苦參不同部位有效成分含量比較研究

關扎根，吳尚英，郭寶林，魏紅國，王玉龍，楊霞

(1.山西振東道地藥材開發(fā)有限公司，山西 長治 047100；2.長治縣農業(yè)委員會，山西 長治 047100；3.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193)

·基礎研究·

苦參不同部位有效成分含量比較研究

關扎根1，吳尚英2，郭寶林3*，魏紅國1，王玉龍1，楊霞1

(1.山西振東道地藥材開發(fā)有限公司，山西 長治 047100；2.長治縣農業(yè)委員會，山西 長治 047100；3.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193)

目的：比較苦參不同采收部位中的苦參總生物堿含量，為苦參栽培資源的合理利用提供依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法分析不同年限苦參不同部位中苦參堿和氧化苦參堿的含量。結果：苦參堿和氧化苦參堿的總量在不同年限苦參不同部位的分布具有類似的規(guī)律性，側根下部>側根上部>主根>橫生根狀莖(地中莖)>莖芽。主根上部和下部的含量差異不顯著，但主根與側根下部的有效成分含量差異較大；苦參生長的第1年、第2年生物堿含量均有較大增長，3年生苦參含量均能達到《中華人民共和國藥典》標準。結論：3年采收苦參較為合理，且3年生材料中地中莖和莖芽的生物堿含量也比較高，可以多途徑利用。

苦參；不同采收部位；苦參總生物堿含量；高效液相色譜法

苦參SophoraflavescensAit.為豆科槐屬植物，是我國傳統(tǒng)藥用植物，以根入藥，始記載于《神農本草經(jīng)》，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿的功能[1-2]。在臨床治療疾病方面，苦參是處方飲片和成方制劑的重要組成原料，同時也用于生產日化用品、消毒劑、生物農藥和獸藥等。十多年來，山西振東道地藥材開發(fā)有限公司在山西長治武鄉(xiāng)、沁縣、屯留等地實現(xiàn)了苦參的規(guī)?；耘?，并于2009年通過了GAP認證。種植田采挖的3年生苦參，去掉地上的枯萎莖稈，由主根、側根、橫生根狀莖(地中莖)和次年將萌發(fā)的莖芽組成，可將不同的部位分開加工成不同等級的藥材，但各自質量有待評價。有文獻報道了苦參不同部位的生物堿含量[3]，具有一定的參考意義，但對于苦參產地加工分級及相應的質量尚不能起到指導作用，本文將根據(jù)實際應用進行藥材部位劃分，并分別測定苦參堿和氧化苦參堿的含量，也將有助于苦參的合理利用，同時比較各部位不同種植年限的含量變化，探討苦參根部各段的有效成分含量變化規(guī)律。

1 儀器與材料

1.1儀器

安捷倫1260HPLC色譜儀；CleanertAlumina-N-SPE固相萃取柱(Agela公司)；SHANGPINGFA2104電子天平；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2材料

乙腈(色譜純，美國Honeywell公司)，無水乙醇(色譜純，天津市四友有限公司)，其他試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。苦參堿對照品(批號：110805-200508)、氧化苦參堿對照品(批號：110780-201007)購自中國食品藥品檢定研究院。

苦參樣品來自于山西振東道地藥材開發(fā)有限公司苦參GAP基地種植的苦參。

2 方法與結果

2.1樣品處理

2014年11月采挖1、2、3年生苦參根各20根，清洗干凈，將其分為莖芽、地中莖、主根上部(距頂部10～12cm段)、主根下部(距頂部12～25cm段)、側根上部(距與主根分支處4～7cm段)及側根下部(距與主根分支處7～12cm段)6個部分，干燥，粉碎，備用。

2.2色譜條件

VenusilXBPNH2色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，檢測波長：220nm，流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液(80∶10∶10)，流速：1.0mL·min-1，進樣量：10μL[4]。

2.3對照品溶液的配制

精密稱取苦參堿對照品25.0mg、氧化苦參堿對照品24.7mg，分別加乙腈-無水乙醇(80∶20)溶解定容到50mL量瓶中作為混合對照品溶液。

2.4供試品溶液的制備

取苦參藥材粉末(過3號篩)約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，超聲處理30min，放冷，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，通過中性氧化鋁柱SPE小柱(5g，容積6mL，內徑1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)各5mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，并轉移至10mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，測定[5]。

2.5標準曲線制備

分別精密吸取苦參堿對照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.5mL及氧化苦參堿對照品溶液0.75、1.50、3.0、4.5、6、7.5mL定容到10mL容量瓶中作為供試液。吸取上述供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定。以對照品溶液質量濃度為橫坐標(X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得苦參堿回歸方程為Y=4×106X+5400，r=0.9997，在0.125～1.102μg線性關系良好；氧化苦參堿回歸方程為Y=5×106X-7838，r=0.9999，在0.370～3.713μg線性關系良好。

2.6精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，測定峰面積值?？鄥A和氧化苦參堿峰面積的RSD分別為2.6%和1.7%，表明儀器的精密度較好。

2.7穩(wěn)定性試驗

取3年生苦參主根上部藥材供試品溶液，分別于0、1、2、3、5、6、7、10、12、24h精密吸取10μL注入液相色譜儀，測定峰面積值。結果苦參堿和氧化苦參堿的RSD值分別為3.9%、1.3%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.8重復性試驗

取3年生苦參主根上部樣品粉末共6份，按供試品溶液制備方法制備，分別測定峰面積值，結果苦參堿和氧化苦參堿的RSD分別為2.6%、1.8%，表明本方法重復性良好。

2.9加樣回收率試驗

精密稱定已測定含量的3年生苦參主根上部樣品粉末0.15g，共6份，于每份樣品中分別加入苦參堿對照品和氧化苦參堿對照品，按2.4制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定?？鄥A和氧化苦參堿的平均加樣回收率分別為99.8%、101.1%，RSD分別為4.0%、0.60%。

2.10含量測定

取不同生長年限苦參藥材不同部位粉末，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定不同部位苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿的含量，結果見表1，對照品和樣品的HPLC圖見圖1。

表1 不同生長年限苦參不同部位中苦參堿和氧化苦參堿含量測定(n=3)

注：A.苦參堿與氧化苦參堿混合對照品；B.樣品；1.苦參堿；2.氧化苦參堿。圖1 苦參樣品及對照品HPLC圖

3 結論

結果表明，對于總生物堿含量來說，苦參堿的含量貢獻較小，主要來自于氧化苦參堿。3年生苦參不同部位的苦參堿和氧化苦參堿的總量大小依次為：二級側根下部>二級側根上部>一級側根≈主根>地中莖>莖芽，表明以主根和一級側根構成的苦參片含量比較穩(wěn)定，而細分的側根表現(xiàn)為含量更高，值得深度開發(fā)利用。地中莖和莖芽也有一定的生物堿含量，也可利用，建議和側根分開等級。為了保證苦參飲片的品質均一性，實現(xiàn)苦參不同部位的最大價值，在苦參加工過程中，應將主根和一級側根作為苦參片的主要原料，二級側根作為一級下腳料，莖芽和地中莖作為二級下腳料，或者根據(jù)需求再細分，分級進行加工銷售。導致主根和側根中苦參生物堿含量的差異，文獻報道稱原因為從韌皮部到髓部生物堿的含量呈現(xiàn)逐漸遞減的趨勢[6]，有待本研究組從組織化學的角度進行進一步研究。

1、2年生的苦參各部位的苦參堿和氧化苦參堿總含量規(guī)律類似。從1、2、3年生苦參主根的生物堿含量分析，各年度同部位之間生物堿累積呈現(xiàn)明顯增多的趨勢，見圖2。3年生苦參的生物堿積累量比1年生增長約75%，3年生苦參的生物堿積累量比2年生增長約101%，說明苦參第3年的生物堿積累有較大的增長。按照《中華人民共和國藥典》標準(1.2%)，2年生苦參僅有側根達標，因此不宜藥用，而3年生苦參的各部位均達到或者基本達到標準，但為了保證藥用部位符合標準，主根、各級側根均可作為苦參藥用，而地中莖和莖芽建議作為其

注：3年生側根指二級側根。圖2 不同生長年限苦參不同部位的苦參堿和氧化苦參堿含量變化

他原料應用。有文獻研究表明4年生苦參的生物堿含量主根部分反而較3年生苦參有所降低[3]，因此從經(jīng)濟效益和有效成分含量來考慮，苦參的最佳采收年限為3年。

[1] 郭吉剛，關扎根.苦參生物學特性及栽培技術研究[J].山西中醫(yī)學院學報，2005，6(2)：45-47.

[2] 戰(zhàn)渤玉，李東霞，高明.苦參的現(xiàn)代研究進展[J].中醫(yī)藥信息，2009，26(1)：23-24.

[3] 陳靜，王淑美，孟江等.不同生長年限苦參不同部位的生物堿含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(7)：80-84.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：188.

[5] 楊霞，郭寶林，胡紅宇，等.氧化鋁固相萃取小柱在苦參堿含量測定中的應用[J].中國中藥雜志，2013，38(17)：2844-2847.

[6] 陳靜，孫飛，孟江等.苦參不同組織部位的生物堿含量研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9(1)：22-25.

ComparativeStudyonActiveIngredientContentinDifferentPartsofSophoraflavescens

GUANZhagen1，WUShangying2，GUOBaolin3*，WEIHongguo1，WANGYulong1，YANGXia1

(1.ShanxiZhengdongPharmaceuticalCo.，Ltd.，Changzhi047100，China；2.Changzhicountyagriculturecommittee，Changzhi047100，China；3.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalcollege，Beijing100193，China)

Objective：To measure the total alkaloid content in different parts ofS.flavescensand provide a reference for reasonable utilization ofS.flavescens.Methods：The total alkaloid content in different parts ofS.flavescensof different growth years were analyzed by HPLC.Results：The total alkaloid content in different parts ofS.flavescensof different growth years had the similar rule，which was in following order：lower lateral root>upper lateral root>main root> underground stem>stem eye. The content of the total alkaloid inS.flavescenswas not significantly different between the upper main root and the lower main root，which were significantly different between the main root and the lower lateral root. The total alkaloid content increased largely in the second year and the third year，the third year can reach pharmacopoeia standards.Conclusion：Three years harvest is more reasonable，and the total alkaloid content in the three years in the underground stem and stem eye is higher.

Sophoraflavescens；different harvested parts；total alkaloid content；HPLC

*

郭寶林，研究員，博士，研究方向：藥用植物資源，Tel：(010)57833172，E-mail：guobaolin010@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.12.010

2015-02-03)