蟬擬青霉多糖抗疲勞活性研究

劉　蕓，黃　鍇

（1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，貴州 銅仁 554300；2.貴州理工學(xué)院 干部科，貴州 貴陽 550003 ）

蟬擬青霉多糖抗疲勞活性研究

劉蕓1，黃鍇2

（1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，貴州 銅仁 554300；2.貴州理工學(xué)院 干部科，貴州 貴陽 550003 ）

為探明蟬擬青霉多糖抗疲勞的活性，將小鼠隨機分為空白對照組、陽性對照組、低劑量、中劑量和高劑量組。選擇測定小鼠負(fù)重游泳時間、血乳酸、血尿素氮和肝糖元四個指標(biāo)來確定蟬擬青霉多糖的抗疲勞效果。結(jié)果顯示：蟬擬青霉多糖，能延長小鼠游泳時間，降低小鼠運動后血清尿素氮的水平，緩解血乳酸的增量，增加肝糖原的儲備量；活性基本跟劑量的大小相關(guān)?？梢姡s擬青霉多糖具一定的抗疲勞功效。

蟬擬青霉；多糖；抗疲勞

1.引言

預(yù)防和消除疲勞的措施可以是多方面的，如自覺疲勞時應(yīng)停止運動盡快恢復(fù)；平時應(yīng)加強鍛煉，加強體內(nèi)的代謝，增強對疲勞耐力和調(diào)整；此外也可加強心理意志的鍛煉，盡量減輕或消除神經(jīng)系統(tǒng)疲勞［1］?？蛊诘母匾侄问茄a充能源和調(diào)節(jié)機體內(nèi)環(huán)境（特別是體液系統(tǒng)的不平衡）。許多中藥，如人參［2］、刺五加［3］、葛根［4］、黃芪［5］、枸杞［6］等，已經(jīng)被證明具有顯著的抗疲勞作用。

在研究藥物抗疲勞活性方面，很多指標(biāo)能反應(yīng)抗疲勞的能力。劇烈運動后一般可以肝糖原、血乳酸、血尿素氮（BUN）水平反映機體的疲勞程度。糖原的含量能說明疲勞發(fā)生的快慢或程度。血乳酸作為肌肉活動的主要代謝產(chǎn)物，是評價機體疲勞的重要標(biāo)志物；BUN與機體機能、疲勞程度以及負(fù)荷量的大小呈密切正相關(guān)，它可反映體內(nèi)蛋白質(zhì)分解情況［7］。

游泳或者負(fù)重游泳試驗是將小鼠放入水中強迫進行游泳掙扎，直到體力消耗殆盡、下沉10 s不起為止。計算自落水開始至鼻孔沉入水中的死亡時間即為小鼠游泳時間。負(fù)重游泳試驗運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最為有力的宏觀表現(xiàn)，游泳時間的長短能直接反應(yīng)動物運動疲勞的程度?？捎糜诠δ茉u價的生化指標(biāo)有肌乳酸、血乳酸、血糖、肝糖原、肌糖原、乳酸脫氫同工酶活力、血清尿素氮、血清尿酸和血紅蛋白等［8］。

2.材料與儀器

血尿素氮（BUN）測試盒（20100207南京建成生物工程研究所）；肝糖原測定試劑盒（20100106南京建成生物工程研究所）；乳酸測定試劑盒（20100110南京建成生物工程研究所）；蒸餾水（哇哈哈純凈水）；經(jīng)過純化后的多糖樣品（由本實驗室提取保存）。試驗動物（健康雄性昆明種小白鼠 50只，購于貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，體重18 g～22g，統(tǒng)一條件飼養(yǎng)）。TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用有限責(zé)任公司）；低速離心機（Eppendorf）；電子分析天平（奧豪斯（上海）公司）。

3.試驗與方法

3.1.一般性指標(biāo)觀測

每天觀察各組實驗小鼠的日常狀況，內(nèi)容包括：食欲，飲水，活動，被毛，糞便，尿液等。

3.2.動物分組

健康昆明種小白鼠50只，雄性，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，體重為20±2g。在實驗室條件下適應(yīng)飼養(yǎng)一周，飼養(yǎng)環(huán)境溫度保持在 25℃±1，室內(nèi)濕度控制在50 %，保持室內(nèi)自由通風(fēng)。隨機分為空白對照組、蟬擬青霉I組（200mg/kg）、蟬擬青霉Ⅱ組（400mg/kg）、蟬擬青霉Ⅲ組（800mg/kg），分別為人體推薦劑量的10倍、20倍、40倍。陽性對照組（抗疲勞保健食品）。每小組設(shè)計實驗動物10只，連續(xù)飼養(yǎng)給藥20天。

3.3.負(fù)重游泳

末次給予試驗用樣品 30min后，每只鼠尾根部負(fù)荷5%體質(zhì)量鉛皮，置于水深（30±1）cm，直徑為10cm，水溫（25±1）℃游泳箱中游泳，不時攪動水，使小鼠四肢保持運動，記錄自游泳開始至沉入水下10 s不能浮出水面時間。游泳時間的長短可以反應(yīng)動物運動疲勞的程度［1］。

3.4.采血方法

小鼠負(fù)重游泳30min，眼眶采血。

3.5.血乳酸測定

表1　血乳酸測定操作步驟

血清乳酸含量為：

式中：ODU表示測定管吸光值；ODB表示空白管吸光值；ODS表示標(biāo)準(zhǔn)管吸光值；CS表示標(biāo)準(zhǔn)濃度；

3.6.血尿素氮測定

表2　血尿素氮測定操作步驟

尿素氮含量（mmol/L）為：

式中：ODU表示測試管吸光值；ODS表示標(biāo)準(zhǔn)管吸光值；ODB表示空白管吸光值；C表示標(biāo)準(zhǔn)品濃度；N 為稀釋倍數(shù)。

3.7.肝糖元測定

取新鮮肝臟樣本，用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，取100mg稱重，與300uL體積的堿液一起加入試管中，沸水浴煮20min，流水冷卻。為將糖原水解液進一步變成糖原檢測液，加入9.6mL的蒸餾水。按表3測定吸光值?；靹蚝笾梅兴兄?min，冷卻后于620nm波長，1cm光徑，空白管調(diào)零，測定各管OD值。

表3　肝糖元測定操作步驟

糖元含量（mg/g）為：

式中：ODU表示測試管吸光值；ODS表示標(biāo)準(zhǔn)管吸光值；M表示標(biāo)準(zhǔn)管含量；N表示樣本測試前稀釋倍數(shù)；Y表示測試過程中稀釋倍數(shù)；1.11表示葡萄糖換算成糖元含量的系數(shù)，用 100ug糖元顯色相當(dāng)于111ug葡萄糖顯色。

3.8.小鼠免疫器官相對重量（臟體比值）測定

于末次給藥30 min 后，將小鼠脫頸處死，開腹，分別取出胸腺和脾臟。分析天平稱重，胸腺和脾臟與體重的比值，以 mg/g 表示。

3.9.試驗數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差顯示（X ± S），用SPSS11.5 進行方差分析統(tǒng)計組間差異。

4.結(jié)果與討論

4.1.小鼠數(shù)量

實驗納入小鼠數(shù)量為50只，實驗中無意外死亡、丟失及補充，進入結(jié)果分析小鼠數(shù)量為50只。

4.2.體質(zhì)量變化

在小鼠游泳時間、血乳酸、血尿素氮及肝糖原含量等指標(biāo)測定的4個實驗中，不同劑量組的體質(zhì)量與對照組比較，結(jié)果顯示：蟬擬青霉多糖對各項實驗的小鼠體質(zhì)量有一定影響，但不影響實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計。

4.3.負(fù)重游泳

由表4可知：P＜0.05，運動耐力的提高是抗疲勞能力加強的直接體現(xiàn)，游泳實驗顯示，蟬擬青霉多糖不同濃度的低、中、高劑量組均能延長小鼠的負(fù)重游泳時間，并呈劑量正反應(yīng)關(guān)系。游泳時間的長短可以反應(yīng)動物運動疲勞的程度［9］。蟬擬青霉多糖可以延長小鼠游泳時間，起到一定的抗疲勞功效。

表4　小鼠游泳時間比較（X ± S，n=5）

4.4.血乳酸檢測

由表5可知：P＜0.01，說明血乳酸含量在處理組和對照組之間有顯著性差異，蟬擬青霉多糖一定程度上緩解血乳酸的增加水平。

4.5.尿素氮檢測

由表6可知：P＜0.01，血尿素氮的變化在處理組和對照組之間有顯著性差異。隨著蟬擬青霉多糖劑量的增加，血尿素氮的水平降低。

表5　血乳酸含量比較（X ± S，n=5）

表6　血尿素氮含量比較（X ± S，n=5）

4.6.肝糖原檢測

由表7可知：P＜0.01，肝糖元的變化在處理組和對照組之間有顯著性差異。

表7　肝糖原含量比較（X ± S，n=5）

4.7.胸腺和脾臟重量與體重比值

表8　胸腺和脾臟重量與體重比值的比較（X ± S，n=5）

P＜0.05，蟬擬青霉多糖對胸腺和脾臟重量與體重比值有顯著的影響。

綜上所述，由表5、表6和表7可知：蟬擬青霉多糖在一定劑量下具有明顯的抗疲勞效果和作用。小鼠肝糖原水平的回升，體內(nèi)蛋白質(zhì)分解量的減少，游泳后尿素氮水平的上升幅度減小，表明蟬擬青霉多糖分子具有提高游泳動物肌糖原水平、減少體內(nèi)蛋白質(zhì)分解的功效，從而有效地延緩疲勞的發(fā)生和發(fā)展。小鼠的脾臟與體重比值和胸腺臟與體重比值均有不同程度的增加，且跟劑量基本成正比，說明蟬擬青霉多糖能顯著增加小鼠免疫器官的重量。目前認(rèn)為，物質(zhì)代謝因素導(dǎo)致疲勞產(chǎn)生的機制，有能量物質(zhì)耗竭、代謝產(chǎn)物堆積和內(nèi)環(huán)境平衡失調(diào)三種學(xué)說。乳酸的增加使肌肉中H+濃度上升、pH值下降，進而引起一系列生化反應(yīng)，是導(dǎo)致疲勞重要原因［10］。血清尿素氮是機體對運動適應(yīng)能力的重要指標(biāo)之一，研究結(jié)果表明血清尿素氮含量隨勞動及其運動負(fù)荷的增加而增加；機體對負(fù)荷適應(yīng)能力越差，血清尿素氮的增加越明顯［11］。BUN 是體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝的產(chǎn)物，其含量的高低直接反映體內(nèi)代謝情況。體內(nèi)蛋白質(zhì)的分解代謝加速，可導(dǎo)致BUN含量明顯增高。測定血液BUN可作為疲勞監(jiān)測的重要依據(jù)，運動后的BUN恢復(fù)的程度也常作為評價運動能力和疲勞恢復(fù)的主要參考指標(biāo)之一［12］。

本實驗中各種濃度的蟬擬青霉多糖，均能延長小鼠游泳時間，降低小鼠運動后血清尿素氮的水平，緩解血乳酸的增量，增加肝糖原的儲備量；并且活性效果基本跟劑量的大小相關(guān)。其機制可能與提高游泳動物血糖與肌糖原水平、改善能量代謝有關(guān)［13］。綜合 4種指標(biāo)，小鼠在服用蟬擬青霉多糖后抗疲勞效果顯著，這可為開發(fā)蟬擬青霉多糖功能性食品和藥物提供參考。

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Anti-fatigue Activity of Paecilomyce Cicadae

LIU Yun1，HUANG Kai2
（1. College of Pharmacy，Tongren Polytechnic College，Tongren，Guizhou 554300，China，2. Department of cadres，Guizhou Institute of Technology，Guiyang，Guizhou 550003，China ）

To prove the anti-fatigue function of Paecilomyces cicadae polysaccharide，the mice were allocated randomly into Blank control group，positive dosage group，low dosage group，medium dosage group and high dosage group，with selective determination of mice swimming time，blood lactic acid，blood urea nitrogen and liver glycogen four indicators to determine the fatigue effect to Paecilomyces cicadae polysaccharide. The results showed that Paecilomyces cicadae polysaccharide could prolong the swimming time of mice，decrease the level of serum urea nitrogen in mice after exercise，incremental ease of blood lactic acid，increase theamount of hepatic glycogen reserves. Therefore，there was anti fatigue effect of certain in Paecilomyces cicadae polysaccharide.

paecilomyces cicadae，polysaccharide，anti-fatigue

R392

A

1673-9639 （2015） 04-0015-04

（責(zé)任編輯 徐松金）（責(zé)任校對 毛志）（英文編輯 田興斌）

2014-09-11

本文系銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級科研基金項目“蟬擬青霉活性物質(zhì)的提取和活性研究”（Tzky-2011年-zk-03）成果。

劉蕓（1985-），女，貴州貴陽人，講師，碩士，研究方向：天然藥物提取。