至寶咳喘膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊榮艷，劉琬暉，王燕

(四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000)

·中藥工業(yè)·

至寶咳喘膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊榮艷*，劉琬暉，王燕

(四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平136000)

目的：建立至寶咳喘膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法(TLC)鑒別至寶咳喘膠囊中的梔子、黃芩、陳皮；采用高效液相色譜法(HPLC)測定梔子苷的含量。結(jié)果：薄層鑒別斑點(diǎn)清晰；梔子苷平均加樣回收率為99.5%，RSD=1.03%。結(jié)論：所建立的方法操作簡便、重復(fù)性好，可作為至寶咳喘膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

至寶咳喘膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；梔子苷

至寶咳喘膠囊是吉林省四平市骨質(zhì)增生醫(yī)院多年臨床經(jīng)驗(yàn)方，由梔子、黃芩、陳皮、茯苓、瓜蔞、桔梗等11味中藥組成，具有補(bǔ)肺益氣、健脾祛痰、益腎納氣、止咳平喘等功能。用于慢性支氣管炎、支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、肺氣腫、肺心病等。目前尚缺乏有效的質(zhì)量控制方法，為了有效控制該制劑的質(zhì)量，保證其臨床療效，本文參照《中華人民共和國藥典》2010版一部，采用薄層色譜法(TLC)對方中的梔子、黃芩、陳皮進(jìn)行薄層鑒別，獲得滿意結(jié)果；本文參照文獻(xiàn)[1-7]，采用高效液相色譜法(HPLC)測定該制劑中梔子苷的含量，此方法簡便、快速、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

1.1儀器

島津LC-2010AHT型全自動高效液相色譜儀、CLASS-VP色譜工作站、UV-2450可見-紫外分光光度計(jì)、紫外檢測器；BT125D型電子分析天平(北京賽多利斯)；LC-250超聲清洗器(功率為250W，頻率為50kHZ，昆市超聲儀器有限公司)；純水器(德國)。

1.2試藥

至寶咳喘膠囊(四平市骨質(zhì)增生醫(yī)院，批號分別為20140303，20140304，20130405)；梔子、黃芩、陳皮對照藥材、梔子苷對照品、黃芩苷對照品、橙皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為120986-201108，120955-201008，120969-201109，110749-201115，110715-201318，110721-201115；市售硅膠G板(青島海洋化工有限公司，批號：20131126)；聚酰胺薄膜(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20130422)；乙腈(天津康科德科技有限公司，色譜純)；其他試劑均為分析純；水為實(shí)驗(yàn)室自制的超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1梔子的鑒別 取本品粉末2.5g，加乙醇25mL，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取梔子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取梔子苷對照品，加乙醇制成質(zhì)量濃度為2g·L-1的溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含梔子的陰性樣品，同上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾，見圖1。

注：1～3.供試品；4.梔子對照藥材；5.梔子苷對照品；6.陰性對照。圖1 至寶咳喘膠囊中梔子薄層色譜圖

2.1.2黃芩的鑒別 取2.1.1梔子的鑒別項(xiàng)下的供試品溶液。另取黃芩對照藥材1g，照2.1.1梔子的鑒別項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1g·L-1的溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含黃芩的陰性樣品，同上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾，見圖2。

注：1～3.供試品；4.黃芩對照藥材；5.黃芩苷對照品；6.陰性對照。圖2 至寶咳喘膠囊中黃芩薄層色譜圖

2.1.3陳皮的鑒別 取本品粉末3g，加甲醇40mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，棄去乙醚液；水溶液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL，使其溶解，作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材1g，加甲醇20mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL，使其溶解，作為對照藥材溶液。再取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。按其處方比例制備不含陳皮的陰性樣品，同上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部 附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶10)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，加熱5min，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾，見圖3。

注：1～3.供試品；4.陳皮對照藥材；5.橙皮苷對照品；6.陰性對照。圖3 至寶咳喘膠囊中陳皮薄層色譜圖

2.2含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：島津WondaCractODS-2C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-水(10∶90)；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：238nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2.2對照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對照品適量，加70%甲醇制成質(zhì)量濃度為40μg·mL-1的溶液，即得[1]。

2.2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量。用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4陰性制劑及陰性對照液的制備 按處方組成比例制備梔子陰性制劑，再按供試品溶液的制備方法，制備梔子陰性對照溶液。

2.2.5系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在選定的色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果梔子苷與其相鄰峰之間分離度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05，陰性樣品不干擾測定。理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算不低于7000[1]，見圖4。

注：A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.梔子苷。圖4 至寶咳喘膠囊高效液相色譜圖

2.2.6線性關(guān)系考察 分別精密量取梔子苷對照品儲備液(質(zhì)量濃度為101.9μg·mL-1)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL至10mL量瓶中，分別加70%甲醇至刻度，搖勻，制成梔子苷標(biāo)準(zhǔn)系列濃度溶液。分別精密吸取上述溶液各10μL進(jìn)樣，在2.1.2色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，以梔子苷峰面積Y對濃度X(μg·mL-1)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=2.71×104X-2862.8，r=0.9999，結(jié)果表明梔子苷在5.095～81.52μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0、2、4、8、16h進(jìn)樣，按2.2.1色譜條件分析，以梔子苷峰面積計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD=1.03%。表明梔子苷樣品溶液至少在16h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8精密度試驗(yàn) 取梔子苷對照品溶液，在2.2.1色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.3%。

2.2.9重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號樣品(批號：20140303)5份，照2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1色譜條件測定梔子苷含量，計(jì)算得RSD為1.15%。表明本法重復(fù)性良好。

2.2.10回收率試驗(yàn) 取己知含量的本品粉末(批號：20140303)6份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入一定量的對照品溶液，按2.2.3供試品溶液的制備項(xiàng)下方法操作，在2.2.1色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收率測定結(jié)果

2.2.11 樣品的測定 按供試品制備方法，每批樣品制備兩份，測定梔子苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

至寶咳喘膠囊為中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，各成分之間干擾較嚴(yán)重。通過多次試驗(yàn)篩選出合理的供試品溶液制備方法和色譜分離系統(tǒng)，對其中主要藥味梔子、黃芩、陳皮進(jìn)行薄層鑒別，對梔子中的梔子苷進(jìn)行含量測定。3批樣品測定表明，該方法簡便易行，薄層色譜斑點(diǎn)分離清晰，重復(fù)性好，陰性對照無干擾，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

3.1黃芩的鑒別

在黃芩的薄層色譜鑒別中，參照了《中華人民共和國藥典》(2010版一部)“牛黃解毒片”中黃芩的薄層色譜條件，試驗(yàn)中考察了甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)兩種展開系統(tǒng)，聚酰胺薄膜[8]、硅膠G薄層板兩種吸附劑。結(jié)果在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)展開劑系統(tǒng)為展開劑薄層效果較好，試驗(yàn)結(jié)果斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。

3.2陳皮的鑒別

在陳皮的薄層色譜鑒別中，參照了《中華人民共和國藥典》(2010版一部)，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑時，背景干擾嚴(yán)重，增加了乙醚脫脂處理，薄層斑點(diǎn)更加清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾。

3.3色譜條件的考察

梔子苷的含量測定色譜條件：考察了不同品牌色譜柱ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)、GalaksilBF-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)和WondaCractODS-2C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，結(jié)果這3種色譜柱分離效果差異不大；考察了流動相的不同比例對分離度和峰形的影響：乙腈-水(15∶85)、(13：87)、(10∶90)。結(jié)果表明，乙腈-水(10∶90)最理想，不僅使色譜峰峰形好，而且與相鄰雜峰的分離度均大于1.5。

3.4提取溶劑和提取方式的考察

對樣品進(jìn)行提取溶劑和提取方式的考察，分別以甲醇[4]、70%甲醇[1-3]為提取溶劑，超聲30min，回流30min。結(jié)果兩種溶劑、兩種提取方式梔子苷含量無明顯差異。為了減少試劑毒性、節(jié)約能源且操作方便，筆者選取70%甲醇為溶劑，超聲處理30min。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 師永花，師永清.HPLC法同時測定黃連上清丸中梔子苷和黃芩苷的含量[J].藥物分析雜志，2012，26(07)：747-749.

[3] 宋靜，于霄，熊立志，等.多波長高效液相色譜法同時測定梔子厚樸湯醇提液中6個主要成分的含量[J].藥物分析雜志，2011，31(09)：1664-1667.

[4] 王濤.HPLC法同時測定黃連解毒湯中3種有效成分的含量[J].中國藥房，2009，20(18)：1410.

[5] 周蘭，羅曼，熊慧林.HPLC法測定清熱解毒口服液中梔子苷的含量[J].藥物分析雜志，2011，31(11)：2168-2170.

[6] 王謙，唐燦，姚健，等.各梔子主產(chǎn)區(qū)梔子中梔子苷含量的比較研究[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，32(2)：133.

[7] 楊全軍，范明松，孫兆林，等.梔子化學(xué)成分、藥理作用及體內(nèi)過程研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2010，13(9)：7-12.

[8] 高詠莉，謝秋霞，熊英.三九胃泰顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥師，2009，12(6)：691-693.

StudiesonQualityControlStandardofZhibaoKechuanCapsules

YANGRongyan*，LIUWanhui，WANGYan

(SipingCityInstituteforFoodandDrugControl，SipingJilin136000，China)

Objective：To establish a method for quality control of Zhibao Kechuan Capules.Methods：TLC was employed to identify three crude herbal elements in Zhibao Kechuan Capules and the content of Geniposide was determined by HPLC.Results：The spot developed on TLC was fairly clear.The average recovery of Geniposide was99.5% with RSD of1.03%.Conclusion：The method is reliable，simple and can be used for the quality control of Zhibao Kechuan Capsules.

Zhibao Kechuan；TLC；HPLC；geniposide

*

楊榮艷，副主任藥師，研究方向：中藥材、中成藥的檢驗(yàn)工作；E-mail：yry_lg@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.12.024

2015-01-16)