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    巨菌草單寧成分的提取和測定

    2015-10-09 22:31謝焰鋒等
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年17期
    關(guān)鍵詞:正交試驗(yàn)單寧牧草

    謝焰鋒等

    摘要:以生長1、2、3個(gè)月的巨菌草(Pennisetum sinese)葉片為材料,探討巨菌草葉片單寧成分的提取方法和含量,單寧提取方法采用正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,單寧含量采用福林酚-比色法進(jìn)行測定。結(jié)果表明,巨菌草單寧最佳提取條件為丙酮體積分?jǐn)?shù)70%,提取溫度50 ℃,提取時(shí)間1 h。生長1、2、3個(gè)月的巨菌草葉片的單寧含量分別為8.47、10.44和12.59 mg/g,與其他牧草相比處于中間水平,且單寧含量隨生長時(shí)間的延長而增加,不同生長階段的單寧含量適合不同的動(dòng)物采食。

    關(guān)鍵詞:巨菌草(Pennisetum sinese);牧草;單寧;正交試驗(yàn)

    中圖分類號:S543+.9;TQ943+.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2015)17-4250-03

    巨菌草(Pennisetum sinese)是福建農(nóng)林大學(xué)菌草生物工程技術(shù)研究中心從非洲引進(jìn)的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌草,目前在中國福建、寧夏、廣西、浙江、新疆等多個(gè)省區(qū)和非洲、美洲的許多國家都有推廣種植。巨菌草是禾本科狼尾草屬(Pennisetum)的植物,可以在熱帶、亞熱帶和溫帶生長,是典型的C4植物,對光照和溫度有較高的需求,植株高大,生長快,產(chǎn)量高,抗逆性強(qiáng)[1-3]。巨菌草是多功能草,其用途廣泛,可以以草代木種植菌菇,作為生物材料來生產(chǎn)紙張、纖維板、活性炭等,用作生物質(zhì)能源發(fā)電的原材料,也可用作環(huán)境恢復(fù)和環(huán)境保護(hù)的優(yōu)良植物,此外作為牧草飼養(yǎng)畜禽也是它的一個(gè)重要用途[4-9]。巨菌草蛋白質(zhì)含量高,粗蛋白質(zhì)含量18.64%,精蛋白質(zhì)含量16.88%,糖分高,總糖含量8.3%,被稱為“飼草之王”[1]。巨菌草適口性好,葉片柔軟、脆嫩,是牛、馬、羊、豬、兔等家畜,雞、鴨、鵝等家禽和食草性魚喜愛的飼料[1,10]。

    單寧通常被認(rèn)為是牧草中的抗?fàn)I養(yǎng)因子,一是由于縮合單寧和蛋白質(zhì)、維生素、金屬離子等絡(luò)合,導(dǎo)致這些營養(yǎng)物質(zhì)不能被動(dòng)物吸收或者利用效率下降;二是單寧味苦具收斂作用,影響飼料的適口性,導(dǎo)致動(dòng)物的采食量下降;三是單寧會(huì)降低動(dòng)物對養(yǎng)分的消化率并影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。巨菌草作為優(yōu)質(zhì)牧草,其營養(yǎng)成分已經(jīng)有相關(guān)報(bào)道[1,10],但是作為抗?fàn)I養(yǎng)因子的單寧成分的提取工藝和含量測定尚未見報(bào)道。為了更全面地了解巨菌草作為牧草的優(yōu)缺點(diǎn),對不同生長時(shí)期巨菌草葉片中的單寧含量進(jìn)行了綜合分析,為更好地利用這一資源提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    植物材料:供試巨菌草樣品采自湖北省武漢市林業(yè)果樹科學(xué)研究所武湖基地,不同生長時(shí)期的巨菌草葉片采集后陰干,磨粉,儲(chǔ)藏備用。

    主要試劑:單寧標(biāo)準(zhǔn)品、福林酚試劑、碳酸鈉、丙酮、去離子水。

    主要儀器:i-9型雙光速紫外/可見分光光度計(jì)(海能儀器)。

    1.2 方法

    1.2.1 植物樣品的采集 分別采集生長了1、2、3個(gè)月的巨菌草成熟葉片,清洗后自然陰干,磨成粉末備用。

    1.2.2 單寧類物質(zhì)的提取 采用浸提法,以水-有機(jī)溶劑混合體系為提取溶劑進(jìn)行提取。在溶劑提取法中,提取時(shí)間、提取溫度和溶劑的選擇是影響單寧提取率的重要因素。本試驗(yàn)以生長3個(gè)月的巨菌草葉片為樣品,以丙酮/水為提取溶劑,以提取時(shí)間、提取溫度和丙酮體積分?jǐn)?shù)進(jìn)行3因素3水平正交試驗(yàn)(表1),獲得最佳提取方法。采用最佳方法,獲得其他生長時(shí)期的巨菌草葉片的提取液,供單寧含量測定。測定時(shí),準(zhǔn)確稱取0.5 g樣品,加入4 mL提取溶劑,在設(shè)定的溫度和時(shí)間下完成提取,轉(zhuǎn)移出所有提取液,定容到20 mL容量瓶,得到待測溶液。

    1.2.3 單寧含量的測定 采用福林酚-比色法測定巨菌草中單寧的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:精密稱取干燥的單寧酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg,用水定容到50 mL容量瓶中,配制成單寧酸溶液。精密量取單寧酸溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 mL分別置于25 mL容量瓶中,加水定容。精密量取各濃度溶液0.5 mL,分別置于10 mL試管中,先加入2.5 mL 10倍福林酚稀釋溶液,再加入2 mL 7.5%碳酸鈉溶液,搖勻,靜置30 min后,在760 nm處測定吸光度,并以吸光度為縱坐標(biāo),以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    提取液單寧含量測定:精密量取0.5 mL待測溶液,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的試驗(yàn)方法操作,在760 nm相同條件下測定吸光度,帶入回歸方程計(jì)算出巨菌草葉片中單寧質(zhì)量濃度,再按公式計(jì)算出總單寧含量。其計(jì)算公式為:單寧含量(mg/g)=提取液單寧質(zhì)量濃度×20/原料質(zhì)量。

    1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

    每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)重復(fù),按照正交試驗(yàn)得出的最優(yōu)方法進(jìn)行提取,提取液按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的試驗(yàn)方法操作,單寧含量測定結(jié)果采用ANOVA統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程

    以吸光度(y)為縱坐標(biāo),單寧酸質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo),繪制單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得出其回歸方程和回歸系數(shù)(圖1)?;貧w方程為:y=9.554 1x+0.028 6,回歸系數(shù)R2=0.997 9,線性范圍為0.02~0.22 mg/mL。

    2.2 巨菌草單寧含量正交試驗(yàn)結(jié)果

    由正交試驗(yàn)結(jié)果(表2)可知,因素A(丙酮體積分?jǐn)?shù))、因素B(提取溫度)和因素C(提取時(shí)間)的極差分別為2.70、2.28、0.60,因此可知,3因素對單寧含量的影響為丙酮體積分?jǐn)?shù)略大于提取溫度,而二者遠(yuǎn)大于提取時(shí)間。從表2還可以看出,因素A以三水平70%最佳,因素B以三水平50 ℃最佳,因素C以一水平1 h最佳。因此提取單寧的最佳提取方法是70%丙酮在50 ℃下提取1 h。

    2.3 不同生長階段巨菌草單寧含量測定

    由表3可知,巨菌草葉片單寧含量隨著生長時(shí)間呈上升趨勢,生長1、2、3個(gè)月的巨菌草葉片的單寧含量分別為8.47、10.44和12.59 mg/g。

    3 討論

    本研究通過正交試驗(yàn)優(yōu)化了巨菌草單寧提取方法,與李學(xué)強(qiáng)等[11]對歐李種殼中單寧提取條件相比,各因素對單寧提取的影響程度均為丙酮體積分?jǐn)?shù)>提取溫度>提取時(shí)間,對于最佳提取方法,歐李種殼中單寧是用70%丙酮在60 ℃下提取5 h,而本試驗(yàn)是用70%丙酮在50 ℃下提取1 h,可以看出二者所用最佳丙酮體積分?jǐn)?shù)一致;而提取溫度略有差異,考慮到丙酮的沸點(diǎn)為56.48 ℃,本研究的50 ℃更為合理;最佳提取時(shí)間與文獻(xiàn)相比存在差異,考慮到提取時(shí)間對得率影響不顯著,提取1 h更為經(jīng)濟(jì)。

    研究測定得到巨菌草生長1、2、3個(gè)月時(shí)葉片的單寧含量分別為8.47、10.44和12.59 mg/g,高于黑麥草(0.9~1.8 mg/g)[12]、紅三葉(1.2 mg/g)[13]、菊苣(1.71 mg/g)[13],與車前草(14.10 mg/g)[13]、苔草(6.7 mg/g)[14]相當(dāng),低于牛角花(46.20 mg/g)[13]、珠芽蓼(120.2 mg/g)[14]、紅豆草(13.42~34.48 mg/g)[15,16]、百脈根(20~110 mg/g)[17]??傮w來說,巨菌草單寧含量與其他牧草相比處于中間水平。

    單寧含量是影響牧草適口性的重要因素,當(dāng)牧草干物質(zhì)中的單寧含量達(dá)到1%以上時(shí),會(huì)出現(xiàn)苦澀味,降低適口性,當(dāng)含量高于2%時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生阻食作用[16-18]。對肉豬和禽類,飼料單寧含量以0.5%~1.0%為宜[18];而對于反芻動(dòng)物,其對單寧耐受性較高,有研究證實(shí)3%或5%以內(nèi)是有益水平[16,17]。巨菌草適口性好,可用于飼喂牛、羊、豬、兔、鵝、鴨等草食畜禽和草食性魚類。而在生產(chǎn)中一般巨菌草生長1個(gè)月較嫩的時(shí)候喂養(yǎng)豬、兔和鵝等畜禽,在生長2~3個(gè)月時(shí)喂養(yǎng)羊、牛等牲畜。本試驗(yàn)證實(shí)巨菌草葉片單寧含量在1個(gè)月時(shí)為8.47 mg/g,即0.85%,較適合飼養(yǎng)肉豬和禽類,在生長2個(gè)月和3個(gè)月時(shí)分別為10.44和12.59 mg/g,即1.04%和1.26%,較適合飼養(yǎng)反芻動(dòng)物,其變化規(guī)律和巨菌草在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用相吻合。

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