 国产片特级美女逼逼视频| 看十八女毛片水多多多| 日韩成人伦理影院| 国产精品一国产av| 丰满少妇做爰视频| 另类亚洲欧美激情| 精品久久久久久电影网| 婷婷色av中文字幕| 成人毛片60女人毛片免费| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲国产精品999| 2018国产大陆天天弄谢| 精品亚洲成a人片在线观看| 两性夫妻黄色片 | 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品,欧美精品| 国产片特级美女逼逼视频| 观看美女的网站| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 一二三四在线观看免费中文在 | 热99国产精品久久久久久7| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 日本wwww免费看| 成人综合一区亚洲| 免费大片18禁| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 曰老女人黄片| 男人操女人黄网站| 午夜福利视频在线观看免费| 国产片内射在线| 黄色配什么色好看| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品蜜桃在线观看| 桃花免费在线播放| 日韩一区二区视频免费看| 午夜免费鲁丝| 中文字幕人妻丝袜制服| 人妻系列 视频| 人人妻人人澡人人看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品.久久久| 在现免费观看毛片| 黄片无遮挡物在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久国产网址| 免费日韩欧美在线观看| 免费观看av网站的网址| 国产亚洲一区二区精品| 日日撸夜夜添| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 在线天堂最新版资源| 一级黄片播放器| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲国产看品久久| 观看美女的网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产淫语在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 寂寞人妻少妇视频99o| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产一区二区在线观看av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | a级毛片黄视频| 成人手机av| 日本91视频免费播放| 在线观看国产h片| 久久久国产精品麻豆| 国产 精品1| 欧美日韩视频精品一区| 国产日韩欧美在线精品| 黄片播放在线免费| 免费观看av网站的网址| 妹子高潮喷水视频| 亚洲精品色激情综合| 伦精品一区二区三区| 一本大道久久a久久精品| 丝袜人妻中文字幕| 男女午夜视频在线观看 | 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美精品亚洲一区二区| 国产国语露脸激情在线看| 国产色婷婷99| 日韩成人av中文字幕在线观看| av.在线天堂| 另类精品久久| 一本色道久久久久久精品综合| 久久av网站| 一本大道久久a久久精品| 国产精品成人在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 9色porny在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 妹子高潮喷水视频| 在线观看三级黄色| 国产欧美亚洲国产| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 色哟哟·www| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 少妇 在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产精品人妻久久久久久| av电影中文网址| 中国国产av一级| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品一区www在线观看| 成人国产麻豆网| 国产精品国产av在线观看| 精品少妇内射三级| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 丝袜喷水一区| av国产精品久久久久影院| 日本黄大片高清| 午夜精品国产一区二区电影| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色一级大片看看| 少妇人妻精品综合一区二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲在久久综合| 久久久久精品性色| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 少妇的逼水好多| 亚洲综合精品二区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲三级黄色毛片| 嫩草影院入口| 久久99蜜桃精品久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 高清不卡的av网站| 午夜日本视频在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| av网站免费在线观看视频| 欧美成人午夜免费资源| 精品第一国产精品| 日本av手机在线免费观看| 美女大奶头黄色视频| 亚洲图色成人| 青青草视频在线视频观看| 边亲边吃奶的免费视频| 日日啪夜夜爽| xxxhd国产人妻xxx| 日韩一本色道免费dvd| 国产乱人偷精品视频| 黄色怎么调成土黄色| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 人体艺术视频欧美日本| 丝袜在线中文字幕| 久久久精品94久久精品| 国产精品久久久久久久电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产高清国产精品国产三级| 男女免费视频国产| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 中国国产av一级| 成人毛片60女人毛片免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品少妇久久久久久888优播| 男女边摸边吃奶|